全 文 ：遗 传 学 报 , 9 ( 5 ) : 3 2 5一 3 3 2 , 1 9 8 2
通 c亡a G e n e践c “ 及 n i C口
蓖麻蚕基因组中 55 D N A 的组织` ,
蔡 名 杰 李 载 平
(中国科学院上 海生物化学研究所 )
用 S o u t h e r n 方法研究了蓖麻蚕 (刁 t t a c。 , ir “ 。萝) 多s 核糖体 RN A ( , 5 r R N A ) 的基因在
基因组中的组织情况。 ” rR N A 基因以顺向串联的多拷贝形式组成了 ” D N A 家族 。 家族
的每个成员 (” D N A 的重复单位 ) 的大小为 2 6 Ob p (碱基对 ) , 即由 1 2 0饰的基因区和 1斗。 b p
的空间区顺序所组成。 在 5 D N A 的家族中没有限制性内切酶 cE 口lR 、 价m IH 、 几 tI 和 助1
的切点 。 限制性内切酶 M b ol 、 H人aI 在每个重复单位中有一个切点 , 都是位于基因 的 顺序
中。 5 D N A 重复单位的空间区顺序是不均一的 ,这一点可由限制性内切酶 aH o l 和 滋“ I
切点的不规则分布而得以揭示。
在高等真核生物的基因组中 , 绍 rR N A 基因不与其它核糖体 RN A 的 基 因联在 一
起 , 而是独立地组成 自己的家族 17I[ 。每个家族由数目不等的重复单位串联而成 。 每个重复
单位中除了基因顺序以外还含有一段不具有编码功能的空间区顺序。 爪蟾基因组 中的
5 D N A 分成许多家族散布在绝大多数的染色体上 lt0j 。 这些家族相互之间亦不尽相同 。
如在爪蟾 X . la 。 行 中就有三种不同的 5 D N A 家族 ,其中的两种只在卵母细胞中表达 ,
而另一种则在所有的细胞中都表达 {41 。 在果蝇的基因组中 , 5 D N A 则只以一个家族的
形式群集在一只染色体上 〔气 其拷贝数约在 20 0 左右f18J 。 rP oc 血 ie r 等人曾用限制性内切「
酶对果蝇的 s D N A 的组织情况作了研究 l3[] 。 后来又有人将果蝇 5 D N A 进行了无
性繁殖并作了顺序分析 L飞 通过对爪蟾和果蝇 5 D N A 所进行的大量的研究工作 , 人们
对真核细胞基因的结构和表达有了进一步的了解 。 特别是 Br ow n 等人对爪蟾 5 R N A 基
因的体外遗传学研究所得到的关于 5 R N A 基因内控制区的信息更为分子遗传学者们
打开了眼界 .3t 1’] 。
我们用 s ou the rn 方法15tj 研究了蓖麻蚕基因组中 5 D N A 的组织情况 , 发现蓖麻蚕
s D N A 的重复单位是迄今所研究的真核生物中最小的 。 尽管如此 , 它仍然具有与其它
真核生物的 5 D N A 所相似的特征 。
材 料 和 方 法
(一 ) D N A 和 R N A 的分离纯化
从 5 龄第 5 天的蓖麻蚕 (由中国农科院镇江蚕业研究所提供 )的后部丝腺体中提取细
胞 D N A 和 5 R N A , 主要是根据 T ar oft 等人的方法 L18] 。 提纯的 D N A 的平均分子量
本文于 19 51 年 1 月 9 日收到 。
1) 我室储美瑾同志提供部分丝腺体 D N A , 郑仲承同志提供蓖麻蚕 18 5 、 2 85 rR N A , 朱绳祖同志协助制作照
片 ,谨此一并致谢 。
遗 传 学 报 9 卷
约为 3一4 x10 7道尔顿 。 由制备电泳纯化的 5r RN A 的鉴定如图 1 所示 。
(二 )5 5r RN A 的 ’叹 标记
主要根据 H a u s wiet h 等人的方法 [ 6]。 标记的 ’竹一 S 5: RN A 的放射比度约在 5一 10 x
十原点 or i .
小 5 5r RN A
小斗S RN A
图 1 纯化的蓖麻蚕 5rRN A 的电
泳鉴定 ( 10 % 聚丙烯酸胺 凝 胶 电泳 ,
0
·
2% 甲烯蓝染色 )
1
. 分子量标准 , 大肠杆菌总 R N A
( M i l
e s 公司产品 ) :
2
. 蓖麻蚕丝腺体总 R N A ;
3
. 一次制备电泳纯化的 55 rR N A ;
4
. 二次制备电泳纯化的 5 S rR N A 。
F i g
.
1 Id e n t i f i e a t i o n o f p u r i f i e d 55
r RN A f 厂 o m A t t a
c “ : : i c i。苦 0 0 1 0%
P o l y a e r y l a m i d
e g e j
( 1 ) T
o t a l R N A p r叩 a r a t i o n f r o m E ·
c o l名 a s a m
a r k e r o f m
o l e e u l a
r
w e ig h t ;
( 2 )
’
r o t a ! RN A p r o P a r
a t i o n f
r o m
A t t “ e 。 , r i c矛。苦; ( 3 ) p u r i f i e d 55 r R N A
o无 A t t a e “ s 争公c 万刀 才 w i t h o n e e y e l e o f
p r e p a r a t i v e e l e t r o p h o r e s i s ; (斗) p u r i
-
f i e d 5 5 r R N A o f A t公a e附 r矛e i ” i w i t h tw o
e y e l e s o f P r e P a r a t i v e
e
l e t
r o p h o
r e s i s
.
始 rR N A 。 42 ℃ 杂交 24 小时 。
每次 15 分钟 , 再换 0 . 1 X S S C ,
10几mP /微克 RN A 左右 。
(三 ) 5 5 r R N A 的 ” ZP 标记
主要根据 S u ig ur a 等 人 的 方 法叫 。 标 记 的 3 2 P -
绍 : RN A 的放射比度 约 在 5一 10 X l 。气mP /微克 R N A
左右 。
(四 ) 限制性内切酶
cE oR I
、 凡。 H l 、 sP 红 和 B郭n 均 由我 室工 具酶
小组提供 ; M bol 、 H 人aI 、 H o l 和 求诫 均由我所二
室工具酶小组提供 。 各种酶切条件均按有关 文 献所
示 , 不再一一列出 。
(五 ) S o ut h er n 转移法及膜上杂交
蓖麻蚕丝腺体 D N A 经各种限制性内切酶水 解 之
后在相应浓度的琼脂糖凝胶中电泳展开 。 电泳之后凝
胶的变性 、 中和及转移凝胶中的 D N A 至硝酸纤维素
滤膜 ( B A邪 , S 公司产品 ) 上的方法均按 Sou ht e rn 所
示 〔, , , 。
带有变性 D N A 的纤维素滤膜先进行预杂交 。 反
应体系是 50 多 甲酞胺 , S X S C ( 1 x S c 是 0 . 0巧 M
柠檬酸三钠 , o . 15 M N a C I) , 5 X D e n h a r d t ( 1 欠 D e n h a r改
是 .0 02 多 iF c ol , .0 02 多 牛血清白蛋 白 , 0 . 02 多聚乙烯
毗咯烷酮 ) , 并含有未标记的蓖麻蚕 1 8 5 、 2 8 5 rR N A ( 5
微克 /毫升 ) , 42 ℃ 预杂交 24 小时后 , 滤膜置于 Z x
S C 中洗两次 , 再置于杂交体 系 中 (知 % 甲酸 胺 ,
5 X S SC
,
5 X D e n h a r d t
, 1 00 微克 /毫升未 标 记 的 蓖
麻蚕 1 85 、 2 8 5 r RN A , 2 0 0 毫微克 /毫升 ” , I一 (或 , , P 一 )
杂交完毕后 ,滤膜置于 2 X S C , 0 . 1务 S D S 中室温洗三次 ,
0
.
1外s D s , 50 ℃ 洗两次 , 每次 30 分钟 。 然后将滤膜置于
红外灯下烘干 ,压片 , 一 20 ℃ .自显影 。
结 果 与 讨 论
(一 ) 识别 6 对碱基顺序的限制性内切酶
5 3 O N A 家族中没有切点
蓖麻蚕丝腺体 D N A 经 E c o R I 、 B口m H I 、 p , ` I
。 . 7多 琼脂糖凝胶电泳上分布很广 (见图 2 ,A )。
cE
o R夏、 召众刀 I H夏、 凡月 和 双 g八 I 在
和 B g l 等酶作用后 , 产 生 的 片 段 在
但是 S ou ht er n 实验的结 果 没 有 显 示 出
5 期 蔡名杰等: 蓖麻蚕基因组中 5 D NA 的组织
任何明确的能与 昭 R rN A 探针杂交的区带 (因此结果没有给出) 。 为了排除该实验中可
能存在的影响酶切 、 电泳 、 转移和杂交等步骤的问题 , 我们同时进行了对照实验 。 把同
批 实验 转移 的 E co IR 、 aB o H I 、 sP lt 和 B到1 等酶切的平行样品的滤膜与标记的 185 、
2 85 rR N A 杂交 ,结果显示出清晰的蓖麻蚕 rD N A 重复单位的酶切图谱 (见图 2 , B ) 。 这
说明该实验的结果是可以信赖的 , 即 cE oR I 等识别 6 对碱基顺序的酶所产生的 D N A 片
段的确不能与 5 5 rR N A 探针形成明确的杂交区带 。 这是由于在 5 D N A 家族中没有
这些酶切点的缘故 。 迄今所研究的所有真核生物 (低等真核生物除外 ) 的 5 D N A 都是
由串联的重复单位连续排列而成 。 一般说来 , 在一个重复单位中不存在的顺序将在整个
家族中也不存在 。 如按照碱基随机排列 , 及口 IR 等识别 6 对碱基顺序的酶的切点将在
斗0 9 6 对碱基中才可能出现一次明 。 蓖麻蚕 s s D N A 的重复单位还不满 30 0b p (见下文 ) ,
1 2 3 4
然弊瓤
图 2 蓖麻蚕丝腺体 D N A 的 so ut h er 。 实验结果
A : 酶切电泳图 ( .0 夕%琼脂糖凝胶电泳 )
1
. 几噬菌体 D N A ; 2 、 3 · 蓖麻蚕 D N A 经 召酬且 酶切 言 4 、 , . 蓖麻蚕 D N A 经 凡刀 酶切 ;
6
、
7 蓖麻蚕 D N A经 加。 H l 酶切 ; 8、 9 . 蓖麻蚕 D N A 经 cE o IR 酶切。
B : A 图转移的硝酸纤维素滤膜与标记的 rR N A (1 8s 、 2 8 5 rR N A ) 杂交结果
.1 rD N A 的 B g l 酶切 , 显示出两条大小相近的区带 , 分子量分别为 3 · 2 和军 ]又 10 ` 道尔顿 ; 2 . sP , I 酶切 ,一条区带 , 7 . 0 丫 l。 “ 道尔顿 ; .3 召。 。 H l 酶切 , 两条区带 , 4 . 4 和 2 . 6火
10
巧道尔顿 ; 爪 阶口 IR 酶切 , 两条区带 , 5 . 。 和 2 . 0义 10 6道尔顿 。
关子蓖麻蚕 r D N A 重复单位 的酶切图谱详见参考文献 厂1」。
万19 . Z H y b r i d i z a t i o n r e s u l t o毛 e e l l u l a r D N A u s i n g t h o 1 85 a n d 2 85 r R N A a s p r ob 。
A : D 卫g e就 i o D 滋 刃 t t a e “ ` 犷 i c t n 宕 e e l l u l a 工· D N A w i t h v a r i o u s e n z y z n e s ( T h e d i g e s t e d
D N人 、 v a s o u n o n 0 .夕% a罗 : o s e 9 0 1) ( 1) 几 p h a g e D N A ; ( 2 , :弓) D N A e u t w i t士,
召9 1一; (斗, 5 ) D N A e u t w i t h p s ` I ; ( ` , 夕) D N A e u : w i t h 召。 。 } 工x ; ( 8 . 9 ) D N 八
e u t w i ht E
e 口
m
.
B : l h e h y b r : d
i z a t i o n o t d ig e s t e d D N A w i t h l a b e l
e
d r山 o s o m a l R N A ( 1 85 , 2 85
r R N A )
.
( 1) 玉王y b r id i z o t j o n p a t t e r n of 刀9 11 1 f r a g m 。 ;、 t s ; ( 2 ) p s公I { r二 g o e n t今
( 3 ) B
a二 H l 行 a g m e n r s ; (斗) E o o R z f r a g 。 。 。 , 5 .
’
r h o d e t a i l s a b o u t ht
e p h y s 又e a l m a p o f r D N A 讨 刁 t t a c 。 ` ,二 e r o t a r o r e加 r r e d t o [ I J .
遗 传 学 报 , 卷
因 此存 在 这 些 酶的切点的可能性是很小的 。 iP r ot at 等人曾用 cE oR I 、 aB o H I 等酶研
究果蝇的 绍 D N A , 他们最终可以得到一条大于 s o K b (千碱基对 ) 的杂交区带比切 。 但
我们对蓖麻蚕 5 D N A 进行的相似的研究却没有得到明确的杂交区带 。 这可能是由于
我们 D N A 制品的分子量不够大的缘故 。 我们提取的蓖麻蚕丝腺体 D N A 的平均分子量
与 几噬菌体 D N A 相当 ,即约 5 I K b。如果 5 D N A 家族大于 5 I K b , 就不能在这个实验中显
示出明确的杂交区带 。郑仲承等人在研究蓖麻蚕 r D N A 的酶切图谱时也遇到相似的情况 。
一 原点 o r i叶
卜 9 10 b P
峨一~ 6 6 0
岭~ 5 2 0
叫一 4 0 0
峨一 3 0 0
叫 ~ .
2 6 0
图 3 蓖麻蚕 5 D N A 重复单位的杂交图谱
A : 丝腺体 D N A 酶切电泳结果 (2 . 5% 琼脂糖凝胶电泳 )
l
、
2
. 丝腺体 D N A 经 Mbo l 十 曰人al 双酶切 : 3 . M b ol 酶
切 ; 4 . 月人成 酶切 : 5 . 分子量标准 , 质粒 p B R 3 2 2 的
别川 酶切片段 。
B : A 图转移的硝酸纤维素膜与 3午一 5 r R N A 杂交的显
影结果
1
. 仔几 a 一酶切 : 2 . M b o x酶切 ; 3 . M b o [ + H h a l 双
酶切 。
Fi g
.
3 苦诬yb 丁 i d i z o t l o ; 1 0士 r e p o a t e d u n i t o f 55 D N A o 全
刀才才口e 邵` 犷犷c 了刃才
A : E l e e t r o p h o r e s i s o f e 己 Il u l a r D N A o n 2
.
5%
a g a r o s e 郎 l
w h i e h h a d b o
e n d i g e s t e d w i t h 月f 石0 1 + 哪 。 I ( 1 , 2 ) ,材 b o l ( 3 ) , a n d H人a x (斗) . L a n e s , h o w s : h 。 m o一e e u一。 ;
w e ig h t m a r k e r s
. 『
I五 e f r a g m e n t s w e r e 刁 l “ 1 d ig e s et d P l a s 4
m i d P B R 3 2 2
.
B , 卜J y b r id i z a t i o n o士 〔 11罗 s t e d D N A w i t h ” Z-P , 5 r R N A . ( 1)
H人 a l一 d ig e s r o d f r o g m e n t s ; ( 2 ) M占。 I一 d i罗 s t e d t r a g m e n st ;
( 3 ) 刀了占 0 1一月石 a l一 d o u b l。 一 d i罗 s t e d fr a g m e n t s .
在 r D N A 重复单位中没有 iH dn m 酶的
识别位点 , 因此用 iH dn ln 进行 的 S-ou
ht er n 实验最终也 显 示 不 出 任何能 与
1 8 5
、
2 8 5 r RN A 探针杂交的区带 〔1 , 。
(二 ) 限制性内切酶 夜肠。 l 和声跟磁
在 弓S D N A 的每个重复单位中有 一 个
切点
丝腺体 D N A 经 对如 I 和 价 。 l 酶分别作用后 , 在 .2 5多琼脂糖凝胶中电
泳展开 。 转移和杂交的 结 果 表 明这两
个酶都可以切出一条大小 相 同的 能与
5S 水N A 探针杂交的 区带 ; 分 子 量 为
26 o b p (见图 3 ) 。
由家蚕的 绍 : RN A 核昔酸顺序中
我们可以知道 5S : RN A 基因的 41 一料
位残基是限 制性 酶 M b ol 的 识 别 位 点
( G A T C ;)[
〕。 家蚕 5 5 rR N A 基因中没有
H ha l 酶的识别位点 ( G C G c ) 。 但这一顺
序在果蝇的 5 5 ; R N A 中是存在的 , 位
于 “ 一69 位残基处 71[ 。 家蚕的 5 r R N A
的顺序在这里变成了 G c G U 。 根据我们
限制性内切酶分析的结果 , 我们认为在
蓖麻蚕 5 rR N A 的基因顺序的 41 一 4斗
和 “ 一 69 两处分别为 M bo l 和 H标 I酶
的识别位点 , 因为双酶切结果表明这两
个酶的切点靠得较近 , 相距 约 Z o bp 左
右 (图 3 , B )。 o
由于 确 oI 和 H ha l 两个酶都给出单一的杂交区带 , 而且大小相同 , 所以我们有理由
认为这一 2 6 0 bp 片段代表了 5 D N才、 的一个完整的重复单位。 它们在 5 D N A 家族中都
l) 本文成文之后 , 我所二室核酸结构组也完成了蓖麻蚕 5 rR N A 的核普酸全顺序分析。
们限制酶分 析的结果 , 即在蓖麻蚕 s5 他们的结果肯定了我
后者是不同于家蚕的 5 r R N A
rR N A 的 41 一科 位残基确是 G A U C , “ 一 6 9 位残基也确是 G C G c 。
顺序的。
5 期 蔡名杰等 : 蓖麻蚕基因组中 弘 D N A的组织
卜原点 o r i . 斗
一 , ~ 亚,一 - 一阅户.一一 .吸 ,
一 ~ ,臼颐
图 4 蓖麻蚕 5 D N A 的 M石叮 部分酶切图谱
灰 蓖麻蚕 D N A 经形 bo l 部分酶切 ( 2 , 5% 琼脂塘凝胶电泳 )
25 ℃酶反应 2 分钟 ; 2 . 25 ℃ 酶反应 5 分钟 ; 影 25 ℃ 酶反应 10 分钟 ; 4 . 25 ℃ 酶反应 30 分钟。
B : A 图转移的硝酸纤维素膜与 ’ , 一 s r R N A 杂交的显影结果。 编号同 A图。 B一 4
的箭头示 5 D N A 的杂交区带。
F ig
. 斗 Pa r t i a l d i罗 s t i o n o士 A公公a e “ 了 万 e i刀 了 多5 D N A
A: e e l一u一a : D N A d i g e ; : e d w i t h M石口 1 a t 25℃ f o r 2 m i n ( 1) , s m i n ( 2 ) , 1 0m i n ( 3 ) a o d
3 o m i n ( 4 )
,
w a , r u n o n 2
.
5%
a卯 r os e g e l ·
B: H y b r记 i z a ti o D o 士 p a r t i住 1 d i g e s t e d D N A w i t h 3空p 一 55 r R N A . hT e a r r o w s 匀h o w t l l e b a n d s
e o r r e s p o n d i n g t o ht
e
m
u l t i p l e u n i t s o f 5 s D N A
.
是顺向排列的 。 M石oI 酶的部分酶切结果如图 4 所示 。 这个结果说明了 5 D N A 是由串
联的重复单位所组成 。
(三 ) 限制性内切酶 六协。 n l 和 A坛 I 的切点不规 igl 地分布在 5 5 D N A 的空间区
中
图 5 , B 中 3 、 4 所示的分别为 lA 妊 和 aH e fl 酶产生的 5 D N A 片段 。 无论是延长酶
反应时间还是向反应体系中补加新酶都不能再改变这样的图谱 , 说明这是为酶完全作用
了的 。 这个结果说明 lA 诫 和 硫cI 工的切点在 5 D N A 中是不规则分布的 , 并不是每个
重复单位都有的 。 当它们分别与 M占oI 共同作用时 , 它们原有的分子量较大的区带都消
失了 , 而出现了单一的 2 60 帅 的重复单位的区带 (图 5 , B 中的 1 、 2 ) 。 这也说明 lA o l 和
H 、 m 酶所给出的杂交片段确是 5 D N A 的区带。 打 , m 酶所产生的最大一条杂交区带
的分子量为 7 . 6 K b, lA o l 产生的两条最大的杂交区带的分子量分别为 5 . 9 和 4 . SK b。 当
H
a刀
1 分别与 cE 。 IR 和 aB m H l共同作用后 , 仍然保留了原有的杂交区带 。 川 “ I 与 aB 。
IH 共同作用后也仍然呈现出川“ I 的图谱 。 但是当右二 I 与 cE 。 IR 共同作用时则失去了
一条 4 . SK b 的片段 (见图 6 ) 。 由于 cE o IR 酶在蓖麻蚕 5 D N A 中没有切点存在 , 因此这
条 .4 SK b 的 A扬 I 片段代表了 昭 D N A 的边缘片段 。 它包括了 5 D N A 顺序和邻接的非
5 DNA 顺序
。这个片段将可以帮助我们搞清楚 S D N A 外围顺序的情况 ,对研究 S DNA家族的进化和表达将可能有重要的意义 。 东 SK b 片段的位置如下图所示 。
遗 传 学 报 乡 卷
一原点
扣9 1 0 b P
朴6 6 0
扣5 20
卜斗0 0卜 0 0 3
卜 26 0
图 5 由 “ 配1 和 lA姚 酶所揭示的 5 D N A 的顺序不均一性
:A 蓖麻蚕 D N A 酶切 电泳 ( . 20 %琼脂塘凝胶) l · 仔ae l 十 M乡ol 双酶切 ; . 2川耐 十 娜o [双酶切 ; 3、 斗、 5. 川 t,l 酶切 ; 6、 7、 .8 H ` e l 酶切 ; .9 分子量标准 ,质粒 pBR 3 2 的 lA 川 片段 。
灰 A 图转移的硝酸纤维素膜与 ’ 2 , I一 5 rR N A 杂交的结果 。 .l 刀 lt, I十 M b of ; .2 月“ ` 1 +
M石 0 1雪 3 . 左 l邵 I丁 4 . 厅召己 111。
F i g
.
5 T h e s e q u e
至一 e e h e t e r o g e o e i t y r e v e a l e d b y 月 a e l l l a n d 汉 l“ 1 d i罗 s t i o n
A : C e l l u l a
r
D N A d i g e s t e d w i t h H a o l l l + 材 b o l ( 1) , A I“ I + 月了乙0 1 ( 2 ) , A I“ I ( 3 , 4 , 多) a n d “ “ 。 11里
( 6
,
7
,
8 )
.
L i n e 9 sh o w s t h e m
a r k e r s 滋 t h e m o l e e u l a r w e i g h t , A I“ I一d i g e s t e d p l a s m id p B R 3 2 2 ·
B : Ll y b r i d i z a t i o
: : o f d i g e s t e d D N A w i t h
` 2 ` I 一5 5 r R N A . ( l ) A l o l + M石0 1 d o u b l e d i g e , t三。 。 ; ( 2 ) 月二。川
+ 肥石0 1 d o u b l o d ig e s t i o n ; ( 3 ) 1/ 10 1 d ig o s t i o 。 ; (斗) “ a o l l d i g e s it o 。 ·
月a川 I 和 lA 耐 的酶切图谱表现了蓖麻蚕 昭 D N A 各重复单位的顺序不是完全相同
的 。 这种顺序不均一性是所有真核生物 5 D N A 共有的现象。 P et er s on 等人在研究爪蟾
5 D N A 时发现一种微量卵母细胞型 5 5 D N A ( xl t 5 D N A ) 经 tH’ o dI n 酶作用 后产
生的片段多在 4 K b 以上 l[] 。 价dn l 切点位于该 5 D N A 的空间区顺序中 , 所以可知
空间区的顺序是不均一的 。 在蓖麻蚕的 5 r R N A 基因中没 有 aH d n 和 lA 诫 酶 的 识
别顺序 , 因此它们的切点也是位于蓖麻蚕的 5 D N A 的空间区顺序中 ,它们也揭示了蓖
麻蚕 s s D N A 空间区中的顺序不均一性 。
5 D N A 重复单位的不均一性是由变异造成的 。 从目前已有的 D N A 顺序分析结果
看来 , 5 D N A 中基因区的顺序较为保守 ,而空间区顺序的变异程度则较大 。 eF d or of 图
和 Br o w lsn .4] 等人的研究都表明空间区顺序对 5S : RN A 基因的正常表达影响不大 。 郎
5期 蔡名杰等 :蓖麻蚕基因组中 , 5 D N A 的组织 3 3 t
砷 2 4 . 1 K b
~ 1 0
.
0
一矢 D
卜原点 q 谊.祷
7
.
6 K卜
荃一斗. 8
;
.
;
妇 2.2
图 6 H ae l 和 川磁 产生的大分子杂交区带
A : 蓖麻蚕 D N A 酶切电泳 (0 . 6% 琼脂塘凝胶 )。 卫、 10 . 分子量标准 , 几噬菌体 D N A 的 从二 d[ I
酶切片段 : 2 . A彻 I + B a o H I : 3 . A I“ r + E c 口 Rl ; 4 . 万 a e r l l + B a二H l : 5 . 月 a d l l + 刀`。 R l ;
6
、
7
,于l “ I ; 8、 9 , 万 a 口川 。
氏 A 图转移的硝酸纤维素膜与 `之与I一 5 r R N A 杂交的显影 结果 。 l . H此 1 ; 2 . H o l 十
召a 脚H l : 3 . H 召 e l l l + E c o RI ; 斗. 左 l邵 l ; 5 . A I“ I + B a切H l ; 6 . A I“ x + E c o R I。
F ig 6 玩 r少 5 5 D N A 打 a g 功 e n t s g e n 盯 a t e d b y 汉 l “ 1 a n d “ a e x x -
A : C e l l u 一a , D N A d i g e s t e d * i t士, A I。 ! + B a , n H I ( 2 ) , A l u一+ E c o R I ( 3 ) , “ a * 211 + 召a o H I
( 4 )
, 月 。 。川 + E c o R I ( 5 ) , 左 l u l ( 6 , 7 ) a n d H a e l l l ( 8 , 9 ) , w a s r u o o n 0 . 6% a g a : o s e
g e l
.
L a n e 1 a n d 1 0 w e r e am
r k e r s 滋 m o l e e u l a r w e ig h t , H i ” d l l l一d i g e s t e d 几 p h a g e D N A .
“ : H y b r id玉z a t i o n o釜 d ig o s t e d D N A w i t h ` 2 , l一 5 5 r R N A . ( 1 ) 月 a o l x l f r a g m e n t s ; ( 2 )
脚 ` e l l l + B 。二 H l 行a g 加 e n t s ; ( 3 ) “ a 己川 + E e o RI 于r a g m e o t s ; (斗) 刁10 1 行铭me n t s ; ( 5)
刁 l , l + 召。 , H x 厅。 g。 如 t s ; ( 6 ) 月止“ 一+ E c o Rl fr 娘。 e n t s .
使空间区部分被完全删除 , 貂 rR N A 基因仍可表达 。 因此 , 绍 D N A 重复单位中空间区顺
序的变异程度比基因区顺序大得多的事实是可以解释的 。
根据我们的实验结果 ,可以得出蓖麻蚕 5 D N A 家族的组织情况 ,如下图所示 。
b一声K一尹,>一ù,A一/春N一z/Dù一/
郑仲承等 : 19 8 1。
M占0 I H左a l
基因区 G o n e , 12 o b p
参 考 文 献
遗传学报 , 8( 3 ) : 20 3一2 1 1。
A r t a v an i
日一 t s a k o n a s , 5 . o t
B o g即h a g皿 , D . F . et al . :
a l
.
: 1 9 7 7
.
C e l几 1 2 : 1 0 5 7一 1 0 6 7 .
B r o w 刀 , D
.
D
.
e t a l
.
: 1 9 7 9
.
1 9 8 0
. 乞西艺d , 1 9 : 2 7一 3 5 .
讯 “ E u e a r y o t i e g e n e r e g u l a it o n ” , ( e d s . R . 人 x e l e t a l . ) I C N U C L IA
l[]s3&
3 3 2遗 传 学 报 9卷
Sy m p
o
s1Um
o nM
o le e u a l r皿 G de l lu l时 i Bo loyg Vo l XI V, 5 1 1一5 1 9 , A e a d e力钓e p : e s 。
〔5] 入do or f, N · .v : 19 7 .9 ce “ , 16 : 5 51 一 56 .3
〔 6 ] H au s w ie ht , W · W . “ a .l : 1 9 8 0 . ` e o e , :8 1 9 3一20 9 .
「〔 7 〕 K o m行 a , H . : 1 9 8 1 . J , 丑`。动 e二 , 8 9 : 7 1 7一 72 2
’〔 8 ] M i m 。 , D . E . : 1 9 7 0 . 名面 e , e e , 1 7 0 : 6 3 9一6 4 1 .
i〔 9 ] M u r r ay , K · : 1 9 7& 休 “ G e n e桩e 枷 g加 e er 认 g ” ( e d . b y A . M , hC 众 r沥 a1’ 勿 ) , p l l 3一1 2 2 , C耽
P r e s s
·
[ 1 0 ] P
a r d u e
,
M
.
L
.
e t al
·
: 1 9 7 3
.
C h 犷o饥 o ; o饥 a, 4 2 : 1 9 1一 2 0 3 .
[ 1 1 ] p
e t e r s o n
,
R
·
C
·
e t al : 1 9 7 9
·
C a 儿 e夕落e 八“ 才`才哪沉o件 几 a ” 丑 0 0 论, 7 8 : 72一7 5 ·
[ 1 2 ] p i
r r o t t a
,
v
·
e七 al , , 1 9 7 8 . 伽 “ G en e t i c E n g认 e e r纽 g ” ( e d s · 丑· W· B o y e 了 e t al · ) , 1 2 7一司 3 4 ·
ls[ 〕 P r o icun er
,
.J .D an d 又 .D aT ort 介 19 .76 N 时讹色 那:3 25 5一 67 ·汇1幻 S汰。 “ j u , .5 et al : 19 80 · C祝乙, 1价 1 3一 2 .5
【1 5」 S o u ht e r n , E . M . : 1 9 75 . J . M口 2 . 刀艺口乙, 9 8 : 5 0 3一5 1 7 . _
11 6」 S u g iu r a , M . e七 al : 1 9 7 9 M o Ze c . 口 e件 . 已。 外 e才. , 1 7 2 : 1 3 7一 14 1 .
{ ] 7」 T肥七。 f , K D . : 1 9 7 5 . A 儿儿哪 a 乙五e 公介叨 o f ` e ” 时艺cs , 9 : 3 5 5一 38 5 .
汇1 8 ] T a rt o f , K . D ` 眺 al . : 1 9 7 0 . J . 皿川 . B `碗 . , 5 1 : 1 7 1一 18 3 .
T h e O r g a n i z a t io n 可 5 5 r R N人 G e n e : in S il k w o r m
A t a c “ 5 ir ic n i G e n o m e
C a i M i n g j i e L i Z a iP i n g
( I
二 。`公t、 才e of 刀云o e h e。 落。云,夕, A o a J 。饥落a 名公、 乞。 a , S几。 佗夕h成 )
T h e o r g a n i z a t i o n o f 5 5 r R N A g e n e s ( 5 3 D N A ) o f s i l k w o r m A t才a 。 怀s r 公蕊” 落h a s b e e n
d e t e r m i n e d b y m e a n s o f S o u t h e r n
’ 5 m e t h o d
.
T h e 55 D N A e o n o i s t s o f h u n d r e d s o王
t a n d e m l y r e p e a t e d u n i t s w h i e h a r e 2 60 b a s e p a i r s i n l e n g t h
.
T h e r e is a s i n g l e r e e o g n i
-
t i o n s i t e i n e a e h r e p e a t e d u n i t f o r t h e r e “ t r i e t i o n e n “ y m e s 肛b o l a n d 孤 al r e印 e e t i v e l y ·
B o t h o f t h es e s i t e s e x i s t i n s i d e t h e s t r u e tu r a l g e n e r e g i o n
,
T h e 5 S D N 人 d o e s n o t e o n -
七a i n a n y r e o o g n l it o n s i t e s f o r r e s t r i e t i o n e n : y l l 〕e s E ` o R I , B a哪H l , 尸s 古1 a n d B g l l l . T h e
s P a e e r r e g i o n o f A t协`杯 s 犷落c伽公 5 5 D N A 15 ht e sm a l l e s t o n e a m o n g t h e e u e a r y o t i o S S D N A s
w h i o h h a v e e v e r b e e n i n v e s t i g a t e d
.
W h
e r e a s , l i k e a l l o t h e r s
,
i t h a o r e m a r k a b l e s e q u e n c e
五e t e r o g e n e i yt w h i e h o a n b e r e v e a l e d by t h e H a e l l l a n d 连 l祝 I d i g e o t i o n p a t t e r n s
.