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川产中药材草红藤质量标准研究



全 文 :成都中医药大学学报
Journal of Chengdu University of TCM
2011 年 3 月第 34 卷第 1 期
Mar. 2011,Vol. 34,No. 1
川产中药材草红藤质量标准研究
张梅 张伊 雷晓莉 陈胡兰
( 1. 成都中医药大学药学院,中药材标准化教育部重点实验室,中药资源系统研究与
开发利用省部共建国家重点实验室培育基地,四川 成都 611137)
摘 要: 目的: 建立草红藤药材质量标准。方法: 采用常规显微鉴别法,研究草红藤药材及粉末显微
特征; 以标准药材及二氢杨梅素为对照,研究建立草红藤药材的薄层鉴别方法; 采用药典方法测定草红藤
药材水分、灰分含量; 采用 HPLC法建立草红藤药材中二氢杨梅素的含量测定方法。结果: 建立了草红藤
药材显微鉴别及薄层鉴别方法; 确定草红藤药材中二氢杨梅素含量。结论: 研究结果为完善草红藤药材质
量控制方法,建立该药材国家标准奠定了实验基础。
关键词: 草红藤; 质量标准
中图分类号: R282. 5 文献标识码: A 文章编号: 1004-0668 ( 2011) 01-0076-04
基金项目: 四川省科技厅科研基金资助项目 ( 编号: 2009SZ0227)
作者简介: 张梅,女,1963 年生; 教授,博士; 研究方向: 中药及其复方物质基础及质量标准化研究。
Study on the Quality Standards of Radix Shuteria Produced in Sichuan
ZHANG Mei,ZHANG Yi,LEI Xiao-li,et al
( 1. School of Pharmacy,Chengdu University of Traditional Chinese Medicine;
2. Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicines of Ministry of Education;
3. State Key Laboratory Breeding Base of Systematic research,development and Utilization of Chinese Medicine Resources,Chengdu,611137)
[Abstract]Objectives: To establish quality standards of Radix Shuteria. Methods: Microscopic features were observed by
means of microscopic identification; thin layer chromatographic method was conducted using reference drug and dihydromyricetin as the
reference substance; contents of water and ash were measured by methods specified in Chinese Pharmacopoeia; content of dihydromyr-
icetin was determined by HPLC. Results: Microscopic and thin layer chromatographic identification methods were established,and
contents of dihydromyricetin were determined. Conclusion: The research results have laid experimental foundations for the establish-
ment of comprehensive and national standards for the quality control of Radix Shuteria.
[Key words]: Shuteria pampaniniana; quality standard
草红藤为豆科宿苞豆属植物有毛宿苞豆
Shuteria pampaniniana Hand. -Mazz. 的干燥全草,
具有清热解毒,消肿等功效,主治阑尾炎,乳腺
炎,腮腺炎,肺结核咯血[1]。草红藤主产成都、
夹江、安县、平武、北川、筠连、长宁、古蔺等地
市,为四川常用中药材。对草红藤药材的质量控制
仅《四川省中药材标准》1987 年版有简单的外观
性状描述[2],2010 年版 《中国药典》尚未收载。
为促进川产草红藤药材资源的合理利用和开发,完
善其质量控制方法,作者对草红藤药材质量标准进
行了初步研究,采用药典方法测定了草红藤药材水
分、灰分含量,建立了草红藤药材的定性鉴别及定
量分析方法,研究结果为建立该药材国家标准奠定
了实验基础。
1 仪器与试药
1. 1 仪器
奥林巴斯 CH20 显微镜 ( 日本) ; Agilent 1100
高效液相色谱仪 ( 美国)
1. 2 材料与试药
草红藤药材: 采购或采集于四川各地: 南充、
北川、雁门关、青川、广元、都江堰青城山、眉山
悦兴镇、新都天回镇、龙泉、洛带。由成都中医药
大学裴瑾教授鉴定为豆科宿苞豆属植物有毛宿苞豆
Shuteria pampaniniana Hand. -Mazz的干燥全草。
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DOI:10.13593/j.cnki.51-1501/r.2011.01.026
第 1 期 张梅 等 川产中药材草红藤质量标准研究
二氢杨梅素对照品: 成都普思生物科技有限公
司,批号: PS08120601,纯度达 98% ; 所用试剂
均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 显微鉴别
照《中国药典》2010 版一部显微鉴别法 ( 附
录 II C) ,观察草红藤药材茎横切面、叶表面观及
粉末特征。
2. 1. 1 茎横切面特征
表皮细胞 1 列,外被角质层 ( 老茎最外为数
列木栓细胞) ,其表面可见非腺毛残基。皮层为 2
~ 5 列厚角细胞,有的含草酸钙方晶或红棕色物
质。中柱鞘纤维连续或断续排列成环,其周围薄壁
细胞中常含草酸钙方晶,形成晶纤维 ( 纵切面
观) 。韧皮部细胞多皱缩,有时间有大的薄壁细
胞,外侧常有裂隙,散在草酸钙方晶。形成层不明
显,木质部较宽,由导管、木纤维、木薄壁细胞组
成。导管单个散在或多个相聚,直径 40 ~ 85 μm,
有的含黄色分泌物。射线多不明显,由 1 ~ 2 列细
胞组成,髓部细胞有的具纹孔。见图 1。
图 1 草红藤茎横切面
2. 1. 2 叶表面观
非腺毛由 1 ~4个细胞组成,长 220 ~ 1500 μm,
毛尖的第一个细胞细长,具小疣状凸起,基部的 1
~3个细胞特短,长 10 ~35 μm,表皮细胞垂周壁弯
曲,气孔多为平轴式,少数不定式。侧脉外侧的薄
壁细胞中含 1 ~4列草酸钙方晶。见图 2,3。
图 2 草红藤叶表面观—非腺毛图
图 3 草红藤叶表面观—气孔图
2. 1. 3 粉末特征
本品粉末棕黄色。非腺毛稍弯曲,单细胞,长
90 ~ 140 μm,直径 1 ~ 3 μm。草酸钙方晶呈柱状或
方形,直径 4 ~ 30 μm。纤维呈长梭形,直径 25 ~
50 μm。可见晶鞘纤维及棕色块状物。多见螺纹导
管,直径 40 ~ 85 μm。见图 4。
1. 非腺毛 2. 方晶 3. 螺纹导管 4. 棕色块 5. 纤维 6. 晶鞘纤维
图 4 草红藤茎横切面
2. 2 薄层鉴别
取草红藤粉末 1 g,加乙醇 50 mL,加热回流 1
h,滤过,滤液蒸干,残渣加水 10 mL 使溶解,用
乙酸乙酯萃取 3 次 ( 10 mL /次) ,合并萃取液,蒸
干,残渣加甲醇 1 mL 使溶解,作为供试品溶液。
另取草红藤对照药材 1g,同法制成对照药材溶液。
再取二氢杨梅素对照品,加甲醇制成每 1 mL 含
1mg 的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法
( 《中国药典》2010 年版一部 VI B) 试验,吸取上
述三种溶液各 5 μL,分别点于同一硅胶 G 薄层板
上,以三氯甲烷-甲醇-甲酸 ( 7 ∶ 2 ∶ 1 ) 为展开剂,
展开,取出,晾干,喷以 5% 硫酸乙醇溶液,置
105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与
对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上,显相同
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成都中医药大学学报 2011 年第 34 卷
颜色的斑点 ( 图 5 ) 。另以石油醚-乙酸乙酯-甲酸
( 6∶ 4∶ 1) 为展开剂进行验证,展开,取出,晾干,
喷以 5%硫酸乙醇溶液,置 105℃加热至斑点显色
清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品
色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点 ( 图 6) 。
1. 二氢杨梅素; 2. 草红藤对照药材; 3 ~ 12. 草红藤药材
图 5 草红藤药材 TLC鉴别
1. 二氢杨梅素; 2. 草红藤对照药材; 3 ~ 12. 草红藤药材
图 6 草红藤药材 TLC鉴别
2. 3 检查
2. 3. 1 水分
照《中国药典》2010 年版一部水分测定法
( 附录Ⅸ H 第一法) 测定。测定结果见表 2。10 批
草红藤药材中水分平均含量为 10. 33%。
2. 3. 2 总灰分
照《中国药典》2010 版一部灰分测定法 ( 附
录Ⅸ K) 测定。测定结果见表 2。10 批草红藤药材
总灰分平均含量为 6. 65%。
2. 3. 3 酸不溶性灰分
取草红藤药材样品,按 《中国药典》2010 年
版一部酸不溶性灰分测定法 ( 附录Ⅸ K) 测定。
测定结果见表 2。10 批草红藤药材酸不溶性灰分平
均含量为 1. 03%。
2. 4 二氢杨梅素含量测定
据相关文献报道[3]及作者前期对草红藤药材
化学成分研究结果,草红藤中主要含黄酮类物质及
一些极性较大成分,其中以二氢杨梅素含量最高。
二氢杨梅素属于黄酮类成分,具有抗氧化、抗菌消
炎、抑制肿瘤、保护肝脏、调节血糖血脂等作
用[4]。故选其作为含量测定指标成分,参照相关
文献[5]和预实验结果,采用 HPLC法建立了草红藤
药材中二氢杨梅素的含量测定方法。
2. 4. 1 色谱条件
色谱柱: Phenomenex C18 高效液相色谱柱
( 250 mm × 4. 60 mm,4 μm ) ; 流动相: 甲醇-
0. 2%磷酸 ( 25 ∶ 75 ) ; 流速: 1. 0 mL /min; 柱温:
30℃ ; 检测波长: 290 nm; 理论塔板数以二氢杨梅
素峰计算不低于 3000。二氢杨梅素对照品、草红
藤供试品及溶剂的 HPLC色谱图见图 8。
图 8 二氢杨梅素对照品、草红藤供试品、
甲醇的 HPLC谱图
2. 4. 2 对照品溶液制备
精密称取真空干燥至恒重的二氢杨梅素对照品
6. 20 mg,置于 10 mL 容量瓶中,用 60% 乙醇溶
解,稀释至刻度,摇匀,配成浓度为 0. 62 mg /mL
的对照品储备液。
2. 4. 3 供试品溶液的制备
精密称取草红藤药材粉末约 0. 5 g,置 50 mL
圆底烧瓶中,精密加入甲醇 25 mL,称定重量。回
流提取 2 h,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失
的重量,摇匀,滤过。吸取续滤液 1 mL,置 10 mL
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第 1 期 张梅 等 川产中药材草红藤质量标准研究
量瓶中,用甲醇稀释至刻度。
2. 4. 4 线性关系考察
精密吸取二氢杨梅素对照品储备液 ( 0. 62
mg /mL) 1 mL置 10 mL 容量瓶中,加甲醇稀释到
刻度,摇匀。精密吸取对照品溶液 5 μL,8 μL,
11 μL,14 μL,17 μL,20 μL 注入高效液色谱仪
中,以甲醇-0. 2%磷酸 ( 25∶ 75) 为流动相,流速 1
mL/min,进行等度洗脱,检测波长 290nm,记录色谱
图,依次测定峰面积,以峰面积 ( y) 对进样量 ( x)
进行线性回归,得到回归方程: y = 533981x +
83287,r = 0. 9996。结果表明,二氢杨梅素在 0. 31 ~
1. 24 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2. 4. 5 精密度试验
精密吸取二氢杨梅素对照品储备液 ( 0. 62
mg /mL) 1 mL置 10 mL 容量瓶中,加甲醇稀释到
刻度,摇匀。精密吸取 10 μL,注入高效液色谱
仪,测定峰面积。重复进样 6 次,实验结果表明,
6 次测定其峰面积 RSD = 0. 50%,说明仪器的精密
度良好。
2. 4. 6 稳定性试验
精密称取草红藤药材 ( 产地: 都江堰青城山)
粉末 0. 5079 g,按照“2. 4. 3”项下方法制备供试
品溶液。精密吸取供试品溶液 10 μL,分别在 0、
2、4、6、8、10、12、14 h 重复进样,测定峰面
积。结果表明供试品溶液在 14 h内稳定性良好。
2. 4. 7 重复性试验
精密称取草红藤药材 ( 产地: 都江堰青城山)
粉末共 6 份,各约 0. 5g,按照 “2. 4. 3”项下方法
制备供试品溶液,分别进样 10 μL,测定样品中二
氢杨梅素的含量,6 份样品测定结果 RSD =
0. 63%,说明该方法的重复性良好。
2. 4. 8 加样回收试验
精密称取草红藤药材 ( 产地: 都江堰青城山)
粉末共 6 份,各约 0. 25g,置 50 mL 圆底烧瓶中,
分别精密加入二氢杨梅素对照品适量和甲醇,称定
重量,回流提取 2h,放冷,称重,用甲醇补足减
失的重量,摇匀,滤过。吸取续滤液 1 mL,置 10
mL量瓶中,用甲醇定容至刻度。分别取上述溶液
10 μL,注入高效液相色谱仪,测定,结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果
编号 取样量( g)
样品中二氢
杨梅素含量 ( mg) 添加量
( mg) 峰面积 A 测得量 ( mg) 回收率( % )
平均值
( % )
RSD
( % )
1 0. 2540 6. 50
2 0. 2499 6. 40
3 0. 2507 6. 42
4 0. 2497 6. 39
5 0. 2501 6. 40
6 0. 2507 6. 42
6. 51
839. 2 13. 03 100. 14
835. 7 12. 97 100. 49
832. 2 12. 91 99. 86
829. 7 12. 87 99. 73
834. 3 12. 95 100. 26
832. 8 12. 92 99. 94
00. 07 0. 28
6 份样品平均回收率为 100. 07%,RSD =
0. 28%,回收率良好。
2. 4. 9 样品测定
精密称取 10 批草红藤药材粉末约 0. 5g,按
“2. 4. 3”项下制备供试品溶液,进样 10 μL,依次
进行测定,结果见表 2。
表 2 10批草红藤药材水分、灰分、二氢杨梅素含量测定结果 ( n =3)
批号 产地 水分( % )
总灰分
( % )
酸不溶性
灰分 ( % )
二氢杨梅素
含量 ( % )
1 南充 10. 93 6. 82 0. 87 3. 75
2 北川 9. 85 7. 66 0. 99 3. 15
3 雁门关 10. 85 6. 77 0. 88 3. 90
4 青川 9. 63 6. 00 0. 90 5. 51
5 广元 10. 98 6. 17 1. 69 3. 45
6 都江堰青城山 10. 26 6. 53 1. 10 2. 56
7 新都天回镇 9. 89 7. 73 0. 99 3. 16
8 眉山悦兴镇 10. 23 6. 03 1. 10 3. 16
9 龙泉 9. 94 6. 57 0. 82 8. 31
10 洛带 10. 76 6. 19 0. 98 3. 60
3 讨论
在采用 HPLC法测定草红藤药材中二氢杨梅素
的含量时,作者对供试品溶液制备方法 ( 提取方
式: 超声、回流; 提取溶剂: 甲醇、乙醇; 提取时
间: 0. 5 ~ 2. 5h等) 进行了考察,最终确定文中叙
述的供试品溶液制备方法。
四川不同产地 10批草红藤药材中二氢杨梅素的
含量测定结果表明,各产地草红藤药材中二氢杨梅
素的含量一般在 3%左右,可见不同生长环境对草
红藤药材中二氢杨梅素的含量影响不显著。含量为
最高 ( 8. 31% ) 的草红藤药材采自龙泉,放置时间
较短,而其余药材放置时间均在 6-12 月以上,说明
可能放置时间会对其活性成分产生较大的影响。
参考文献
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条件的优化 [J] . 华中农业大学学报,2009,28
( 1) : 106-110. ( 收稿日期: 2010-06-28)
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