全 文 ：　２０１６，４２（１）：１３４－１３７　 Ｐｌａｎｔ　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ
收稿日期：　２０１４－１１－１９　　　修订日期：　２０１５－０１－２２
基金项目：　国家自然科学基金（３１５０１６８１）；海南省自然科学基金（３１３０９１）
＊ 通信作者 Ｅ－ｍａｉｌ：ｌａｑ３６８０＠１６３．ｃｏｍ
圆滑番荔枝叶乙醇提取物中抑菌活性成分的初步分离
苟亚峰，　高圣风，　孙世伟，　桑利伟，　刘爱勤＊
（中国热带农业科学院香料饮料研究所，海南省热带香辛饮料作物遗传改良与品质调控重点实验室，万宁　５７１５３３）
摘要　采用活性跟踪法对圆滑番荔枝叶乙醇提取物中抑菌活性成分进行了初步分离。结果表明：圆滑番荔枝叶乙
醇提取物乙酸乙酯萃取组分对胡椒瘟病菌的抑制活性最高，从该萃取组分中分离得到化合物松香酸和β－谷甾醇，并
测定了其对胡椒瘟病菌的抑菌活性。当两种化合物供试浓度为０．６ｍｇ／ｍＬ时抑菌率分别达到了６９．２１％和
６１．７８％，对胡椒瘟病菌具有一定抑菌效果。
关键词　圆滑番荔枝叶；　萃取组分；　胡椒瘟病菌；　抑菌活性
中图分类号：　Ｓ　４３５　　文献标识码：　Ａ　　ＤＯＩ：　１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．０５２９－１５４２．２０１６．０１．０２４
Ｐｒｉｍａｒｙ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｆｒｏｍ
ｅｔｈａｎｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ａｎｎｏｎａ　ｇｌａｂｒａｌｅａｖｅｓ
Ｇｏｕ　Ｙａｆｅｎｇ，　Ｇａｏ　Ｓｈｅｎｇｆｅｎｇ，　Ｓｕｎ　Ｓｈｉｗｅｉ，　Ｓａｎｇ　Ｌｉｗｅｉ，　Ｌｉｕ　Ａｉｑｉｎ
（Ｓｐｉｃｅ　ａｎｄ　Ｂｅｖｅｒａｇｅ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｔｒｏｐｉｃａｌ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ；
Ｈａｉｎａｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ　ａｎｄ　Ｑｕａｌｉｔｙ　Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
ｆｏｒ　Ｔｒｏｐｉｃａｌ　Ｓｐｉｃｅ　ａｎｄ　Ｂｅｖｅｒａｇｅ　Ｃｒｏｐｓ，Ｗａｎｎｉｎｇ　５７１５３３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｂｉｏａｓｓａｙ－ｇｕｉｄｅｄ　ｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｅｔｈａ－
ｎｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ａｎｎｏｎａ　ｇｌａｂｒａｌｅａｖｅｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｎｎｏｎａ　ｇｌａｂｒａｌｅａｆ　ｅｔｈａ－
ｎｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｈａｄ　ｔｈｅ　ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ　ｃａｐｓｉｃｉ，ａｎｄ　ｔｗｏ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（ａｂｉｅｔｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｂｅｔａ
ｓｉｔｏｓｔｅｒｏｌ）ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｗａｓ　ｔｅｓｔｅｄ．
Ｗｈｅｎ　ａｂｉｅｔｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄβ－ｓｉｔｏｓｔｅｒｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　０．６　ｍｇ／ｍＬ，ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ　ｃａｐｓｉｃｉ
ｒｅａｃｈｅｄ　ｔｏ　６９．２１％ａｎｄ　６１．７８％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　Ａｎｎｏｎａ　ｇｌａｂｒａｌｅａｆ；　ｅｘｔｒａｃｔ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ；　Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ　ｃａｐｓｉｃｉ；　ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
　　圆滑番荔枝（Ａｎｎｏｎａ　ｇｌａｂｒａ　Ｌｉｎｎ．）是番荔枝
科（Ａｎｎｏｎａｃｅａｅ）番荔枝属（Ａｎｎｏｎａ）植物［１］，我国南
方诸省均有栽培。番荔枝科植物具有抗病毒、杀虫、
抗癌等多种生理活性。杨世林等［２］对番荔枝科植物
化学成分及其抗肿瘤活性进行了研究，结果表明该
科植物所含的番荔素、多氧环己烯和苯乙烯内酯是
主要的抗肿瘤活性成分。田丽娟等［３］、常世忠等［４］
对圆滑番荔枝的化学成分进行了分析，分离得到贝
壳杉烷型二萜和生物碱等化合物，发现其具有较强
的抑制肿瘤的生理活性。姜盼等［５］综述了圆滑番荔
枝的化学成分及生物活性研究进展，为进一步开发其
药用价值奠定了基础。苟亚峰等［６－７］研究报道了圆滑
番荔枝乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物对胡椒瘟病菌
菌丝生长具有较好的抑制作用。因此，本试验以胡椒
瘟病菌为供试病原菌，采用活性追踪法［８］分离圆滑番
荔枝叶乙醇提取物中抑菌活性成分，为进一步研制防
治胡椒瘟病的植物源杀菌剂提供依据。
１　材料与方法
１．１　供试植物和供试病原菌
圆滑番荔枝叶采自中国热带农业科学院香料饮
料研究所院内。将新鲜的圆滑番荔枝叶充分阴干，
磨碎过４０目筛后置通风、避光处储藏备用。
胡椒瘟病菌（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ　ｃａｐｓｉｃｉ）由中国热带
农业科学院香料饮料研究所病虫害防控研究室提供。
１．２　圆滑番荔枝叶乙醇提取物制备
采用冷浸法：准确称取３ｋｇ的圆滑番荔枝叶干粉
装入广口瓶中，加入干粉５倍量的乙醇浸提４８ｈ，过滤，
依次重复３次，合并３次滤液并减压浓缩，得圆滑番荔
枝叶乙醇提取物浸膏５１４．５０ｇ，放置４℃冰箱内备用。
４２卷第１期 苟亚峰等：圆滑番荔枝叶乙醇提取物中抑菌活性成分的初步分离
１．３　抑菌活性成分分离纯化
准确称取圆滑番荔枝叶乙醇提取物浸膏，用石油
醚、三氯甲烷、乙酸乙酯不同溶剂萃取，通过抑菌活性测
定筛选出抑菌活性较高的萃取段进行抑菌活性成分分
离纯化。将大孔树脂湿法装柱，用适量的溶剂溶解萃
取段，上样，用二氯甲烷∶乙醇系统梯度洗脱，等量接馏
分（每瓶大约２００ｍＬ）。结合薄层色板技术合并相同馏
分，减压浓缩，上ＧＣ－ＭＳ分析（具体分离流程如图１）。
图１　圆滑番荔枝抑菌活性成分分离纯化流程图
Ｆｉｇ．１　Ｆｌｏｗｃｈａｒｔ　ｏｆ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｆｒｏｍＡｎｎｏｎａ　ｇｌａｂｒａｌｅａｖｅｓ
１．４　抑菌活性测定
采用菌丝生长速率法测定圆滑番荔枝叶乙醇提取
物不同溶剂萃取组分对胡椒瘟病菌的抑菌活性：准确
称取供试化合物，先用溶剂助溶，再用无菌蒸馏水定容，
制成母液。采用倍半稀释法用无菌蒸馏水依次稀释成
供试浓度。将培养基熔化并冷却至５０℃左右，把１ｍＬ
不同浓度的供试化合物分别与９ｍＬ／皿的ＰＤＡ培养基
混匀，待其凝固后，取菌落直径为５ｍｍ的胡椒瘟病菌
的外层菌块放置于培养皿中央，以加入等体积萃取溶
剂的ＰＤＡ培养平板为对照，每个处理做３个皿重复。
接种后，在人工气候培养箱内，２５～２８℃下培养５ｄ，
采用十字交叉法分别测量菌落直径，求其平均值，按
下式计算抑菌率。
菌落直径（ｃｍ）＝测量菌落直径平均值－０．５；
抑菌率（％）＝
对照菌落直径－处理菌落直径
对照菌落直径 ×１００。
２　结果与分析
２．１　圆滑番荔枝叶乙醇提取物的不同溶剂萃取物
抑菌活性测定
　按照１．４的方法测定不同萃取组分的抑菌活性，
结果见图２。
图２　不同萃取组分对胡椒瘟病菌的抑菌活性测定结果
Ｆｉｇ．２　Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｔｏ
Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ　ｃａｐｓｉｃｉ
从图２中可以看出，在供试浓度下乙酸乙酯萃
取组分的抑菌活性均高于石油醚和三氯甲烷萃取组
分。当供试浓度为１０ｍｇ／ｍＬ时，只有乙酸乙酯萃
取组分对胡椒瘟病菌的抑菌率达到了５０％以上，其
他两种溶剂萃取组分抑菌率均低于５０％。当供试
浓度为２０ｍｇ／ｍＬ时，乙酸乙酯、三氯甲烷、石油醚
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２０１６
萃取组分的抑菌率分别为７４．４３％、４４．９８％和
３４．６３％。由此可见乙酸乙酯萃取组分中含有抑制
胡椒瘟病菌的活性成分，可作为下一步抑菌活性成
分分离的萃取组分。
２．２　ＧＣ－ＭＳ检测
按照１．３的流程对乙酸乙酯萃取组分进行抑菌
活性化合物分离，通过ＧＣ－ＭＳ检测，观察各馏分的
谱图，并与标准谱库对比，得化合物１和２。
化合物１的ＧＣ－ＭＳ检测质谱信息（图３）与标
准谱库中松香酸数据一致，故鉴定化合物１为三环
二萜类化合物松香酸（化学式为Ｃ２０Ｈ３０Ｏ２）。
化合物２的 ＧＣ－ＭＳ检测质谱信息（图４）与标
准谱库中β－谷甾醇数据一致，故鉴定化合物２为甾
醇类化合物β－谷甾醇（化学式为Ｃ２９Ｈ５０Ｏ）。
图３　化合物１质谱图谱及与标准图谱对照图
Ｆｉｇ．３　ＭＳ　ｏｆ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ｏｎｅ　ａｎｄ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ
图４　化合物２质谱图谱及与标准图谱对照图
Ｆｉｇ．４ＭＳ　ｏｆ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ｔｗｏ　ａｎｄ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ
２．３　松香酸和β－谷甾醇对胡椒瘟病菌抑菌活性
测定
　　分别用倍半稀释法将化合物松香酸和β－谷甾醇（上海
迈瑞尔化学技术有限公司，纯度大于７５％）配成５个梯
度浓度（０．６、０．３、０．１５、０．０７５、０．０３７　５ｍｇ／ｍＬ），按照１．４
的方法测定其对胡椒瘟病菌的抑菌活性，测定结果见图５。
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４２卷第１期 苟亚峰等：圆滑番荔枝叶乙醇提取物中抑菌活性成分的初步分离
图５　松香酸和β－谷甾醇对胡椒瘟病菌抑菌活性测定结果
Ｆｉｇ．５　Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ａｂｉｅｔｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ
β－ｓｉｔｏｓｔｅｒｏｌ　ｔｏ　Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ　ｃａｐｓｉｃｉ
从图５中可以看出，在供试浓度下松香酸对胡
椒瘟病菌的抑菌活性均高于β－谷甾醇，当供试浓度
为０．６ｍｇ／ｍＬ时，松香酸和β－谷甾醇对胡椒瘟病菌
的抑菌率分别达到了６９．２１％和６１．７８％，对胡椒瘟
病菌具有一定的抑菌活性。
３　结论与讨论
从本试验中可以得出，圆滑番荔枝叶乙醇提取物
的乙酸乙酯萃取组分中含有对胡椒瘟病菌有较高抑
菌活性的化合物。当供试浓度为２０ｍｇ／ｍＬ时，乙
酸乙酯萃取组分抑菌率达到了７４．４３％，高于石油醚
和三氯甲烷萃取组分的抑菌活性。进一步对乙酸乙
酯萃取组分中抑菌活性成分分离，得到松香酸和β－谷
甾醇，当供试浓度为０．６ｍｇ／ｍＬ时，二者对胡椒瘟病
菌的抑菌率分别达到了６９．２１％和６１．７８％，均对胡
椒瘟病菌具有一定的抑菌活性，其中松香酸的抑菌
活性略高于β－谷甾醇。
有研究报道番荔枝科植物含有生物碱、萜类、黄
酮、番荔素、多氧环己烯和苯乙烯内酯等成分，这些成
分具有驱虫、抗病毒、杀虫、抗癌等多种生理活性［９－１０］。
因此，圆滑番荔枝叶乙醇提取物乙酸乙酯萃取组分中
的高抑菌活性成分有待进一步分离，此项研究对胡椒
安全生产及产业的发展具有一定意义。
参考文献
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出版社，２００４：１７０．
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［１０］朱峰，刘晓红，丁健华，等．番荔枝活性化学成分研究进展
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（责任编辑：杨明丽）
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