全 文 ：表 2　 川芎嗪对大鼠血清 BUN、 Scr的影响( x ±s, n=12)
组别 造模后
BUN /mm ol /L S cr /μm o l /L
治疗后
BUN /mm ol /L S cr /μmo l /L
正常组 6. 18±0. 91 41. 46±9. 67 6. 20±0. 85 41. 34±10. 02
模型组 9. 66±1. 89 68. 59±15. 67 10. 43±2. 14△△ 85. 77±22. 21△△
丹参组 9. 75±1. 56 71. 56±14. 48 6. 97±0. 74**△△ 47. 67±7. 74**△△
大剂组 9. 65±1. 76 72. 37±16. 48 7. 04±0. 89**△△ 49. 67±8. 94**△△
小剂组 9. 90±1. 58 71. 73±14. 54 8. 61±1. 14**△ 45. 67±8. 49**△△
　　与模型组比较**P<0. 01;与治疗前比较△P<0. 05;△△P<0. 01。
2. 3　肾脏组织光 、电镜观察
光镜下模型组肾小球系膜细胞和基质增生 , 系膜区增
宽 , 其间常有数量不等的中性粒细胞浸润 , 上皮细胞增生 , 形
成新月体 , 肾小体毛细血管瘀血;大剂量治疗组肾小体水肿
不明显 , 各部分结构清晰;小剂量治疗组可见灶性肾小球毛
细血管瘀血;丹参对照组肾小体结构结构基本恢复正常。电
镜下模型组肾小球内皮及上皮细胞显著肿胀变性 ,内质网扩
张 , 形成大空泡 ,基底膜增厚或厚薄不一 ,在基底膜表面呈驼
峰状或小丘状隆起 , 足突融合 , 局部裂孔消失 ,膜下可见电子
密度高的沉积;大剂量治疗组肾小球血管内皮细胞及足细胞
水肿消失 , 足突及裂孔较清晰 , 驼峰消失 ,但仍有基底膜厚薄
不一的现象;小剂量治疗组与模型组近似 , 未见明显改善;丹
参对照组肾小球内皮细胞局部水肿 ,基底膜厚薄均匀。
3　讨论
结果显示 ,川芎嗪和丹参一样对免疫性肾损伤大鼠滤过
膜有保护作用 ,可显著减少尿蛋白;明显改善肾功能 , 使血清
BUN、Sc r含量降低;肾小球的病理形态学改变亦较模型组
轻。提示中药川芎嗪具有抗免疫性肾损伤的作用。
参考文献:
[ 1] 　于世瀛 ,贲长恩 ,杨美娟 ,等.免疫性和化学性损伤肝纤维化动
物模型的比较 [ J] .实验动物科学与管理 , 1995, (12):5-11.
[ 2] 　贾　慧 ,邹万忠.改良慢性血清病性大鼠系膜增生性肾炎模型
的建立 [ J] .肾脏病与透析肾移植杂志 , 1996, 5(3):21-25.
[ 3] 　Yam am oto T, K ihara I, M orita T, et a l. Bovine serum album in
(BSA) neph rit is in rats. I. Experimentalm odel[ J] . Acta P a thol
Jpn, 1978, 28(6):859-866.
HPLC测定木芙蓉叶药材及其制剂芙蓉抗流感片中金丝桃苷的含量
王治平 , 　樊　化 , 　杨　珂 , 　罗　勇 , 　张美英 , 　王一飞*
(暨南大学生物医药研究开发基地 ,广东 广州 510632)
收稿日期:2006-06-15
基金项目:广东省社会发展计划项目 ,编号:2005B30101010
作者简介:王治平(1965～ ),男 ,硕士 ,研究方向:主要从事新药制剂及质量标准研究 ,电话:020-85222706-312。
*通讯作者:王一飞。
关键词:木芙蓉叶;芙蓉抗流感片;金丝桃苷
中图分类号:R284. 1　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2007)08-1230-02
　　木芙蓉叶来源于锦葵科植物木芙蓉 H ibiscusm utabilis L.
的干燥叶 , 收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药
材(第一册)。 木芙蓉叶微辛 , 凉 , 归肺 , 肝经 , 具有清肺凉
血 , 散热解毒 ,消肿排脓的功效。临床用于肺热咳嗽 , 瘰疬 ,
肠痈;外治痈疖脓肿 , 脓耳 , 无名肿毒 , 烧 、烫伤。其制剂 “芙
蓉抗流感片”为木芙蓉叶采用水提醇沉工艺制成的浸膏片 ,
收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂
(第十一册)。具有清肺凉血 , 散热解毒的功效 , 主要用于流
行性感冒。
木芙蓉叶含有黄酮苷 、酚类 、氨基酸 、鞣质 、还原糖 , 木芙
蓉花黄酮苷包括异槲皮苷( Isoque rc itrin)、金丝桃苷 (Hypero-
side)、芸香苷(Rutin)等 [ 1] 。 林氏等 [ 2]应用 HPLC法测定了
木芙蓉中槲皮苷的含量。有记载 [ 3]芙蓉叶水提取液对甲 1
和甲 2型流感病毒的抑制作用 , 与金刚烷相对照无明显差
异。有报道用芙蓉抗流感片(每片 0. 3 g, 相当于生药 5 g),
每次 4片 ,每日 3次 ,连服 3 d,治疗流行性感冒 303例。 48 h
治愈病例达 81 , 24 h内治愈的显效率特别高。文献报
道 [ 4] ,黄酮类物质是抗流感病毒的活性成分之一 , 其可以拟
制流感病毒唾液酸酶的活性和拟制酶融合。石氏等 [ 5]运用
现代分离分析技术 ,研究银翘散抗流感病毒有效部位群中黄
酮类成分 ,发现来源于金银花药材的金丝桃苷为其活性成分
之一。因此 ,本实验参考有关文献 [ 6, 7]建立了木芙蓉叶药材
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及其制剂芙蓉抗流感片中金丝桃苷的含量测定方法。本法精
密度高 ,重复性好, 操作简便 ,可用于药材及成品的质量控制。
1　仪器与试药
Ag ilent 1100高效液相色谱仪:DAD检测器:7725 i手动
进样器;Chem station数据处理软件系统。 Sartorius分析天平
(d=0. 01 m g)(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。 CREST
ULTRASONICS CLEANER(m ade in M a lay sia, 540 W , 38. 5
kH z)。乙腈 、甲醇及四氢呋喃为色谱纯 , 水为制备纯水 , 其
他试剂均为分析纯。 金丝桃苷对照品由中国药品生物制品
检定所提供(批号:111521-200303), 木芙蓉叶药材从广州中
医药大学大药房有限公司购买 , 由本实验室樊化实验员鉴
定 , 标本保存于本实验室。芙蓉抗流感片由实验室自制。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件及系统适应性
Ag ilent Zo rbax SB C18(4. 6 mm ×250 mm , 5μm), ODS预
柱。流动相:乙腈-甲醇-四氢呋喃-0. 5 冰醋酸(1∶1∶19. 4∶
78. 6)。 流速:1. 00 m L /m in。柱温:30℃。 检测波长:363
nm。灵敏度:2. 000 AUFS。金丝桃苷出峰时间约为 16. 0 m in,
其理论塔板数为 3 600,与其相邻色谱峰的分离度大于 1. 5。
2. 2　对照品溶液的制备
精密称取金丝桃苷对照品 1. 45 mg, 置 25 m L量瓶中, 加
稀乙醇溶解并稀释至刻度 , 为金丝桃苷对照品贮备液。用时
以流动相稀释 1倍即得 0. 029 mg /mL的金丝桃苷对照品溶
液。
2. 3　供试品溶液的制备
2. 3. 1　药材供试品溶液的制备　取药材细粉 2 g, 精密称
定 , 按照中国药典 2005年版山楂叶项下方法处理 , 即得。
2. 3. 2　芙蓉抗流感片供试品溶液的制备　取芙蓉抗流感片
(批号 20040501), 研细 , 称取 1 g, 精密称定 , 置 50 mL量瓶
中 , 加稀乙醇 40 mL, 超声处理(540W , 38. 5 kH z)30 m in, 放
冷 , 用稀乙醇稀释至刻度 , 摇匀 , 用微孔滤膜 (0. 45 μm)滤
过 , 取续滤液 ,即得。
2. 4　线性范围
精密量取对照品溶液 2. 0, 4. 0, 8. 0, 10, 15, 20 μL,注入
高效液相色谱仪 , 记录色谱图 , 测定其峰面积值 ,并以面积值
(A)对进样量 (μg)进行回归 , 得回归方程:A =1 480. 9C ～
3. 175 7, r=0. 999 7。试验结果表明在 0. 058 ～ 0. 58 μg范围
内 , 金丝桃苷的峰面积与进样量有良好的线性关系。
2. 5　方法学考察
2. 5. 1　精密度试验　精密吸取 2. 3. 2项下供试品溶液 20
μL, 重复进样 5次 , 测定金丝桃苷峰面积值 , 其 RSD 值为
1. 59 。
2. 5. 2　稳定性试验　精密吸取 2. 3. 2项下供试品溶液 20
μL, 分别于 0, 1, 2, 4, 8 h, 进样 5 μL, 测定金丝桃苷峰面积
值 , 其 RSD值为 1. 92 。试验表明 , 样品供试溶液 8 h内稳
定性良好。
2. 5. 3　重复性试验　按拟订的含量测定方法 , 对同一批样
品(批号 20040501),分别制备 5份供试品溶液 , 分别进样 20
μL, 其 RSD值为 2. 89 。试验结果表明 ,本方法重复性良好。
2. 5. 4　回收率试验　取已知含量的芙蓉抗流感片 0. 50 g,
精密称定 , 5份 , 分别添加金丝桃苷对照品贮备液 4 mL
(0. 232 m g), 按上述供试品溶液处理方法及测定条件平行操
作 ,测得平均回收率为 97. 2 , RSD =2. 67 。
2. 6　样品测定
按拟订的色谱条件 ,精密吸取对照品溶液 10 μL及供试
品溶液 20 μL,注入高效液相色谱仪 ,记录色谱图 ,用外标法
计算含量 ,木芙蓉叶药材及芙蓉抗流感片的平均含量(n =
3)分别为 0. 268 3 mg /g及 0. 430 9 m g /g(RSD值为 1. 74 )。
对照品色谱图见图 1-A ,木芙蓉叶供试品色谱图见图 1-B,芙
蓉抗流感片供试品色谱图见图 1-C。
A
B
C
图 1　金丝桃苷对照品
A金丝桃苷对照品　B木芙蓉叶药材　C芙蓉抗流感片
3　讨论
3. 1　本法建立过程中 , 流动相的选择曾参照文献 [ 7]方法 ,采
用乙腈-1. 0 醋酸溶液 (15∶85), 流速 1. 0 mL /m in, 样品中
金丝桃苷出峰时间约 19 m in, DAD检测发现 , 吸收峰各点的
光谱图差异较大 ,吸收峰不纯 ,调节流速及流动相比例仍不
能改善。
3. 2　按照文献 [ 6]的方法用 70 甲醇超声提取制备供试品
溶液 ,按拟定的液相条件 ,进样分析 , 药材及成品中金丝桃苷
含量均明显低于本法所测结果。
3. 3　根据本法测定结果 , 芙蓉抗流感片金丝桃苷转移率不
到 10 ,原工艺的合理性有待于结合药效学试验进一步验
证。
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参考文献:
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高效液相色谱法测定甘草黄酮类成分中芒柄花素的含量
田嘉铭 , 　刘　华 , 　白雪梅 , 　贾天军
(河北北方学院实验中心 ,河北张家口 075029)
收稿日期:2006-07-19
作者简介:田嘉铭(1970～ ),男 ,讲师 ,从事中药组分研究及液相色谱技术工作。
关键词:芒柄花素;含量测定;高效液相色谱
中图分类号:R284. 1　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2007)08-1232-02
　　甘草 (GIycyrrh iza ura lensis F isch)为豆科(Legum inosae)
甘草属(Glycyrrhiza L inn. )多种植物的根和根茎。 传统医学
认为其有益气补中 、清热解毒 、祛痰止咳 、缓急止痛 、调和诸
药等功效 , 有 “十方九草”之说。 由于近年来人们发现甘草
中黄酮类成分有较强的生物活性 , 其抗肿瘤 [ 1] 、保肝 [ 2] 、解
痉镇痛 [ 3] 、对酶的抑制作用 [ 4]等已成为新的研究热点 。芒
柄花素是甘草中黄酮类的有效成分之一。本实验建立了测
定甘草黄酮类成分中芒柄花素的 HPLC方法 , 并测定了不同
批次的甘草中芒柄花素的含量 ,为甘草药材中黄酮类成分的
研究提供相关依据。
1　仪器与试剂
1. 1　仪器　H P1100高效液相色谱仪(Agilen t公司)包括:
四元泵 、在线脱气机 、VWB检测器;分析天平 (1 /10万 , 日
本);超声波清洗器。
1. 2　试剂　芒柄花素标准品(中国药品生物制品检定所),
乙腈(色谱纯), 三蒸水 ,四氢呋喃(分析纯),磷酸(分析纯)。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件 　色谱柱:YWGC18 (4. 6 mm ×250 mm
10μm),检测波长:274 nm , 流速;1. 0 m L /m in, 进样量:20
μL, 柱温:25 °C。梯度洗脱条件见表 1。
2. 2　供试品溶液制备　称取已干燥粉碎的不同批次的甘草
细粉 10. 000 g,置于 50 m L具塞锥形瓶中 , 加入适量甲醇 , 浸
泡 4 h, 超声提取 30 m in, 过滤 ,残渣再加入甲醇 50 m L, 超声
提取 30 m in,合并两次滤液 ,减压浓缩定容至 50 m L,进样前
过 0. 45 μm滤膜。
2. 3　方法学考察　
2. 3. 1　标准曲线制作　精密称取芒柄花素标准品 2. 00 m g,
表 1　 梯度洗脱条件
时间 /m in 乙腈 / 缓冲液 / 流速 /mL /rn in
0 15 85 1. 0
10 15 85 1. 0
40 45 55 1. 0
45 15 85 1. 0
加入甲醇 1 mL,使其完全溶解 ,用甲醇做 2、 4、 8、16、32倍稀
释 ,过 0. 45μm滤膜。每个稀释度依上述色谱条件进样 , 测
得峰面积 , 结果以浓度为横坐标 (X), 以峰面积为纵坐标
(Y),做标准曲线 , 得回归方程:A =67. 182C +376. 637, r=
0. 999 7, 线性范围:4. 062 5 ～ 260 μg /mL。色谱图见图 1。
图 1　芒柄花素标准品色谱图
1芒柄花素
2. 3. 2　精密度实验　精密吸取标准溶液 20μL, 在 l d内连
续进样 5次 ,以及连续 5 d分别进样 , 根据峰面积分别考察日
内精密度和日间精密度。 计算标准品日内精密度 RSD 为
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