全 文 ：Journal of Medical Science Yanbian University　Mar.2008 Vo l.31 No.1
■延边大学医学部 2004 级临床医学系学生
[ 收稿日期] 　2007-12-04
[ 作者简介] 　许青松(1964—), 男(朝鲜族), 副教授 , 医学硕
士 ,研究方向为应用生理学.
核桃叶提取液对衰老模型小鼠记忆力的影响
许青松 ,孟宇■ ,陈新用■ ,宋卫锋■ ,贺永贵 ,兰艳
(延边大学基础医学院 生理学与病理生理学教研部 长白山生物功能因子省部共建教育部重点实验室 , 吉林 延吉 133000)
[ 摘要] 　 [目的] 观察核桃叶提取液对小鼠记忆功能的影响.[ 方法] 将 84 只小鼠随机分为空白对照
组 、模型组 、维生素 E 组和核桃叶提取液大 、中 、小剂量组 , 每组各为 14 只.给予小鼠皮下注射 D-半乳糖
建立衰老模型 ,核桃叶提取物各剂量组灌胃给予相应剂量的核桃叶提取液 , 30 d 后利用 Morris 水迷宫
仪观察小鼠记忆能力.[ 结果] 与模型组比较 ,核桃叶提取液各剂量组小鼠搜索站台的潜伏期均明显缩
短 ,而穿越站台的次数则明显增加.[结论] 核桃叶对 D-半乳糖所致衰老模型小鼠的记忆功能具有一定
的改善作用.
[ 关键词] 　抗衰老药(中药);植物 , 药用;小鼠
[ 中图分类号] 　R 285.5　　　[ 文献标识码] 　A　　　[ 文章编号] 　1000-1824(2008)01-0022-03
Effects of the Walnut leaf extract for memory in senescence model 　
of mice
XU Qing-song , MENG Yu■ , CHEN Xin-yong■ , SONGWei-feng■ , HE Yong-gui , LAN Yan
(Department of Phy siolog y and Pathophysiology , Yanbian University College of Basic Medicine , Key Laboratory o f
Organism F unctional Factors o f the Changbai Mountain , Ministry o f Education , Yanj i 133000 , J i lin , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE T o observe the ef fects of theWalnut lea f fo r memory in mouse.METHODS The
senescence model of mice w as established by subcutaneous inject ion wi th the D-galacto se.Total 84 m ice
were randomly divided into control g roup , model group , Vitamin E group and large , medium and small
do se of the Walnut lea f ex tract g roups.The mice w ere given by intragast ric administ rat ion w ith different
do se of the Walnut lea f ext ract fo r thirty day s , and then the ability of memory w as examined by the
Mo rris w ater maze.RESULTS The latent period of searching platform w as sho rtened and explo ra to ry
behavior w as enhanced in every medication g roup as compared wi th the model g roup.CONCLUSION The
Walnut lea f ex t ract has some ef fects o f improving the memo ry in senescence model of mice induced by
D-g lactose.
Key words:ant iag ing drug s(TCD);plants , medicinal;mice
　　核桃叶别名为胡桃叶 , 为胡桃科植物胡桃
(J uglans regia L)的叶.研究表明 ,核桃叶具有较好
的体外抗菌作用 ,还具有抑制肿瘤细胞生长的作
用[ 1 , 2] .本实验采用 D-半乳糖制作小鼠衰老模型 ,利
用Morris水迷宫仪观察了核桃叶提取液对小鼠记忆
功能的影响 ,旨在为核桃叶的临床应用提供依据.
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DOI :10.16068/j.1000-1824.2008.01.005
延边大学医学学报　2008 年 3 月　第 31卷　第 1期
1　材料与方法
1.1　材料　实验动物取健康昆明种小鼠 ,雌雄各
半 ,体重为(20±2)g ,由延边大学医学部实验动物科
提供.核桃叶水提取液:采集长白山地区核桃叶 ,晒
干 ,粉碎 ,加水浸泡 24 h ,水煎提取 4 次 ,合并提取
液 ,浓缩得质量浓度为 10 g/L 的核桃叶生药;D-半
乳糖为国药集团化学试剂有限公司产品;维生素 E
为浙江医药股份有限公司产品.Morris水迷宫视频
分析系统及 Dig Behv 动物行为分析系统为上海吉
量软件科技有限公司产品.
1.2　方法
1.2.1　动物分组及处理　取 84只健康昆明种小
鼠 ,雌雄各半 ,适应环境 1周后按体重随机分为 6个
组 ,即空白对照组 、模型组 、维生素 E 组和核桃叶提
取液大 、中 、小剂量组 ,每组各为 14只.每日给予除
空白对照组外的其他各组小鼠皮下注射 D-半乳糖
0.12 g/kg , 给予 空白 对照 组小 鼠皮下 注 射
50 mL/kg生理盐水.同时 ,每日分别灌胃给予核桃
叶水提取液大 、中 、小剂量组小鼠核桃叶水提取液
12 ,6 ,3 g/kg ,灌胃给予维生素 E 组小鼠维生素 E
100 mg/kg ,模型组和空白对照组每日灌胃给予
100 mL/kg蒸馏水 , 连续 30 d.于第 31 日起利用
Morris水迷宫视频分析系统和 Dig Behv 动物行为
分析系统软件测试记忆能力.
1.2.2　动物的训练与测试 　本实验所用的通用
Morris水迷宫是直径为 120 cm ,高为 50 cm 的圆形
水池 ,其内壁为黑色 ,池内水深为 22 cm ,水温保持
在(22±2)℃,房间内光照恒定 ,无光线反射在水面.
池壁上以 4 个等距离点 ,即东(E)、南(S)、西(W)、
北(N)将水池分为 4 个象限 ,分别称为 SW , NW ,
S E ,N E象限.在 NE 象限正中 ,距池壁 30 cm 处放
置 1个直径为 6 cm ,高为 21.5 cm 的圆形黑色站台 ,
站台低于水面 0.5 cm ,迷宫上方安装着连接显示系
统的摄像机.训练时间为 4 d ,每日分上 、下午时间
段 ,其中上午为 8:00 ～ 10:00 , 下午为 13:00 ～
15:00 ,每个时间段内每组小鼠均连续训练 2次 ,其
间隔不短于 10 min.训练时将小鼠在南(S)点面向
池壁放入水中 ,开始计时 ,若小鼠在 60 s内搜索到
站台并停留 10 s ,则以其后的时间为潜伏期;若小鼠
在 60 s内未搜索到站台 ,则将其引至站台并停留
10 s ,潜伏期记录为 60 s[ 3] .于实验第 6 日检测各组
小鼠长时程记忆功能 ,内容包括定位游泳和空间搜
索.游泳实验时选择 SW象限的中心作为入水点 ,将
小鼠面向池壁放入水中 ,检测小鼠寻找站台的潜伏
期.间隔 10 min后撤除站台 ,进行空间搜索实验.将
站台撤除后 ,同样选择 SW 象限的中心作为入水点 ,
将小鼠面向池壁轻轻放入水中 ,观察并记录 60 s内
小鼠穿越原站台位置的次数.
1.2.3　统计学处理　小鼠运动轨迹及测试结果的
显示处理均采用上海吉量软件科技有限公司研制的
动物行为分析软件.所有数据从 Mor ris水迷宫分析
系统数据库中调出 ,以均数±标准偏差( x ±SD)表
示 ,组间比较采用 t 检验 ,统计学处理采用 SPSS
10.0软件进行.
2　结果
2.1　各组小鼠定向游泳时潜伏期的比较　各组小
鼠不同训练时段的潜伏期见表 1.模型组与对照组
相比较 ,第 1 ～ 4日的潜伏期及平均潜伏期间无显著
性差异(P >0.05);核桃叶提取液大 、中 、小剂量组
小鼠第 1日的潜伏期较模型组明显缩短 ,相比较均
有显著性差异(P <0.05),第 2 , 3 , 4日的潜伏期及
平均潜伏期间无显著性差异(P >0.05).
2.2　各组小鼠记忆力的比较　于实验第 6日检测
小鼠形成的空间记忆 ,结果见表 2.由表 2 可见 ,与
空白对照组相比 ,模型组小鼠搜索站台的潜伏期和
穿越站台的次数不同程度地延长和增多 ,其中搜索
站台潜伏期的变化间有显著性差异(P <0.05),提
示模型制作成功.与模型组比较 ,维生素 E 组小鼠
穿越站台的次数明显增多 ,组间比较有显著性差异
(P<0.01),但搜索站台的潜伏期间无显著性差异
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(P>0.05);各剂量核桃叶提取液组小鼠穿越站台
的次数均明显增加 ,搜索站台的潜伏期均明显缩短 ,
与模型组比较均有显著性差异(P <0.05 , P <
0.01).
表 1　各组小鼠定向游泳实验中潜伏期的比较( x±SD)
s　
组别 潜伏期第 1日 第 2日 第3 日 第 4日 平均
空白对照组 29.60±9.90 36.27±11.66 30.77±12.10 31.40±15.16 32.01±12.18
模型组　　 32.74±9.17 35.27±12.74 35.36±13.01 31.25±12.80 33.66±11.93
维生素E组 30.57±8.96 36.54±12.71 34.08±14.48 28.68±15.52 33.82±12.92
核桃叶　　
大剂量组　26.10±6.78＊ 37.50±10.44 37.10±16.30 32.85±16.58 33.39±12.53
核桃叶　　
中剂量组　26.84±8.28＊ 36.18±10.88 34.88±12.79 34.13±13.50 33.01±11.36
核桃叶　　
小剂量组　26.91±7.18＊ 34.75±9.67 33.92±11.94 29.68±18.20 31.32±11.75
＊与模型组比较 , P<0.05
表 2　各组小鼠空间搜索能力的比较( x±SD)
组别　　　 剂量/(g/ kg)
搜索站台
潜伏期/ s
穿越站台
次数/次
空白对照组 — 19.33±12.4＊ 0.50±1.65
模型组 — 32.81±12.92 0.36±1.79
维生素 E组　 0.1 27.10±12.86 2.21±2.36＊＊
核桃叶大剂量组 12 15.33±8.83＊＊ 1.86±1.63＊＊
核桃叶中剂量组 6 13.48±18.33＊＊ 1.08±1.08＊
核桃叶小剂量组 3 12.99±2.11＊＊ 1.04±1.04＊
与模型组比较 , ＊P<0.05 , ＊＊P<0.01
3　讨论
学习记忆是脑的重要功能 ,药物可直接作用于
各种记忆过程 ,同时机体的各种精神活动如情绪 、动
机 、内分泌 、活动水平及应激状态等也可间接影响记
忆过程.D-半乳糖对学习记忆能力的影响在于代谢
产物半乳糖醇在体内不能被进一步代谢而堆积在细
胞内 ,影响渗透压导致细胞肿胀 、代谢紊乱及体内活
性氧水平升高 ,导致细胞膜脂质受损 ,出现脑神经元
退行性变化 ,包括神经元数目减少 、脑组织中 SOD
活性下降 、MDA 及脂褐素浓度升高 、B 型单胺氧化
酶(MAO-B)活性增高等变化 ,表现为学习记忆能力
下降 ,这种变化与自然老龄小鼠相似[ 4] .学习记忆过
程较复杂 ,而它的神经基础是神经元之间的连接 ,并
依靠突触结构 、形态和功能的可塑性及合成学习记
忆信息传递的载体 ,如乙酰胆碱 、儿茶酚胺 、γ-氨基
丁酸 、神经肽等神经递质有关[ 5] .这些学习记忆过程
中必需的神经递质又与各种营养素紧密相关 ,所以
摄食调结在一定程度上可改善或促进记忆力.核桃
叶内含有没食子酸 、缩没食子酸 、油酸 、柠檬烯 、胡桃
叶醌 、胡桃甙 、5-羟色胺及黄酮等多种化学成分[ 6 , 7] ,
具有抗氧化作用[ 8] .目前 ,国内外多采用建立条件反
射的方法检测动物的行为和脑的高级功能 ,其中水
迷宫法的应用较为广泛.本研究结果表明 ,各剂量核
桃叶提取液组小鼠在早期搜索站台潜伏期均明显缩
短 ,增加小鼠穿越站台的次数 ,提示核桃叶水提取液
可明显改善衰老模型小鼠空间位置觉和方向觉(空
间定位),改善记忆功能.
[参　考　文　献]
[ 1] 　姚振生 ,叶荷平 , 陈杰 ,等.野核桃叶提取物的体外抗菌
作用[ J] .江西中医学院学报 , 2001 , 13(3):122.
[ 2] 　宋华 ,包永明 , 张红梅 ,等.核桃楸叶提取液对肿瘤细胞
的抑制作用[ J] .大连轻工学院学报 , 2001 , 20(2):109.
[ 3] 　张莉 ,于玮 , 韩太真 ,等.不同训练方式建立大鼠空间记
忆后海马结构 NMDA 受体表达的变化[ J] .生理学报 ,
2006 , 58(5):442.
[ 4] 　骆静 ,郑陶冶 , 莫扎拜 , 等.火麻仁提取液对 D-半乳糖
致衰老模型小鼠学习记忆及代谢产物的影响[ J] .北京
师范大学学报(自然科学版), 2003 , 39(3):386.
[ 5] 　徐项桂 ,桑虎 , 陆俊.螺旋藻对小白鼠生长发育过程中
学习记忆能力的影响[ J] .中华临床医学卫生杂志 ,
2005 , 3(11):1.
[ 6] 　江苏新医学院.中药大词典[ M ] .上海:上海科学技术
出版社 , 2003.1 546.
[ 7] 　翟梅枝 ,张凤云 , 高绍棠 ,等.核桃液总黄酮提取方法研
究[ J] .陕西林业科技 , 2000 , 27(1):5.
[ 8] 　尉芹 ,马希汉 , 韩学文 , 等.核桃叶抗氧化作用的研究
[ J] .食品科学 , 2001 , 22(7):81.
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