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慈菇消脂丸对酒精性脂肪性肝病大鼠
血清 APN与 TNF-α的影响*
杨少军1 古宁艳2 王琦2 井小会2
杨少军，男，主任医师，硕士生导师
* 甘肃省教育厅科研项目(No． 1006-06)
(1 甘肃中医学院附属医院;2 甘肃中医学院)
摘要:目的 研究慈菇消脂丸对酒精性脂肪性肝病(AFLD)大鼠血清脂联素(APN)与肿瘤坏死因
子(TNF-α)的影响，探讨其作用机制。方法 用高脂饲料喂食加乙醇灌胃的方法复制酒精性脂肪
肝模型。随机分为正常组、模型组、慈菇消脂丸高剂量组、中剂量组、低剂量组、罗格列酮阳性药物
对照组。慈菇消脂丸对模型大鼠治疗 4 周后，观察模型大鼠肝组织病理形态学的变化;血清肝功
能、APN和 TNF-α 含量变化。结果 模型组大鼠肝小叶内出现大量脂肪变性，汇管区伴有炎性细
胞浸润以及部分点状肝细胞坏死。与正常组相比较，模型组大鼠谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶
(AST)、TNF-α均升高，APN明显下降。与模型组相比较，慈菇消脂丸各剂量组，肝脏脂肪变性和炎
症均有不同程度的减轻。慈菇消脂丸能降低模型大鼠 ALT、AST、TNF-α 含量，对 APN 亦有较为明
显的改善，差异具有统计学意义(P ＜ 0． 05)。结论 慈菇消脂丸具有改善肝功能，调节 TNF-α 和
APN这 2 种脂质因子，减轻肝细胞脂肪变性，从而起到对酒精性脂肪性肝病的治疗作用。
关键词:慈菇消脂丸;酒精性脂肪肝;肿瘤坏死因子;血清脂联素;大鼠
中图分类号:Ｒ285． 5 doi:10． 3969 / j． issn． 1006-2157． 2013． 12． 010
Influences of Cigu Xiaozhi Wan on serum APN and TNF-α in rats with
alcoholic fatty liver disease*
YANG Shao-jun1，GU Ning-yan2，WANG Qi2，JING Xiao-hui2
(1 Affiliated Hospital of Gansu College of Traditional Chinese Medicine;2 Gansu College of Traditional
Chinese Medicine)
Abstract:Objective:To study the effect of Cigu Xiaozhi Wan on serum adiponectin (APN)and tumor
necrosis factor (TNF-α) in rats with alcoholic fatty liver disease (AFLD)， and to discuss the
mechanism． Methods The rat model of AFLD was established by feeding high fat diet and
intragastrically giving ethanol． All rats were randomly divided into normal group，model group，high-dose
group，mid-dose group，low-dose group and positive control group． After 4 weeks of treatment with Cigu
Xiaozhi Wan on model rats，histopathological changes of liver were observed;serum liver function and
levels of APN and TNF-α were detected． Ｒesults In model group，there were steatosis in hepatic
lobule，infiltration of a large number of inflammatory cells and spotty necrosis of partial hepatocytes in
portal area． The levels of ALT，AST and TNF-α increased and the level of APN decreased significantly in
model group compared with those in normal group． In high-dose，mid-dose and low-dose groups，
steatosis and inflammation in liver were relieved in varying degrees． Cigu Xiaozhi Wan could decrease the
levels of ALT，AST and TNF-α of model rats，and ameliorate the level of APN significantly，the
differences of which were statistically significant (P ＜ 0． 05 － 0． 01)． Conclusion Cigu Xiaozhi Wan
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第 36 卷第 12 期 2013 年 12 月
Vol． 36 No． 12 Dec． 2013
北京中医药大学学报
Journal of Beijing University of Traditional Chinese Medicine
has the effects of ameliorating liver function，regulating the levels of TNF-α and APN and relieving steato-
sis of hepatocytes，so as to be used in treatment on AFLD．
Key words:Cigu Xiaozhi Wan;alcoholic fatty liver disease;TNF-α;APN;rats
酒精性脂肪肝是酒精性肝病的早期阶段，其发
展为肝硬化的危险性比单纯脂肪肝高［1］。目前其
发病机理尚不完全清楚，缺乏有效的临床治疗药物。
本研究旨在观察“慈菇消脂丸”对酒精性脂肪肝大
鼠血清脂联素(APN)与肿瘤坏死因子(TNF-α)的影
响，以进一步探讨“慈菇消脂丸”调节脂质代谢的作
用机理。
1 材料与方法
1． 1 动物
健康成年 SD 雄性大鼠 72 只，体重为(200 ±
20)g，SPF级大鼠由甘肃中医学院实验动物中心提
供，实验动物生产许可证号:SCXK2004 － 006。
1． 2 药品
慈菇消脂丸(浓缩型) ，主要有山慈菇、泽泻、山
楂、丹参、土鳖虫、柴胡、黄芩、法半夏、决明子等 15
味药物组成(甘肃中医学院附属医院制剂中心提
供，生产批号:101215)。罗格列酮片:成都恒瑞制
药有限公司(批准文号:国药准号 H20041399，批号:
20090422)。
1． 3 器材
MA-100A型酶标仪(杭州博特仪器设备有限公
司) ，TNF-α测定试剂盒为厦门惠嘉生物科技公司
ELISA提供。
2 方法
2． 1 动物造模及分组
按文献方法，取 SD 雄性大鼠 62 只，体重(200
± 20)g，每日给予大鼠标准食物和饮用水各 2 次，
保持光照和避光循环饲养各 12 h。将所有大鼠以随
机数字表法抽取 10 只为空白对照组，空白对照组每
日灌胃生理盐水 4 mL。其余 52 只采用乙醇灌胃法
建立酒精性脂肪肝大鼠模型:给予大鼠 40%乙醇，
剂量为乙醇 8 g /(kg·d)灌胃，每日 2 次，间隔 8 h，
至 4 周末。5 周开始，将乙醇浓度增至 50%，剂量为
乙醇 10 g /(kg·d) ，至 8 周末随机处死造模大鼠 2
只，取出肝脏做病理切片，检测证实模型复制成功。
造模成功后，空白对照组继续每日灌胃生理盐水 4
mL，造模的 50 只大鼠按体重大小排列，通过随机数
字法分为模型组、阳性药物对照组、慈菇消脂丸组
(包括高剂量、中剂量、低剂量组)5 组，继续酒精灌
胃 4 周，并分别灌服相应药物。实验期间观察体重、
饮食。造模时间共 12 周。模型组:1 ～ 8 周建立酒
精性脂肪肝大鼠模型的同时，在每次灌服乙醇 1 h
后给予等体积灭菌注射用水。
2． 2 给药
造模完成后，按人与大鼠体表面积比折算成等
效剂量。高剂量组:按 10 倍量即 37． 5 g /kg 体重，
中剂量组:按 5 倍量即 18． 8 g /kg 体重。低剂量组:
按 2 倍量即 7． 5 g /kg 体重;西药组:1 g /kg 体重;慈
菇消脂丸各治疗组(高、中、低组)及阳性药物对照
组均灌胃给药 4 周，每天 1 次。灌胃体积为 10 mL /
kg大鼠。空白组每日灌胃等剂量的生理盐水。
2． 3 处理方法
末次给药后，大鼠禁食 12 h，饮水不限，称大鼠
体重。大鼠处死后，股主动脉采血制备血清;作腹部
正中切口打开腹腔，迅速取出肝脏，称重，观察大体
外观后，取肝左叶相同部位 0． 5 g 放入 10%多聚甲
醛中，供 HE 染色以及做免疫组化用。保存在 － 80
℃冰箱中。
2． 4 观察指标与项目
肝功能等普通血系列指标，APN 及 TNF-α 均采
用酶联免疫法(ELISA) ，严格按说明书操作。光镜
下评估肝脂肪变性程度，判断标准按照脂变细胞占
肝细胞的百分比进行脂变程度分级。
2． 5 统计方法
采用统计软件 SPSS11． 0 进行统计学分析，所有
指标用 珋x ± s 表示，组间比较采用两样本均数的 t
检验。
3 结果
3． 1 慈菇消脂丸对酒精性脂肪肝大鼠血清中 AST、
ALT水平的影响
从结果可知，酒精性脂肪肝大鼠的血清中 AST、
ALT水平明显增加，慈菇消脂丸对改善模型大鼠血
清 AST、ALT水平差异显著。与阳性对照组比较，差
异不明显，结果见表 1。
3． 2 慈菇消脂丸对酒精性脂肪肝大鼠血清 TNF-α
水平的影响
酒精性脂肪肝大鼠 TNF-α 水平显著高于正常
组，阳性对照组和慈菇消脂丸 3 剂量组均能减低大
鼠 TNF-α水平，但 3 剂量组与阳性对照组之间差异
不显著，结果见表 2。
438 北京中医药大学学报 第 36 卷
表 1 各组大鼠血清 AST、ALT水平比较(U/L;n = 10;珋x ± s)
Table 1 Comparison in levels of serum AST and ALT in rats of all groups (U/L;n = 10;珋x ± s)
组别 Group 剂量 Dose (g /kg) AST ALT
正常组 Normal group － 79． 10 ± 4． 23▲▲ 36． 40 ± 1． 44▲▲
模型组 Model group － 214． 90 ± 35． 06★★ 107． 10 ± 18． 47★★
慈菇消脂丸高剂量组 High-dose group 37． 5 68． 90 ± 3． 93▲▲ 42． 10 ± 2． 42▲▲
慈菇消脂丸中剂量组 Mid-dose group 18． 8 91． 50 ± 3． 04▲▲ 64． 70 ± 5． 05★▲▲
慈菇消脂丸低剂量组 Low-dose group 7． 5 124． 80 ± 15． 49★▲▲ 81． 60 ± 13． 44★★
阳性对照组 Positive control group 1． 0 68． 50 ± 3． 51▲▲ 66． 50 ± 2． 31▲▲
F 1278． 325 649． 957
P 0． 00 0． 00
注:与正常组比较★P ＜ 0． 05 ★★P ＜ 0． 01;与模型组比较 ▲▲P ＜ 0． 01。
Note:★P ＜ 0． 05 ★★P ＜ 0． 01 compared with normal group;▲▲P ＜ 0． 01 compared with model group．
表 2 各组大鼠血清 TNF-α水平比较(n = 10;珋x ± s)
Table 2 Comparison in level of serum TNF-α in
rats of all groups (n =10;珋x ± s)
组别 Group 剂量 Dose (g /kg) TNF-α(ng /L)
正常组 Normal group － 40． 77 ± 7． 98
模型组 Model group － 81． 99 ± 8． 22★★
慈菇消脂丸高剂量组
High-dose group 37． 5 59． 70 ± 11． 53
▲▲
慈菇消脂丸中剂量组
Mid-dose group 18． 8 65． 88 ± 6． 74
▲▲
慈菇消脂丸低剂量组
Low-dose group 7． 5 74． 22 ± 7． 85
▲
阳性对照组
Positive control group 1． 0 60． 17 ± 7． 56
▲▲
F 415． 733
P 0． 00
注:与正常组比较★★P ＜ 0． 01;与模型组比较▲P ＜ 0． 05 ▲▲
P ＜ 0． 01。
Note:★★P ＜ 0． 01 compared with normal group;▲P ＜ 0． 05 ▲
▲P ＜ 0． 01 compared with model group．
3． 3 慈菇消脂丸对酒精性脂肪肝大鼠血清 APN 水
平的影响
模型组大鼠 APN 水平降低，具有显著性差异。
与模型组比较，慈菇消脂丸 3 剂量组和阳性对照组
APN水平均有所上升，差异有统计学意义。结果见
表 3。
3． 4 各组大鼠肝脏病理学变化
3． 4． 1 大体观察
肉眼观察正常组大鼠肝脏形态正常;模型组大
鼠肝脏外观呈弥漫性肿大，表面色泽苍白或带灰黄
色，包膜紧张，边缘钝而厚，质如面团，压迫时出现凹
陷，切面油腻状;与模型组相比，各剂量组大鼠肝脂
肪变性程度均有不同程度的改善。
表 3 各组大鼠血清 APN比较(n = 10;珋x ± s)
Table 3 Comparison in level of serum APN in
rats of all groups (n = 10;珋x ± s)
组别 Group 剂量 Dose (g /kg) APN
正常组 Normal group － 24． 51 ± 7． 06
模型组 Model group － 0． 40 ± 0． 11★★
慈菇消脂丸高剂量组
High-dose group 37． 5 0． 57 ± 0． 12
▲
慈菇消脂丸中剂量组
Mid-dose group 18． 8 0． 48 ± 0． 11
▲
慈菇消脂丸低剂量组
Low-dose group 7． 5 0． 47 ± 0． 14
阳性对照组
Positive control group 1． 0 0． 58 ± 0． 15
▲
F 1585． 996
P 0． 00
注:与正常组比较★★P ＜ 0． 01;与模型组比较▲P ＜ 0． 05。
Note:★★P ＜ 0． 01 compared with normal group;▲P ＜ 0． 05
compared with model group．
3． 4． 2 HE染色光镜观察
正常组:肝小叶内无脂肪变性炎症和坏死;模型
组:肝小叶内出现大量脂肪变性，汇管区伴有炎细胞
浸润以及部分点状肝细胞坏死;慈菇消脂丸各剂量
组，肝脏脂肪变性和炎症均有不同程度的减轻。见
图 1(彩图，见插页 2)。
各组大鼠组织病理学分级见表 4。与正常组比
较，模型组大鼠肝脏脂肪变性程度明显增高(P ＜
0． 01) ;与模型组相比，慈菇消脂丸低、中剂量组脂
肪变性程度有所降低(P ＜ 0． 05) ，慈菇消脂丸高剂
量组和阳性对照组脂肪变性程度明显降低(P ＜
0． 01)。
538第 12 期 杨少军等 慈菇消脂丸对酒精性脂肪性肝病大鼠血清 APN与 TNF-α的影响
表 4 各组大鼠肝脏脂肪变性程度(n = 10)
Table 4 Hepatic steatosis severity in rats of all groups (n = 10)
组别 Group
0 级 ～正常
0-normal
1 级 ～轻度
1-mild
2 级 ～轻中度
2-mild to moderate
3 级 ～中度
3-moderate
4 级 ～重度
4-severe
正常组 Normal group 10 0 0 0 0
模型组 Model group* 0 0 1 1 8
慈菇消脂丸高剂量组 High-dose group△△ 0 7 2 1 0
慈菇消脂丸中剂量组 Mid-dose group△△ 0 4 2 3 1
慈菇消脂丸低剂量组 Low-dose group△△ 0 1 2 5 2
阳性对照组 Positive control group＊＊ 1 6 1 1 1
注:与正常组比较* P ＜ 0． 05 ＊＊P ＜ 0． 01;治疗组与模型组比较△△P ＜ 0． 01。
Note:* P ＜ 0． 05 ＊＊P ＜ 0． 01 compared with normal group;△△P ＜ 0． 01 compared between treatment group and model
group．
4 讨论
慈菇消脂丸有化痰解毒、消脂散结、逐瘀通络功
效。方中君药山慈菇主要起化痰降脂作用。丹参有
改善微循环、抗氧化、抗自由基、促进肝脾回缩的作
用，泽泻可抑制外源性胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)
的吸收，影响内源性 TC 及抑制肝内 TG 的合成，决
明子可升高高密度脂蛋白，降低 TC，抗血小板聚集，
软化血管，抗脂肪肝。何首乌对大鼠实验性脂肪肝
过氧化脂质含量上升有显著对抗作用，能使血清游
离脂肪酸(FFA)及肝脏过氧化脂质显著下降。其
所含的蒽醌类化合物还能促进肠蠕动，抑制胆固醇
在肠道再吸收，并促进胆固醇代谢［2］。ALT 和 AST
是反映肝细胞损害的常用酶学检查指标。ALT主要
分布于细胞质，而 AST 主要分布于细胞质和线粒
体，是一种线粒体酶，极易受到酒精的影响［3］。
TNF-α是一种多功能的细胞因子，可在多种组织细
胞中合成与分泌。TNF-α在酒精性肝病的发生发展
过程起着重要作用。APN 是由脂肪组织分泌的一
种脂源性细胞因子，具有类似胶原结构的蛋白，与
TNF-α有高度同源性。APN 是脂肪细胞因子中与
胰岛素抵抗关系最紧密的一种特异性细胞因子，具
有抗炎、调脂、降糖与胰岛素增敏等作用。同时也是
目前己知的唯一与肥胖呈负性相关的脂肪分泌蛋
白，APN 的分泌随着脂肪容量增大，其分泌反而
减少。
综上所述，APN 与 TNF-α 具有高度的同源性，
均可由脂肪细胞分泌，两者化学结构非常相似，能分
别与对方受体结合，而且共用一个信号通道，但发挥
的生物学效应却完全相反。而且现在的体内体外实
验都证实，TNF-α 和 APN 能相互抑制对方的产生，
并在对方的靶组织内拮抗对方的效应。酒精性脂肪
肝发生时，APN 和 TNF-α 可能相互抑制，影响酒精
性脂肪肝的发展，这 2 种脂质因子系统的失衡是酒
精性脂肪肝发病机制的一个重要因素。
本研究结果显示，慈菇消脂丸对酒精性脂肪肝
大鼠模型 AST、ALT等指标治疗后有显著改善作用;
对 TNF-α以及 APN均有较为明显的调节作用，表明
其作用机制可能就是基于调节 TNF-α 和 APN 这 2
种脂质因子，减轻肝细胞脂肪变性，从而起到对酒精
性脂肪肝的治疗作用。
参考文献:
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Can JGas － troenterol，2000，14(4) :327 － 329．
(收稿日期:2013-05-12)
638 北京中医药大学学报 第 36 卷