全 文 ：遗 传 学 报 , 9 ( 3 ) : 2 4 3一 2 4 6 , 1 9 8 2
A e t 口 G e n e t i e 口 iS n i e a
蓖麻蚕遗传转化体丝心蛋白氨基酸的研究` ,
吕慧梅 李桂兰 陈 元 霖
(南京大学生物系生化教研室 ) 〔中国科学院昆明动物研究所 )
蓖麻蚕和家蚕是我国天然丝生产的两个主要
蚕种 ,分别隶属于天蚕蛾科 (aS ut r n i d a 。 ) 和家蚕
蛾科 ( oB m b yc i d a e ) 这两种蚕不仅在形态上 ,而且
也在其所合成的生物产品上都有明显的差异 。 有
些作者指出 : 丝心蛋白的氨基酸中 , 含量最多的
是甘氨酸和丙氨酸 ;家蚕是甘氨酸比丙氨酸多 , 蓖
麻蚕则是丙氨酸的含量大大地超过了甘氨酸 (匡
达人等` ” : K i r i m u r a 等〔 ` ’ ) 。
我们从被注人家蚕 D N A 和 D N A 蛋白的蓖
麻蚕后代变异个体中经过了 20 代的选育得 到 了
两个转化品系— 花蚕和花白蚕 (陈元霖等 〔 2 , 3勺。由遗传转化体所产生的蚕茧形态与正常的蓖麻蚕
茧无异 。 此外 , 在被注入 D N A 和 D N A 蛋白的
五龄幼虫中 ,产生有个别的变异蚕茧— 无孔茧 。无孔茧的形态特征是茧形短或近于椭圆形 、 茧端
无孔而且茧层厚实 、 茧上有缩皱 。 这些特征与家
蚕中的一些畸形茧相似 , 但与正常的蓖麻蚕茧不
同 (蓖麻蚕茧为长形 、 绵茧 、 茧端有一个孔 ) 。 据我
们统计 , 在试验组中出现无孔茧的百分率平均为
l一 4% o
本文报道由注人家蚕 D N A 和 D N A 蛋白后
的蓖麻蚕 ,在当代所产生的无孔茧 , 以及其后代的
遗传转化体蚕茧中 , 丝心蛋白的氨基酸组成 ,并与
正常家蚕茧和蓖麻蚕茧丝心蛋白的氨基酸组成进
行了比较研究 。
蛋白 , 依次用水 、 乙醇 、 0 . 02 N 酷酸 、 水洗涤 ,再用
乙醇 、 乙醚脱水 , 然后空气干燥 。
斗 . 水解 : , 毫克丝心蛋白加 1毫升 ( , . 7 N )
恒沸盐酸 , 封管后 ,在 l巧℃ 水解 2 4 小时。
5
. 氨基酸样品制备 : 将澄清的水解液 ,在水
浴上用蒸发皿蒸干 , 然后用蒸馏水洗 3 次 , 再用
。 . 02 N 盐酸稀释样品至所需要的浓度 。
6
. 氨基酸测定 : 用氨基酸自动分析仪测 定
了丝心蛋白氨基酸的种类及其含量 , 我们所用样
品测定浓度为 1 微克 / 50 微升和 5 微克 / 50 微升
二种。
材 料 与 方 法
1
. 材料 : 本试验采用的蓖麻蚕为白蚕品系 ,
家蚕为黑蚕品系 ,蓖麻蚕转化体 : ’ (花蚕、 花白蚕 )
后代的蚕茧以及由注人家蚕 D N A 的蓖麻蚕当代
变异茧— 无孔茧为材料。2 脱胶 : 参考 iR hc ar 。 等人汇” 工作进行。 以
丝重的 50 倍的水 , 在 。 . 75 公斤 /厘米 2蒸汽压力
下 , 加热二小时 , 弃去脱胶水 ,如此反复 4 次 。
3
. 丝心蛋白 ( iF b r o i助 制备 : 脱胶后的丝心
结 果 与 讨 论
1
. 丝心蛋白氨基酸的种类及其含量 见表 1。
从表 1可见 , 丝心蛋白氨基酸中 , 含量最多的是
甘氨酸和丙氨酸 , 这两种氨基酸的比例 , 在家蚕
丝的丝心蛋白中 , 甘氨酸比丙氨酸多 ( 34 . 80 % :
2 8
.
93 % ) ;在蓖麻蚕丝的丝心蛋白中 ,则是丙氨酸
比甘氨酸多 ( 45 . 12 % : 2 , . 82 % ) 。
2
. 丝心蛋白中碱性与酸性氨基酸的 含量 见
表 2。 从表 2 看出 , 蓖麻蚕丝的丝心蛋 白中硷性
及酸性氨基酸比家蚕的多 , 尤以碱性氨基酸差别
显著 。
3
, 家蚕一蓖麻蚕转化体中的花白蚕丝的丝心
蛋白中 , 丙氨酸比甘氨酸多 (“ . 19 % : 26 . , 4% ) ;
在花蚕丝的丝心蛋白中 , 也是 丙氨酸比甘氨酸多
(铭 . 83 % : 25 . 27 % ;) 蓖麻蚕变异茧 ,丝心蛋白中
丙氨酸比甘氨酸多 ( 4 7 . 1% : 27 . 02 % ) 。
4
. 家蚕一蓖麻蚕转化体中的花白蚕 、 花蚕丝的
丝心蛋白以及蓖麻蚕变异茧 , 丝心蛋白中碱性及
本文于 19 8 1年 2 月 2 日收到。
l) 丝心蛋 白氨基酸测定由王新昌、 罗喜牛同志协助
进行 , 特此致谢。
2) 蓖麻蚕转化体来源于注入家蚕 (黑蚕 ) D N A蛋白
的蓖麻蚕 (素白 )后代 ( F 15 ) o
2斗 4遗 传 学 报 9卷
T abl el
表 1家蚕一蓖麻蚕遗传转化体丝心蛋白氨基酸含盆 ( % )
A m in o a e id e on tn et s of g en
et i etr n a sfr o m
at i on b od y sl i kf b ir o in
ofB o mb夕 x二 or iL an d A名艺 a o u, e 夕。 凄力; a , i c i , 1 B o i , d (% )
家 蚕 蓖 麻 蚕 家蚕一蓖麻蚕转化体
黑 蚕 丝 白 蚕 丝 花白蚕丝
}
花 蚕 丝
B M L
里) s i lk o f A C R B Z ) s i lk o f 1
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r a n s f o r m a r i
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5
i l k o f g
r e y s i l k o f P
l e b a ld
、 1Ik w o r m , 1I k w o r m
门冬氨酸 2 . 2 2 6 5 . 13 5 . 2斗8 斗 . 9 13 5 . 4 5 6
A s P a r t i e a e id
苏氨酸 1 . 0 32 0 . 62 16 0 . 62 9 6 0 . 5 8 8 6 0 . 66 2 6
T h r o n in e
丝氨酸 1 1 . 8 8 6 . 9 4 1 7 . 10 8 白 . 7 6 1 7 , 2 8 4
S e r i n e
谷氨酸 2 . 0 0 3 1 . 2 4 5 1 . 3 0 8 1 . 1 72 1 . 3 9
G lu 饥m i e a e id
甘氨酸 3 4 . 80 25 . 8 2 2 6 . 5 4 2三 . 2 7 2 7 . 0 2
G l yc i n e
丙氨酸 2 8 9 3 4 5 . 12 斗6 . 1 9 斗3 . 83 4 , . 1 0
A l a n i n
e
眯氨酸 0 . 5 5 3 0 4 8 9 8 0 . 5 0 76 0 . 49 8 2 0 . 50斗8
C y s t i n e
撷氨酸 3 . 4 5 1 2 3 6 1 . 2 7 2 1 . 5 0 6 1 . 2 95
V a l i n
e
甲硫氨酸 0 8 2 7 0 . 7 6 48 0 . 7 9 9 6 0 , 85 8 0 . 7 7 12
M 已 t h i o n i n e
异亮氨酸 0 . 8 7 46 0 . 4 70 8 0 、 5 0 0 8 O , 62 8 4 ( ) . 6 4 76
I s o l
e u c i n
e
亮氨酸 0 5 4 68 0 . 3 7 0 8 0 . 4 00 2 0 4 18 4 0 . 4 2 54
L e u e i n
e
酪氨酸 9 . 4 88 10 7 9 1 1 . 5 2 11 2 0 1 1 9 3
T y r o s i n
e
苯丙氨酸 1 . 3 4 8 0 . 2 5 9 8 f ) 2 69 2 0 . 2 0 2 6 0 2 8 02
P h e o y l
a
l a n i n e
赖氨酸 0 . 3 5 8 0 . 5 89 6 0 . 5夕9 6 0 . 8 9 0 3 14 4
L y s i n e
组氨酸 0 . 3咯8 2 . 3 45 2 . 斗0 8 2 . 2 7 9 2 . 2 4 5
H i
s t i d i n e
精氨酸 0 . 3 8 1 3 . 19 8 弓. 3 lj Z 3 . t 3 . 2 8 5
A r g i n i n e
总 和 9 9 55
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10 5
、
4 10 8
.
5 8 10魂. t 1 10 . 6
f o t a l l
l ) 家蚕 B o o b厂 m o , e L . 2 ) 3 ) 蓖麻蚕 汪 t t a : “ : e y o t人i a ir e i n i B o i s d .
3期 吕慧梅等: 蓖麻蚕遗传转化体丝心蛋白氨基酸的研究 2 今 5
表 2 家蚕一蓖麻蚕遗传转化体丝心蛋白的酸性及碱性氮基酸 的含t ( % )
T ab ! e2 A c id i e
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家 蚕 蓖麻蚕 家蚕一蓖寐蚕转化休 {蓖麻蚕变异茧氨 基 酸
黑蚕丝 白蚕丝
花白蚕丝 …花 蚕”
A In i n o a e id B入 IL I ) , i l k A C R B , ) s i lk T r a n s f o r m a t i o n b o d y
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2 4 5
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5
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参 考 文 献
匡达人等 ; 1 9 63。 蚕业科学 , 1 ( l) :
陈元霖等 ; 19 7 9。 遗传学报 , 6 ( l) :
陈元霖等: 1夕80 。 遗传 , 2 ( 3 ) ; 10 0
K i r i m u r a
,
J
.
& s u z u k i
,
T
. :
19 6 2
C左。。 · S o e . ( J a p a n ) , 3 6 : 33 6一 4 0 .
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G r e e n e e t a l
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酸性氨基酸比家蚕的多 , 尤以硷性氨基酸差别显
著 。
5
. 从以上结果表明 , 由注人家 蚕 D N A 或
D N A 蛋白的蓖麻蚕 , 不论是在当代的变异茧 , 还
是转化体的蚕茧 , 在其丝心蛋白氨基酸组成方面
仍与蓖麻蚕相似 ,而不同于家蚕 ,这与我们在转化
蚕体形态和习性上的观察相一致 。
[ 5 ] J
. 刀, 0 1·
2 4 6传 学 报 9 卷
A Pri ma ry Su t dy f
o rA mi no Ae i dCo ne t ns to fGe ne ti c
T ra n砖o rma to f no B dy i F b ro i no f the A t ta e u s妙 n t hia rie i ni Bo i s d
L位 Hu i me i Li
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ht e f ib r o i n o f ht e v a r i a n t e o e o o n t h a t h a v e b e e n o b t a i n e d f r o m t h e 连 t t a e ,。 s e梦儿 t h艺a
石 e伽公 w ll i e h i n v a d e b y i n je o t i n t o ht e B o饥 b y二 饥。 ,落D N A , r e s p e o t i v e l y .
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更 正
《 遗传学报》 8 卷 4 期“ 皮肤移植对近交品系小白鼠及其杂交一代的遗传鉴定” 一文 , 第 3 29 页的表
3 第 2 栏 (’ 植皮品数 ,’) 倒数第 2行 , 原文为 “ 23 ” 应为 “ 20 ,’; 正文中所引的参考文献编号有误 , f l] 应
为 [ 5 ] , L3 ] 应为 [ 4 ] , [斗] 应为 [6 ] , [6 1 应为 13 ] , [5 ] 应为 [ l ] , 特此更正 。