全 文 ：　第 18卷第 5期　　　　　　　　　　　　　　　　安康师专学报　　　　　　　　　　　　　　　　　Vo l. 18 № 5
2006年 10月　　　　　　　　　　　　　 Journal o fAnkang Teache rs Co llege　　　　　　　　　　　　　Oc t.2006
分光光度法测定杜仲叶中总黄酮的含量研究
孙宝本 , 鲁绪会
(安康学院 化学与生命科学系 , 陕西 安康 725000)
摘　要:采用冷浸法提取杜仲叶中的总黄酮 , 探讨最佳的提取测定条件 , 经实验结果表明:最佳浸提
温度为 17℃;最佳乙醇浓度为 70%, 其相对标准偏差为 1.64%, 测定回收率为 99.18%.
关键词:杜仲叶;冷浸;提取;分光光度法;总黄酮
中图分类号:O652　文献标识码:A　文章编号:1009 - 024X (2006) 05 - 0070 -02
Stuoly on the Speltrophotom etricD eferm ination of the
Tota lF larones in Eucomm ia U lmodies Leaves
SUN Baoben, LU Xuhu i
(Departmen t of Chem istry -Life Science, Ankang University, Ankang 725000, Shaanxi, Ch ina)
Abstrac t:The ex tracting cond ition o f flavono id com pounds from Eucomm ia u lm oides oliv by the alcohol extract ing
at house tem peratu re was stud ied.The resu lts showed that tem perature o f17 and alcohol of 70% is the best cond ition
RSD 1. 64%.Reclaim 99.18%.
K ey words:Eucomm ia u lm od ies leaf; extract ing at house temperatu re; flavono id
杜仲属杜仲科落叶乔木 , 是我国名贵的药用植物 , 其叶中含有桃叶珊瑚苷 , 筋骨草苷 、 绿原酸黄酮等 , 黄酮类化
合物有效成分具有补肝肾 、 强筋骨 、 降压 、 抗菌 、 安胎 、 利尿 、 止咳 、 抗肿瘤 、 抗衰老 , 增强免疫等药理作用 .用于
治疗腰膝酸痛 、 胎动不安 、 高血压等症 , 越来越引起人们的广泛重视 , 纷纷研究其中所含成分 .目前研究杜仲叶中的
总黄酮类化合物等成分测定方法较多 , 但对杜仲叶做成茶后样品处理的方法甚少 .本文主要对其样品处理方面进行了
探索 , 然后应用 A l (NO 3)3显色后 , 进行光度法对总黄酮进行测定 .结果显示 , 在 17℃时用 70%乙醇提取的总黄酮 ,
其相对标准偏差 (RSD) 为 1. 64%, 回收率 99.18%, 效果较为满意 .
1　材料与方法
1. 1材料与仪器
杜仲茶叶 (由安康市昊泰生物资源开发有限公司提供);芦丁 (北京药品生物制品检定所 );乙醇 、 A l (NO 3)3
和其它试剂均为分析纯;水为三次蒸馏水;HH - 2型数显电子恒温水浴锅 (金坛市富华电器有限公司);SP -
191UVCP紫外可见分光光度计 (上海光谱仪器厂提供);微型高速万能试样粉碎机 (河北黄骅市齐家务科学仪器厂提
供);电子分析天平 (赛多利斯公司提供) .
1. 2杜仲叶样品液制备
取杜仲茶叶 50g, 放入干燥箱中 , 用 120℃温度 , 烘干 3h, 放入粉碎机 (φ=80mm) 粉碎 , 精确称取 5.0000g, 6
份 , 分别在温度为 7℃, 17℃, 36℃条件下 , 用质量分数分别为 60%和 70%的乙醇浸渍 , 在 7℃条件下加入乙醇量为
50m l, 在 17℃和 36℃条件下加入乙醇量为 100m l, 放置 24h, 过滤 , 滤渣再加入乙醇浸渍 , 如此再浸渍提取 2次 , 但
浸渍放置的时间则缩短为 4h, 合并提取液 , 浓缩定容至 50m l, 吸取 2m l于 50m l容量瓶中 , 用质量分数为 30%的乙醇
定容至刻度 , 备用 .
1. 3测定波长的选择和工作曲线的绘制
精密称取芦丁 20mg (120℃烘至恒重) 置 100m l容量瓶中 , 加质量分数为 60%的乙醇定容至刻度 , 摇匀 , 取 25m l
用蒸馏水稀释至 50m l (0. 1m g /m l), 准确吸取 0, 1. 0, 2. 0, 3. 0, 4. 0, 5.0m l分别置于 10m l容量瓶中 , 先加质量分
数为 5%的亚硝酸钠溶液 6滴 , 摇匀 , 放置 6m in, 再加入质量分数为 10%的硝酸铝溶液 6滴 , 摇匀 , 放置 6m in, 再加
入 1mo l /L NaOH溶液 4.0m l, 分别用质量分数为 30%的乙醇稀释至刻度 , 摇匀 , 放置 15m in, 在 480 ～ 560nm的波长范
围内进行扫描 , 选择最佳吸收峰波长 , 并在此波长下作工作曲线和试样测定 .
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收稿日期:2006 - 03 - 06
作者简介:孙宝本 (1978 -), 男 , 陕西旬阳人 , 安康学院化学与生命科学系教师 .
2　结果与分析
2. 1测定波长与标准曲线的确定
以芦丁为标准样 , 硝酸铝为显色剂 , 测得最大吸收波长为 510nm , 回归方程为:A=10. 08571C +0. 03362
R=0. 99948
见图 1、 图 2:
　
2. 2测定步骤
取杜仲叶样品溶液各 0.5m l, 处理方法同 1. 3, 测定吸光度并根据标准曲线计算总黄酮含量 . 如表 1, 由表 1可
见 , 以上几种情况下总黄酮的含量 , 这些结果与实际情况较为相符 .编号以温度从低到高 , 乙醇含量从低到高排序 .
表 1　不同条件下提取出的总黄酮含量
编号 1 2 3 4 5 6
总黄酮含量 (m g /g) 55. 78 59.98 83.62 95.93 — —
2. 3精密度实验
以温度为 17℃, 用 70%乙醇冷浸的杜仲叶样品液为样品 , 用上述方法进行测定 , 平行测定 3次 , 结果如表 2所
示 .从表 2可以看出 .用硝酸铝光度法测定杜仲茶叶中的总黄酮 , 相对标准偏差为 1.64%.
表 2　硝酸铝光度法测定总黄酮的精密度试验 (n=3)
编号 1 2 3
总黄酮含量 (m g /g) 97. 50 94.35 95. 95
2. 4回收率试验
以温度为 17℃, 用 70%的乙醇浸提杜仲叶的样品液为供试样 , 加入 0. 2m l芦丁标准液进行回收率试验 , 结果如
表 3所示 , 由表 3可以看出该方法测定的平均回收率为 99.18%.
表 3　硝酸铝光度法测定总黄酮的回收率试验
样品编号 总黄酮含量 (m g) 加入芦丁量 (mg) 理论值 (mg) 测定值 (mg) 回收率 (%)
1 0.1950 0.02 0. 2150 0. 2114 98. 33
2 0.1887 0.02 0. 2087 0. 2105 100. 86
3 0.1919 0.02 0. 2119 0. 2084 98. 35
3　结论与讨论
3. 1乙醇浓度对冷浸法提取总黄酮的影响
试验表明:在以上 3组温度的杜仲叶标样中 , 同一温度下 , 质量分数为 70%的乙醇比质量分数为 60%的乙醇提
取杜仲叶中总黄酮的提取效果要好 .
3. 2不同温度对冷浸法提取总黄酮的影响
试验表明:在所做的 3组温度中 , 杜仲叶中总黄酮物质的提取率随温度增高呈上升趋势 , 在温度为 17℃时 , 提取
率最好 , 总黄酮含量最高 , 温度进一步增高提取率将明显下降 .
3. 3冷浸法提取杜仲叶中总黄酮适宜条件
试验结果表明:冷浸法提取杜仲叶中总黄酮最佳条件为:室温为 17℃条件下 , 用 70%的乙醇浸提 .
参考文献:
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孙宝本 , 鲁绪会:分光光度法测定杜仲叶中总黄酮的含量研究