全 文 ：第24卷 第4期 湖 南 城 市 学 院 学 报 （自然科学版） Vol.24 No.4
2015年12月 JOURNAL OF HUNAN CITY UNIVERSITY （Natural Science） Dec. 2015
大头艾纳香总黄酮含量测定及鉴别
刘艳华，胡 亚，伍爱荣
（湖南环境生物职业技术学院，湖南 衡阳 421001）
摘 要：目的：探讨大头艾纳香提取物中总黄酮含量。方法：采用超声波从大头艾纳香中提取总黄酮类
物质，对提取的黄酮类物质用分光光度法测定含量。结果：大头艾纳香中总黄酮含量平均值为 3.1312％，加
标回收率 101.2﹪～96.76﹪之间，平均加标回收率达 98.59﹪，精密度高（RSD=1.65﹪，n=5）。结论：该法
操作简便、快速、数据可靠、精密度高，可用于大头艾纳香提取物中总黄酮含量的测定。
关键词：超声波提取；大头艾纳香； 总黄酮
中图分类号：G512.74 文献标识码：A doi: 10.3969/j.issn.1672-7304.2015.04.046
文章编号：1672–7304(2015)04–0096–02
1 仪器与试剂
1.1 仪器
KQ5200E 型超声波清洗器（昆山市超声仪
器有限公司）；101-2 型电热恒温鼓风干燥箱（上
海南阳仪器有限公司）；T6 新世纪紫外可见分光
光度计（2004（C）北京普析通用仪器有限责任
公司）； WFH-203 三用紫外分析仪（上海精科
实业有限公司）；SHB-IV 循环水式多用真空泵
（郑州长城科工贸有限公司）；旋转蒸发器（上
海亚荣生化仪器厂）；800 型台式离心机(上海浦
东物理光学仪器厂)；电子分析天平(北京赛多利
斯仪器系统有限公司)。
1.2 试剂
甲醇 AR；乙醇 AR；石油醚 AR；橙皮苷标
准品（中国药品生物制品检定所）；新鲜大头艾
纳香植株采自广西桂林临桂县。
2 定性实验—总黄酮的鉴别
2.1 颜色反应
紫外光下成色反应：取本样品溶液点在滤纸
上，在可见光下呈现灰黄色，紫外光下呈现灰褐
色并且有荧光斑点。
浓氨水反应：取本样品溶液点在滤纸上，并
将滤纸在氨水上方熏 0.5min，立即在紫外光下观
察，呈现极明显黄褐色荧光斑点。
三氯化铝反应：取本样品溶液点在滤纸上，
滴加 1%三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下
呈现灰黄色，紫外光下呈现黄色荧光斑点。
乙酸镁反应：取本样品溶液点在滤纸上，滴
加 1%浓度的乙酸镁甲醇溶液，吹干，在紫外光
下呈黄色斑点。
盐酸-镁粉反应：滴乙醇提取液 1ml 于试管
中，加入镁粉，再加入浓盐酸数滴（一 次加入），
有泡沫处呈紫红色。
2.2 纸层析
取本样品溶液 10μl 点在滤纸上。用正丁醇∶
水∶醋酸= 4∶5∶1 作为展开剂，上行展开 5h，
然后取出晾干。喷洒 1%的氯化铝乙醇溶液。吹
干后放于紫外光下，可以见到有荧光斑点。
3 用紫外分光度法进行测定大头艾纳香
中总黄酮含量
3.1 制备样品溶液
将大头艾纳香枝叶粉碎并过 40 目筛，用 1:10
的石油醚进行回流脱脂两次，每次时间为 2h，抽
滤洗涤，再放入 40℃的鼓风烘箱中干燥 1h 左右。
称取 1.0g 已脱脂的大头艾纳香粉末，准确加入
25mL 甲醇，密塞，摇匀，称定质量。用超声波
提取 30min，取出放冷却，再称定其质量，用甲
醇补足其减失的质量，摇匀，并离心分离，然后
取上清液 5mL，用甲醇定容至 50mL，得样品液[1]。
3.2 对照品溶液的制备
准确称取橙皮苷标准品 0.0050g，加甲醇溶解
并将其定容至 50mL，可得浓度为 0.10mg/mL 的
芦丁标准溶液。
3.3 测定波长
分别取 l.0mL 样品溶液和 l.0mL 对照品溶液
液于 10mL 容量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，在
200～500nm 进行扫描，发现均在 280nm 附近有
作者简介：刘艳华（1970-），女，湖南衡阳人，副教授，研究方向：生物学教学、天然产物。
刘艳华等：大头艾纳香总黄酮含量测定及鉴别第 24卷 97
最大吸收峰，实验中选择测定波长 280nm。
3.4 绘制标准曲线
分 别 准 确 精 密 吸 取 橙 皮 苷 对 照 液
（0.10mg/mL）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，
5.00mL 于 10.00mL 容量瓶中，加甲醇定容，于
280nm 处测吸光度。吸光度测定结果分别为 :
0.00，0.127，0.246，0.370，0.564，0.764，0.925，
根 据 以 上 数 据 得 回 归 方 程 ： A=2.72×10-2
+18.102C，r = 0.9979[2]。
3.5 精密度的测定
精密吸取 0.1mg/mL 橙皮苷对照品 1.5mL 于
10mL 容量瓶中，加甲醇稀释至 10mL 刻度，在
280nm 处测定吸光度，平行制备 5 份，每份测定
3 次，RSD=0.26％，1-5 号对照品号，吸光度分
别为 0.316，0.317，0.317，0.318，0.319，平均值
为 0.3172，表明仪器精密度良好。
3.6 稳定性的测定
分别取对照品溶液和样品溶液 1.0mL 于
10mL 容量瓶中并加甲醇稀释至刻度，室温放置
分别 0，2，4，6，8，10，12，24h 后，测定其吸
光度(n＝3)，计算对照品及样品溶液总黄酮含量，
对照品含量(﹪)分别为 1.013，1.002，1.022，1.003，
1.031，0.998，0.977，1.032，平均值为 1.00975，
样品溶液含量(﹪)分别为 3.252，3.146，3.166，
3.264，3.316，3.213，3.125，3.137，平均值为
3.2024，对照品及样品溶液的 RSD 分别为 1.84％，
2.18％见表 3，表明对照品及供试品溶液在 24h
内稳定。
3.7 重复性及含量的测定
取样品溶液 1.0mL 于 10mL 容量瓶中并加甲
醇稀释至 10mL 刻度，平行制备 5 份于 280nm 处
测定吸光度，样品 1-5 号，以标准曲线计算得到总
黄酮的含量(﹪)分别为 3.065，3.126，3.081，3.142，
3.154，大头艾纳香中总黄酮含量平均值为 3.1312
％，RSD 为 1.2457％，表明重复性较好。
3.8 加标回收实验
分别精密量取已知总黄酮含量的提取溶液 6
份，每份中加入一定量的橙皮苷标准品，按上述
操作方法测得吸光度，得出总黄酮含量，计算出
加标回收率。样品 1-6 号，样品中总黄酮含量
62.624（μg），加标量（μg）分别为 100，100，
100，50，50，50，实测值（μg）分别为 160.434，
162.274 ，163.824，111.004，111.959，111.359，
回收率(﹪)分别为 97.81﹪，99.65﹪，101.2﹪，
96.76﹪，98.67﹪，97.47﹪，实验结果表明大头
艾纳香中总黄酮含量平均值为 3.1312％，加标回
收率 101.2﹪-96.76﹪之间，平均值 98.59﹪，精
密度高（RSD=1.65﹪）。
4 讨论
结果表明大头艾纳香中总黄酮含量平均值为
3.1312％，加标回收率 101.2﹪～96.76﹪之间，平
均加标回收率达 98.59﹪，精密度高（RSD=1.65%，
n=5）。方法操作简便、实用、快速、数据可靠、
精密度高，结果表明，大头艾纳香中含有较为丰
富的黄酮，具有开发和利用价值。
参考文献：
[1]杨荣平, 寿清耀, 王宾豪等.紫外分光光度法测定复方补骨质
缓释片中补骨脂总黄酮的含量[J].中国药房,2007(9): 673- 674．
[2]姜国芳, 谢宗波, 乐长高. 银杏叶黄酮类化合物的研究进展[J].
时珍国医国药, 2004(5):306.
* 基金项目：衡阳市科技局基础研究计划项目：NO:2012KJ36(衡
科发[2012]75 号) ；湖南省教育厅高校科研项目：NO:12C1059
(湘教通[2012]596 号)。
Determination of flavonoids content and identify bulk einar ointment
LIU Yan-hua, HU Ya,WU Ai-rong
(Institute of Hunan environmental biological technology,Hengyang Hunan 421001)
Abstract: Objective: explore the content of total flavonoids in the extract of Blumea megacephala.
Methods: Using ultrasonic extraction method of total flavonoids extraction from Blumea megacephala, on the
extraction of flavonoids content was determined by spectrophotometry. Results: show that total flavonoids
content in Blumea megacephala average value is 3.1312%, the recovery rate of 101.2% -96.76%, the average
recovery was 98.59 ﹪, high precision (RSD=1.65%, n=5). Conclusion: The method is simple, rapid, reliable
data, high precision, and can be used for determination of total flavonoids in Blumea megacephala extract.
Key words:Ultrasonic wave treatment; Blumea megacephala Chang et Tseng; Total flavanone
（责任编辑：廖建勇）