全 文 ：［收稿日期］ 20130906(002)
［基金项目］ 国家自然科学基金项目(81160533，81360129)
［第一作者］ 温庆伟，高级工程师，博士，从事药效物质基础研究，Tel:0771-3218026，E-mail:wqw760623@ 163． com
［通讯作者］ * 黄仁彬，教授，博士生导师，从事生化药理学研究，Tel:0771-5339805，E-mail:huangrenbin518@ 163． com
阳桃根中苯醌类化合物的分离鉴定与含量测定
温庆伟，陈春霞，梁杏梅，徐小惠，黄仁彬*
( 广西医科大学药理学教研室，南宁 530021)
［摘要］ 目的:研究阳桃根(ACLＲ)中苯醌类化学成分的类型及含量测定方法。方法:利用色谱分离法、核磁共振技术对
阳桃根药材 60%乙醇提取物中的环己烷萃取部位进行分离、鉴定，并应用 HPLC 法对药材中的苯醌类化学成分进行含量测
定。结果:分离得到 2 个苯醌类化合物:2-methoxy-6-nonyl-cyclohexa-2，5-diene-1，4-dione (MNDD);2-dodecyl-6-methoxy-
cyclohexa-2，5-diene-1，4-dione (DMDD) ;MNDD，DMDD分别在 0. 177 ～ 2. 657 μg 和 0. 094 ～ 1. 416 μg 进样量与峰面积有良好
的线性关系;平均加样回收率为 98. 96%(ＲSD 1. 59%)，99. 55%(ＲSD 0. 98%)。结论:首次从植物中分离得到 2 个苯醌类化
合物;HPLC测定方法简便、快速、稳定、准确可靠、重复性好，可用于阳桃根药材中 MNDD，DMDD的质量控制。
［关键词］ 阳桃根;苯醌类化合物;分离鉴定;2-methoxy-6-nonyl-cyclohexa-2，5-diene-1，4-dione (MNDD);2-dodecyl-
6-methoxy-cyclohexa-2，5-diene-1，4-dione (DMDD)
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2014)11-0070-05
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfjx． 2014110070
［网络出版地址］ http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /11． 3495． Ｒ． 20140324． 1609． 024． html
［网络出版时间］ 2014-03-24 16:09
Isolation，Identification and Determination for
Benzoquinone Compounds from Averrhoa carambola Ｒoot
WEN Qing-wei，CHEN Chun-xia，LIANG Xing-mei，XU Xiao-hui，HUANG Ｒen-bin*
(Department of Pharmacology，Guangxi Medical University，Nanning 530021，China)
［Abstract］ Objective:To isolate and identify the benzoquinone compounds from Averrhoa carambola root
(ACLＲ)and establish its HPLC determination method． Method:The cyclohexane fraction of 60% ethanol extract
of the herb was separated by the repeated silica gel column，and identified by 1H-NMＲ，13C-NMＲ，HSQC，HMBC
and FTIＲ，etc． And the determination method of benzoquinone compound isolated from ACLＲ was established by
HPLC． Ｒesult:Two benzoquinone compounds were isolated from ACLＲ，namely 2-methoxy-6-nonyl-cyclohexa-2，
5-diene-1，4-dione (MNDD)，2-dodecyl-6-methoxy-cyclohexa-2，5-diene-1，4-dione (DMDD)． MNDD and
DMDD had a good linear relationship between sample size and peak area at the range of 0. 177-2. 657 μg and
0. 094-1. 416 μg，and their average recovery were 98. 96% (ＲSD 1. 14%) and 99. 55% (ＲSD 0. 98%) ，
respectively． Conclusion:The two benzoquinone compounds were separated for the first time from plants． And the
HPLC determination method can used for ACLＲ quality control for its convenience，rapidity，stability，accuracy，
reliability and good reproducibility．
［Key words］ Averrhoa carambola root; benzoquinone compound; isolation and identification;
determination method
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第 20 卷第 11 期
2014 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 11
Jun．，2014
阳桃根为酢浆草科植物阳桃的干燥根(亦称
“杨桃根”)，分布于云南、广东、广西及台湾地区，马
来西亚等国家也有分布［1-2］，在《广西本草选编》、
《全国中草药汇编》等均有收录。本课题组前期研
究证实其醇提取物、水提取物中的多糖等均具有明
显降低动物血糖水平、抗氧化等作用［3-5］。我们从
化学成分预试验结果发现:其石油醚提取液的醋酐 /
三氯甲烷-浓硫酸反应明显，推测可能与其含有较大
量的甾体、三萜或苯醌类化学成分有关［6］。
为了证实这个推测，本文对阳桃根药材 60%乙
醇提取物的化学成分进行分离、鉴定，并测定其含
量，详细方法与结果如下。
1 材料
1. 1 药材 阳桃根 Averrhoa carambola L． 在 2010
年 6 月收集于广西灵山县，经过广西中医药研究院
赖茂祥教授鉴定，晒干，粉碎。
1. 2 仪器与试剂 CAMAG Linomat 5 型半自动点
样仪、Ｒeprostar 3 型薄层色谱仪(瑞士);红外光谱仪
(PE，美国);Bruker AV-600 型核磁共振仪(TMS 内
标，德国)，1H-和13 C-NMＲ 谱分别在 600，150 MHz
条件下测定;X-5 型熔点测定仪(北京);柱层析硅胶
(200 ～ 300 目，青岛)。
安捷伦 1100 系列 HPLC(VWD 检测器，美国)，
UV-3101PC 型 紫 外-可 见 光 分 光 光 度 计
(SHIMADZU，日本)，GＲ-202 型电子天平(日本艾安
得)，KQ-500DE型超声波清洗仪(昆山市超声仪器
有限公司)，Millipore 超纯水机(Academic，美国)。
甲醇为色谱纯(Merck，德国)，水为超纯水，其余试
剂均为分析纯。
1. 3 分离步骤 取阳桃根粗粉 12 kg，加 8 倍量
60%乙醇，常压加热回流提取 3 次(1 h /次)，滤过，
合并滤液，减压浓缩至约 15 L;药液分别用 3 倍量环
己烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取 3 次，合并萃取液，分别
减压浓缩得到 10. 3，76. 6，153. 0，553. 0 g 的环己
烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取物和水溶物。
取环己烷萃取物(10. 3 g)，上样于硅胶柱中，用
环己烷-乙酸乙酯溶液(100 ∶ 0，20 ∶ 1，18 ∶ 1，15 ∶ 1，
12∶ 1，10∶ 1，8∶ 1，5∶ 1，3∶ 1，1∶ 1，0∶ 100)洗脱，得到组
分 Fr． 1-Fr． 8。Fr． 4(5. 0 g)再用硅胶柱反复分离，以
环己烷-乙酸乙酯溶液(100∶ 0，20∶ 1，18∶ 1，15∶ 1)洗脱，
即得到化合物(1)940 mg和化合物(2)1 410 mg。
1. 4 结构鉴定 测定以上两个化合物的1H-，13 C-
NMＲ，HSQC和 HMBC谱，经推导分析，其 H和 C 的
化学位移值及归属如下。
化合物 1 黄色针状结晶，13C-NMＲ(CDCl3)δ:
187. 9 (C-1)，147. 3 (C-2) ，107. 2 (C-3) ，182. 3
(C-4) ，133. 3 (C-5) ，159. 0 (C-6) ，56. 4 (C-7，
OMe) ，28. 6 (C-1) ，27. 8 (C-2) ，32. 0 (C-7) ，
22. 8 (C-8) ，14. 3 (C-9) ，29. 8-29. 4 (m，C3-
6)。1H-NMＲ (CDCl3)δ:5. 87 (1H，d，J = 2. 8 Hz，
H-3)，6. 48 (1H，d，J = 1. 7 Hz，H-5) ，3. 81 (3H，
s，H-7) ，2. 41 (2H，dd，J = 7. 2，0. 9 Hz，H-1) ，
0. 87 (3H，t，J = 7. 0 Hz，H-9) ，1. 33-1. 25 (m，
overlapped)。
化合物 2 黄色针状结晶，m． p． 63. 5 ～ 64. 3
℃。 IＲ (KBr) cm －1:449. 8， 717. 6， 896. 4，
1 022. 0，1 063. 5，1 177. 9，1 232. 7，1 326. 6，
1 472. 9，1 597. 8，1 653. 0，1 683. 9，1 851. 0，
2 916. 5，2 955. 9。13 C-NMＲ(CDCl3) δ:186. 7 (C-
1)，146. 6 (C-2) ，106. 1 (C-3) ，181. 1 (C-4) ，
131. 8 (C-5) ，157. 8 (C-6) ，55. 2 (C-7，OMe) ，
27. 7 (C-1) ，26. 7 (C-2) ，30. 9 (C-10) ，21. 7
(C-11) ，13. 1 (C-12) ，28. 7-28. 2 (m， C3-
9)1H-NMＲ (CDCl3)δ:5. 87 (1H，d，J = 2. 3 Hz，
H-3)，6. 47 (1H，d，J = 0. 9 Hz，H-5) ，3. 81 (3H，
s，H-7) ，2. 41 (2H，dd，J = 11. 2，4. 1 Hz，H-1) ，
0. 87 (3H，t，J = 7. 0 Hz，H-12) ，1. 60-1. 24 (m，
overlapped)。
由上可确定化合物 1，2 分别为 2-methoxy-6-
nonyl-cyclohexa-2，5-diene-1，4-dione (MNDD);2-
dodecyl-6-methoxycyclohexa-2， 5-diene-1， 4-dione
(DMDD)。经检索，除有文献报道其合成方法
外［7-8］，还未见有从植物中分离得到这两个化合物
的报道。其化学结构式见图 1。
图 1 MNDD和 DMDD化学结构
2 含量测定
KKAy小鼠灌胃给药 DMDD 8 周后，能显著减
缓小鼠肾脏 AGE形成、降低小鼠血糖水平及相关蛋
白表达(如 AGE 受体，NF-κB 等);同时，能改善糖
尿病依赖型蛋白尿的症状和肾小球系膜基质扩张、
增加肌酐清除率，降低血清尿素氮［9］。以上结果均
说明 DMDD具有一定的降血糖及改善糖尿病症状
的作用，是阳桃根主要的降血糖活性成分之一，对药
·17·
温庆伟，等:阳桃根中苯醌类化合物的分离鉴定与含量测定
材质量具有很好的监控作用。本文按照《中药质量
标准分析方法验证指导原则》(以下简称“指导原
则”)［10］，对药材中上述 2 种苯醌类化学成分的含量
测定方法进行研究。
2. 1 色谱条件 Thermo ODS-2HYPEＲSIL 色谱柱
(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)，流动相甲醇-水(88 ∶
12)，进样量 5 μL，流速 1. 0 mL·min －1，检测波长
270 nm，柱温 30 ℃。
2. 2 方法学考察
2. 2. 1 最大吸收波长 分别对药材供试品溶液、
MNDD和 DMDD 对照品溶液进行 UV 扫描，结果在
270 nm左右均有最大吸收峰，故选择 270 nm 作为
检测波长。
2. 2. 2 供试品溶液制备 取药材粉末约 0. 5 g，精
密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇 25 mL，称定
质量，加热回流 45 min，冷却，用甲醇补足减失的质
量，摇匀，滤过(0. 45 μm)，取续滤液即得。
表 1 阳桃根中MNDD加样回收率试验
No． 取样量 / g 样品中含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% ＲSD /%
1-1 0. 125 1 0. 799 7 0. 590 4 1. 378 7 98. 07
1-2 0. 123 3 0. 788 2 0. 590 4 1. 384 0 100. 91
1-3 0. 124 6 0. 796 5 0. 590 4 1. 370 8 97. 27
2-1 0. 250 8 1. 603 2 1. 180 8 2. 750 2 97. 14
2-2 0. 252 3 1. 612 8 1. 180 8 2. 766 9 97. 74 1. 59
2-3 0. 253 4 1. 619 9 1. 180 8 2. 784 0 98. 59
3-1 0. 502 2 3. 210 3 2. 361 6 5. 585 2 100. 56
3-2 0. 501 8 3. 207 8 2. 361 6 5. 596 0 101. 13
3-3 0. 503 2 3. 216 7 2. 361 6 5. 559 5 99. 20
2. 2. 3 线性范围 取 MNDD(纯度 82. 0%)对照品
约 7. 2 mg，精密称定，置 20 mL量瓶中，加甲醇溶解
并稀释至刻度，摇匀，即得每 1 mL 含 0. 295 mg 的
MNDD贮备液。
取 DMDD(纯度 82. 8%)对照品约 3. 8 mg，精密
称定，置 10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，
摇匀，即得每 1 mL含 0. 315 mg的 DMDD贮备液。
分别精密吸取 MNDD贮备液 6 mL和 DMDD贮
备液 3 mL，置 10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得
混合对照品溶液(MNDD 质量浓度为 0. 177 g·L －1，
DMDD质量浓度为 94. 4 mg·L －1);精密吸取上述混
合对照品溶液 1，3，5，10，15 μL 进样，测定，以进样
量(μg)为横坐标(X)，峰面积积分值为纵坐标(Y)，
绘制标准曲线得回归方程为 YMNDD = 1 174. 0X －
16. 331(Ｒ2 = 0. 999 9，n = 5);YDMDD = 1 256. 3X －
14. 343(Ｒ2 = 0. 999 9，n = 5)。
结果表明 MNDD，DMDD 进样量在 0. 177 ～
2. 657，0. 094 ～ 1. 416 μg时，与峰面积呈良好的线性
关系，且分离度 ＞ 1. 5。见图 2。
A. 对照品;B. 供试品;1. MNDD;2. DMDD
图 2 阳桃根药材 HPLC
2. 2. 4 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液 5
μL，重复进样 5 次，测定 MNDD 和 DMDD 峰面积的
ＲSD分别为 0. 81%，0. 93%，说明仪器的精密性良好。
2. 2. 5 重复性试验 取同一批药材粉末 6 份，每份
约 0. 5 g，精密称定，按 2. 2. 2 项下方法制备;精密吸
取各供试品溶液 5 μL 进样，测定。结果 MNDD 和
DMDD的峰面积 ＲSD ＜2%，说明本方法重复性较好。
2. 2. 6 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液 5
μL，分别于 0，2，4，6，8，10 h 进样，测定。结果
MNDD和 DMDD 的峰面积 ＲSD 均 ＜ 2. 0%，说明样
品溶液在 10 h内稳定。
2. 2. 7 加样回收率试验 取已知含量药材粉末 9
份，分别称取约 0. 125，0. 25，0. 50 g(n = 3)，精密称
定，分别精密加入适量对照品，按 2. 2. 2 项下方法制
得供试品溶液;精密吸取溶液 5 μL，进样，测定，计
算回收率。结果见表 1 ～ 2。
此外，不同人员的“中间精密度”试验和不同检
测波长(265，270，275 nm)，柱温(25，30，35 ℃)，流
速(0. 9，1. 0，1. 1 mL /min)以及流动相比例(± 5%)
的“耐用性试验”结果也达到《指导原则》要求，说明
本方法稳定、可靠。
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第 20 卷第 11 期
2014 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 11
Jun．，2014
表 2 阳桃根中 DMDD加样回收率试验
No． 取样量 / g 样品中含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% ＲSD /%
1-1 0. 125 1 0. 306 8 0. 314 8 0. 621 1 99. 84
1-2 0. 123 3 0. 302 4 0. 314 8 0. 621 6 101. 40
1-3 0. 124 6 0. 305 6 0. 314 8 0. 622 0 100. 51
2-1 0. 250 8 0. 615 1 0. 629 6 1. 244 3 99. 94
2-2 0. 252 3 0. 618 8 0. 629 6 1. 237 5 98. 27 0. 98
2-3 0. 253 4 0. 621 5 0. 629 6 1. 242 7 98. 67
3-1 0. 502 2 1. 231 6 1. 259 2 2. 480 6 99. 19
3-2 0. 501 8 1. 230 7 1. 259 2 2. 475 6 98. 86
3-3 0. 503 2 1. 234 1 1. 259 2 2. 484 6 99. 31
2. 3 样品测定 取广西灵山县产不同批次药材粉
末约 0. 5 g，精密称定，照上述方法制得供试品溶液，
进样，测定。结果见表 3。
表 3 不同批次阳桃根药材中MNDD，DMDD含量测定
批号
取样量
/ g
MNDD
平均值
DMDD
平均值
20100605 0． 502 0 8． 49 3． 34
0． 501 2
20121113 0． 504 7 0． 01 －
0． 500 8
20121216 0． 505 9 0． 10 0． 08
0． 504 8
注:“ －”表示未检出。
3 讨论
试验结果表明 MNDD，DMDD 在阳桃根中含量
较大，是药材主要的降血糖有效成分之一［7］，但这
两种成分在不同批次的药材中含量差异较大;还需
要进一步研究与植物的生长时间、加工方法或保存
措施间的关系。
药材溶液、MNDD和 DMDD 对照品溶液分别在
278. 7，267. 0，267. 2 nm 有最大的紫外吸收。为了
能同时兼顾三者，本实验中选择了与 MNDD，DMDD
最大吸收波长较接近的 270 nm作为检测波长。
MNDD和 DMDD同为苯醌类化合物，具有相同
的母核，但侧链的长度不一样。本文多次采用甲醇
浸泡的方式(不加热)对不同批次药材进行提取、测
定，结果均能测出 MNDD。由此说明，MNDD不应是
DMDD的次生产物，而是药材中的固有成分。
经检索，MNDD，DMDD均是首次从植物分离得
到的化合物，而且都含有较长的烷烃侧链，为了考察
其化学性质是否稳定。分别将 MNDD，DMDD 溶于
甲醇(质量浓度分别为 0. 295，0. 315 mg·g －1)，密
封，置于冰箱冷藏(4 ℃)7 d后，重新进样，用峰面积
归一法计算，发现纯度下降了约 7%，并且在色谱图
上产生较多小的杂峰。说明 MNDD，DMDD 长期放
置后容易降解，这可能也是有些药材测不到这两个
成分的原因之一，提示在采收或加工阳桃根药材时
应避免使用爆晒、加热等加工方式;同时，应尽量缩
短保存或贮藏的时间，以免化学成分降解。
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［责任编辑 顾雪竹］
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