全 文 ：胡椒瘟病是一种由疫霉属病原菌(Phytophthora
capsici)引起的传染力很强的土传病害， 常在雨季
时发生[1]。 胡椒瘟病是胡椒生产中灾难性病害， 病
害发生轻微时， 可使胡椒产量损失 5%-30%； 感病
严重的胡椒可整株萎蔫枯死， 损失达 90%， 造成严
重的经济损失[2-3]。 目前国内防治胡椒瘟病主要以
化学防治技术为主[4-6]。 国外 KasimR研究了甲霜
灵、 疫霜灵等对胡椒瘟病的室内和大田防治效果[7]。
由于长期使用化学农药不仅容易引起抗药性， 而且
容易破坏胡椒园的生态环境和降低胡椒产品品质。
圆滑番荔枝(Annona glabra Linn.)是番荔枝科
番荔枝属植物。 番荔枝科植物具有抗病毒、 虫、 抗
癌等多种生理活性。 早在 1982年由 M.Leboeuf等
报道番荔枝科植物中含有各种生物碱、 糖类、 脂肪
酸、 氨基酸、 蛋白质、 多酚类、 挥发油、 帖类及各
式芳香性化合物。 田娟[8]、 志明[9]等从圆滑番荔枝
中分离得到萜烯类、 生物碱等化合物， 该类化合物
已报道具有很强的抗癌作用。 有研究报道圆滑番荔
圆滑番荔枝叶乙醇提取物不同萃取组分对
胡椒瘟病菌的抑菌活性测定①
苟亚峰 1,2)②孙世伟 1,2)高圣风 1,2)桑利伟 1,2)刘爱勤 1,2)③
(1 中国热带农业科学院香料饮料研究所 海南万宁 571533；
2 海南省热带香辛饮料作物遗传改良与品质调控重点实验室 海南万宁 571533)
摘 要 采用液-液分配法对圆滑番荔枝叶乙醇提取物进行萃取分离， 得到石油醚、 三氯甲烷、 乙酸乙酯等不同
萃取组分。 采用生长速率法测定不同萃取组分对胡椒瘟病菌的抑制作用。 结果表明： 乙酸乙酯萃取组分对胡椒
瘟病菌的抑制作用最强， 其中20mg/mL乙酸乙酯萃取组分对胡椒瘟病菌菌丝生长的抑制率达到 74.43%， 具有较
好的抑菌效果。
关键词 圆滑番荔枝叶 ； 萃取组分 ； 胡椒瘟病菌 ； 抑菌活性
分类号 S667.9； S435.72
Determination of the Antifungal Activity of Ethanol Extracts from
Annona glabra Leaf against Phytophthora capsici
GOU Yafeng1,2) SUN Shiwei1,2) GAO Shengfeng1,2) SANG Liwei1,2) LIU Aiqin1,2)
(1 Spice and Beverage Research Institute, CATAS, Wanning, Hainan 571533;
2 Hainan Provincial Key Laboratory of Genetic Improvement and Quality Regulation for
Tropical Spice and Beverage Crops, Wanning, Hainan 571533)
Abstract Annona glabra leaf ethanol extracts were extracted by liquid - liquid partition method. Getting
different petroleum ether, trichloromethane, ethyl acetate extract components. Testing the different
components antifungal activity against Phytophthora capsici with growth rate method. The results showed
that the ethyl acetate extract components had high inhibition rate against Phytophthora capsici mycelium
growth. When the concentration was 20 mg/mL, the inhibition rate reached to 74.43%.
Keywords Annona glabra leaf ; extract components ; Phytophthora capsici ; antifungal activity
① 基金项目： 海南省自然科学基金项目(No.313091)。
收稿日期： 2014-03-12； 责任编辑/白 净； 编辑部E-mail: rdnk@163.com。
② 苟亚峰(1980～)， 女， 硕士， 研究实习员， 主要研究方向为植物源农药研究开发； E-mail: gouyf2007@163.com。
③ 通讯作者： 刘爱勤， 本科， 研究员， 主要研究方向为热带作物病虫害防治； E-mail: laq3680@163.com。
Vol．34, No．4
2014年4月 热 带 农 业 科 学
CHINESE JOURNAL OF TROPICAL AGRICULTURE
第34卷第4期
Apr． 2014
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苟亚峰 等 圆滑番荔枝叶乙醇提取物不同萃取组分对胡椒瘟病菌的抑菌活性测定
枝乙醇提取物对胡椒瘟病菌菌丝生长有
较好的抑制作用[10]。 因此， 本实验以胡
椒瘟病菌为供试病原菌， 测定圆滑番荔
枝叶乙醇提取物不同萃取组分对胡椒瘟
病菌的抑菌活性， 为进一步分离抑制胡
椒瘟病菌的活性成分奠定基础。
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1植物
圆滑番荔枝(Annona glabra Linn.)
采于中国热带农业科学院香料饮料研究
所。 将新鲜的圆滑番荔枝叶充分阴干，
磨碎过40目筛后置通风、 避光处储藏备用。
1.1.2病原菌
胡椒瘟病菌(Phytophthora capsici)由中国热带
农业科学院香料饮料研究所病虫害防控研究室提供。
1.2方法
1.2.1圆滑番荔枝提取物的制备
冷浸法： 准确称取 2kg的圆滑番荔枝叶干粉
装入广口瓶中， 加入干粉 5倍量的乙醇浸提 48h
并将滤液减压浓缩， 依次重复3次， 合并3次的浓
缩液放置4℃冰箱内备用。
1.2.2圆滑番荔枝提取物不同萃取物的制备
液-液萃取法： 准确称取圆滑番荔枝叶乙醇提
取物浸膏 5g加入 10倍量的蒸馏水， 装入分液漏
斗中混匀， 依次用石油醚、 三氯甲烷、 乙酸乙酯各
萃取 3次， 每次 50mL。 分别合并各溶剂萃取液，
减压浓缩分别得圆滑番荔枝叶乙醇提取物石油醚、
三氯甲烷、 乙酸乙酯萃取组分浸膏， 备用(图1)。
1.2.3圆滑番荔枝提取物不同萃取组分对胡椒瘟
病菌的影响
菌丝生长速率法： 准确称取0.4g圆滑番荔枝
叶乙醇提取物不同萃取物浸膏， 先用1mL无水乙醇
助溶， 再用无菌蒸馏水定容至20mL， 制成20mg/mL
的萃取物母液。 采用倍半稀释法用无菌蒸馏水稀
释， 依次制成浓度为10、 5、 2.5、 1.25mg/mL药液。
然后将培养基融化并冷却至50℃左右时， 把1mL不
同浓度的圆滑番荔枝萃取组分分别与 9mL/皿的
PDA培养基混合， 摇匀待其凝固后， 取菌落直径为
6mm、 培养好的胡椒瘟病菌的外层菌块放置于培养
皿中央， 以加入等体积萃取溶剂灭菌水的PDA培养
平板为对照， 每个处理做3个皿重复。 接种后， 在
人工气候培养箱(25～28℃)下培养 5d后， 采用十
字交叉法分别测量菌落直径， 求其平均值， 按下式
计算抑菌率。
菌落直径/cm＝测量菌落直径平均值－0.5
抑菌率/%＝对照菌落直径-处理菌落直径
对照菌落直径
×100
2 结果与分析
2.1圆滑番荔枝叶提取率
供试植物采用冷浸提的方法提取， 并减压浓缩
至浸膏， 得圆滑番荔枝叶提取率为17.15%。
2.2圆滑番荔枝叶提取物不同萃取组分对胡椒瘟
病菌活性测定
圆滑番荔枝叶乙醇提取物不同溶剂萃取组分分
别用倍半稀释法配成 5个梯度浓度(20、 10、 5、 2.5、
1.25 mg/mL)， 对胡椒瘟病菌进行抑菌活性测定， 测
定结果见图2。
从图2中可以看出， 在供试浓度下， 乙酸乙酯
萃取组分对胡椒瘟病菌的抑菌率均高于石油醚和三
氯甲烷萃取组分。 当供试浓度为 20mg/mL， 石油
醚、 三氯甲烷、 乙酸乙酯萃取组分的抑菌率分别为
34.63%、 44.93%和 74.43%。 其中乙酸乙酯萃取组
分的抑菌率最高， 达到 74.43%， 具有较好的抑菌
效果。
图1 圆滑番荔枝叶乙醇提取物不同溶剂萃取流程
圆滑番荔枝叶乙醇提取物
水/石油醚
石油醚萃取组分 水部分
水/三氯甲烷
三氯甲烷萃取组分 水部分
水/乙酸乙酯
乙酸乙酯萃取组分 水部分
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2014年4月 第34卷第4期热带农业科学
3 讨论与结果
从植物中寻找新型、 具抑菌活性的天然化合物，
并对其进行适当的结构修饰， 以筛选出活性更高的
新化合物， 是当前植物源杀菌剂研究的重点。 从以
上的结果可以得出， 石油醚、 三氯甲烷和乙酸乙酯
萃取圆滑番荔枝叶乙醇提取物各组分对胡椒瘟病菌
的抑菌活性具有较大差异。 当供试浓度为20mg/mL，
石油醚、 三氯甲烷、 乙酸乙酯萃取组分的抑菌率分
别为34.63%、 44.93%和74.43%。 其中乙酸乙酯萃取
组分对胡椒瘟病菌菌丝生长的抑制作用最高， 达到
74.43%。 由此可见， 从圆滑番荔枝叶乙醇提取物乙
酸乙酯萃取组分中分离对胡椒瘟病菌具有抑菌作用
的活性成分具有广阔前景， 为进一步研发高效、 低
毒、 环境友好型的植物源杀菌剂奠定了基础， 对胡
椒安全生产和胡椒产业的发展具有一定促进
作用。
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图2 不同萃取组分对胡椒瘟病菌抑菌率测定结果
石油醚萃取组分
三氯甲烷萃取组分
乙酸乙酯萃取组分
75
70
65
60
55
50
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
抑
菌
率
/
%
0 5 10 15 20
供试浓度/(mg·mL-1)
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