全 文 ：· 2120· Ch ina Pharmacy 2008 Vo l.19 No.27 中国药房 2008年第 19卷第 27期
*副主任药师。研究方向:药品质量标准。电话:0991-8564262。
E-mail:gxh4262@163.com
驱虫斑鸠菊软膏质量标准研究
郭喜红 *,张 丹 ,黎玉红 ,于鲁海 ,尚 靖 ,徐建国(新疆维吾尔自治区人民医院药剂科 ,乌鲁木齐市 830001)
中图分类号 R283.621;R927.1 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2008)27-2120-03
摘 要 目的:建立驱虫斑鸠菊软膏的质量标准 。方法:根据颜色变化对驱虫斑鸠菊软膏中黄酮类成分进行鉴别 ,采用紫外分光光
度法测定总黄酮(以芦丁计)的含量 。结果:芦丁进样量在 0.050 65 ～ 0.506 50 mg 范围内与吸光度呈良好的线性关系(r =0.999 3);
平均回收率为 98.14%, RSD=1.49%(n =6)。结论:所建标准可用于驱虫斑鸠菊软膏的质量控制 。
关键词 驱虫斑鸠菊软膏;质量标准;总黄酮
Quality Standard of Vernonia anthelmintica Ointment
GUO Xi-hong , Zhang Dan , LI Yu-hong , YU Lu-hai , SHANG Jing , XU Jian-guo(Dept.of Pharmacy ,
T he Peoples Hospi tal of Xinjiang Autonomous Region , Urumqi 830001 , China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To establish the quality standard o f Vernonia anthelmi ntica ointment.M ETHODS:The flavono_
ids in Ver nonia anthe lmin tica ointment w ere identified based on t he color reaction and t he content o f to tal flavonoids(Rutosids
w as com puted)w as de termined by ult rav io let spectrophotomet ry.RESULTS:The linear range of Rutoside w as 0.050 65 mg ～
0.506 50 mg , w ith its average recovery at 98.14%(RSD =1.49%, n =6).CONCLUSION :The established standard is appli-
cable f or the quality contro l o f Ver nonia anthelm intica ointm ent.
KEY WORDS Vernonia anthe lmint ica o intment;Quality st andard;Total flavonoids
表 1 加样回收率试验结果(n=6)
Tab 1 Result of recovery test (n=6)
样品含量/μg 加入量/μg 测得量/μg 回收率/% x/ % RSD /%
9.15 8.00 16.92 97.15
97.17 2.48
9.82 8.00 17.43 95.08
9.47 8.00 17.23 97.00
9.18 8.00 17.31 101.69
10.11 8.00 17.87 96.98
9.69 8.00 17.30 95.12
分别精密吸取 20 μL 注入液相色谱仪 ,测定 。以进样量(X , μg)
为横坐标 , 峰面积积分值(Y)为纵坐标进行线性回归 , 得回归
方程为 Y =13 672X +13.369(r =0.999 9)。结果表明 ,掌叶
半夏碱乙进样量在 0.725 ～ 8.700μg ·mL -1范围内与峰面积
积分值呈良好的线性关系 。
2.5 精密度试验
精密吸取浓度为 5.8μg ·mL -1的对照品溶液 , 重复进样
5次 ,每次 20μL ,记录峰面积 。结果 ,峰面积的平均积分值为
1 616.803 12 , RSD =0.36%,表明仪器精密度良好 。
2.6 稳定性试验
取同一批 (批号:060317)样品约 0.5 g , 精密称定 , 照
“2.2.2”项下方法制备供试品溶液 ,分别于 0 、1 、3 、5 、12 h各取
20μL ,按“2.1”项下色谱条件进样分析 ,测定 。结果 ,峰面积的
平均积分值为 517.929 92 , RSD =2.82%,表明供试品溶液在
12 h内基本稳定 。
2.7 重现性试验
取同一批(批号:060317)样品约 0.5 g ,共 6份 ,精密称定 ,
照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液 ,取 20 μL , 按“2.1”项下
色谱条件分别进样分析 ,测定含量 。结果 , 6份样品的平均含量
为 31.18μg ·g -1 , RSD =2.94%,表明方法重现性良好 。
2.8 加样回收率试验
取已知含量的同一批样品(批号:0600317)共 6份 ,精密称
定 ,分别加入掌叶半夏碱乙对照品 ,按“2.2.2”项下方法制备供
试品溶液 ,按“2.1”项下色谱条件分别进样分析 ,计算加样回收
率 ,结果见表 1 。
2.9 样品含量测定
取 5批不同批号的样品 , 按 “2.2.2”项下方法制备供试品
溶液 ,按“2.1”项下色谱条件分别进样测定。结果 , 5批样品(批
号分别为 060316 、060317 、060318 、060322 、060323)的含量分
别为 35.68 、32.09 、37.54 、36.82 、36.94μg ·g -1。
3 讨论
笔者曾分别选择甲醇-0.01mol·L -1磷酸二氢钾溶液(10∶
90)[2 ] 、甲醇-0.005 mol ·L -1磷酸二氢胺(pH3.5)=10∶90 、
乙腈-磷酸盐缓冲液(取 K 2PO 41.36 g 、三乙胺 1 mL ,加水至
1 000 mL , 用 H 2PO 4溶液调 pH5.5)=3∶97 [3 ]为流动相进行
试验。结果发现 ,第 3种流动相分离效果较好 。
笔者曾选用甲醇或氯仿回流提取的方法处理样品 , 结果发
现溶液中残留辅料较多 , 容易引起色谱柱的堵塞 。后采用甲醇
回流提取 , 并低温放置 24 h使辅料凝固 , 再经过滤处理 , 可防
止此影响 。
参考文献
[ 1] 卫生部药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂(第
4册)[M ] .北京:化学工业出版社 ,1991:138.
[ 2] 李开志 ,雷灼雨 ,巴国际 .RP -HPLC 法测定灵芝胶囊
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[ 3] 李 群 ,代 红 ,姚 英.高效液相色谱法测定红细胞添
加剂中腺嘌呤的含量 [ J] .中国生化药物杂志 , 2002 , 23
(6):299.
(收稿日期:2008-03-31 修回日期:2008-06-13)
中国药房 2008年第 19卷第 27期 China Pharm acy 2008 Vol.19 N o.27 · 2121·
驱虫斑鸠菊软膏为新疆维吾尔自治区人民医院自制制剂 ,
具有熟化和清除异常黏液质 、温肤着色 、促进黑色素生成的功
效 [1 ] , 主要用于治疗白癜风 。其主药驱虫斑鸠菊提取物来自维
吾尔医民间习用药材菊科 1年生草本植物驱虫斑鸠菊 Ver-
nonia an thelm intica Willd.的成熟果实 。为了保证该制剂的
质量稳定 、可控 ,笔者现对其质量标准进行研究 。
1 仪器与试药
8453型紫外分光光度计 (美国安捷伦公司);BP 211D 型
电子天平(德国 S ar torius公司);S B 3200型超声波清洗器(上
海必能信超声有限公司)。驱虫斑鸠菊软膏(新疆维吾尔自治区
临床药学研究所 ,批号:050128);芦丁对照品(中国药品生物制品
检定所 ,批号:0080-9705);水为纯化水 ,其余试剂均为分析纯 。
2 方法与结果
2.1 显色反应 [2]
取本品约 2 g , 加甲醇 10 mL , 超声 10 min , 冰浴 1 h , 过
滤 。取滤液 1 mL ,加 10%硝酸铝溶液 1 ～ 2滴 ,摇匀 ,取少量点
于滤纸上 ,晾干 ,置紫外光灯下观察 ,显黄色荧光 。
2.2 检查
符合 2005年版《中国药典》(一部)附录 Ⅰ R软膏项下的各
项要求[ 3 ]。
2.3 总黄酮的含量测定 [1 ,4]
2.3.1 对照品溶液的制备:精密称取 105 ℃干燥至恒重的芦
丁对照品 100 mg , 置于 100 mL量瓶中 , 加 60%乙醇适量 , 水
浴微热使溶解 , 放冷 ,加 60%乙醇稀释至刻度 , 摇匀;精密吸取
5.0 mL , 置于 50 mL 量瓶中 , 加 60%乙醇稀释至刻度 , 摇匀 ,
即得(每 1 mL 中含芦丁 0.1 mg)。
2.3.2 供试品溶液的制备:取本品约 1 g , 精密称定 , 置于锥
形瓶中 ,加甲醇约 25 mL ,超声 15 min ,取出 ,转移至 50 mL 量
瓶中 ,用少量甲醇洗涤锥形瓶并定容至刻度 ,冰浴 1 h ,取出 ,过
滤;精取续滤液 2.0 mL , 置于 10 mL 量瓶中 , 照“2.3.4”项下
方法 ,自“加入 60%乙醇至 5.0 mL”起操作 ,在 510 nm 波长处
测定吸收度 ,代入标准曲线 ,计算 ,即得 。
2.3.3 最大吸收波长的确定:将芦丁对照品溶液 、供试品溶
液和阴性对照溶液经亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠反应过程
进行显色 , 在 200 ～ 600 nm 波长范围内进行光谱扫描 。结果表
明 ,对照品溶液 、供试品溶液在 510 nm 波长处均有最大吸收 ,阴
性对照无干扰 ,故选择 510±1 nm作为检测波长 。色谱见图 1。
2.3.4 标准曲线的绘制:精密吸取对照品溶液 0 、 0.5 、 1.0 、
2.0 、3.0 、4.0 、5.0 mL ,分别置于 10 mL 量瓶中 ,加入 60%乙醇
至 5.0 mL , 加 50 g · L -1亚硝酸钠溶液 0.3 mL ,摇匀 ,放置 6
min , 加 100 g ·L -1硝酸铝溶液 0.3 mL ,摇匀 ,放置 6 min ,加
40 g · L -1氢氧化钠溶液 4.0 mL ,加 60%乙醇稀释至刻度 , 摇
匀 ,放置 15 min ,照分光光度法 [3 ] ,在 510 nm波长处测定吸光
度 。以吸光度(A)为横坐标 ,进样量(C)为纵坐标绘制标准曲
线 , 得回归方程为 C=0.797 4A+0.002 9(r =0.999 3)。结
果表明 , 芦丁进样量在 0.050 65 ～ 0.506 50 mg 范围内与吸光
度呈良好的线性关系 。
2.3.5 精密度试验:取同一供试品溶液 , 精密吸取 5份 , 按上
述色谱条件测定 。结果 , RSD =1.09%(n=5),表明方法精密
度良好 。
2.3.6 稳定性试验:取同一供试品溶液 , 分别在不同时间(0 、
2 、4 、6 、8 h)进行测定 。结果 , RSD =1.81%(n =5),表明供试
品溶液在 8h内稳定 。
2.3.7 重现性试验:取同一批样品 ,按“2.3.2”项下方法制备
供试品溶液共 6份 ,按上述色谱条件测定 。结果 ,样品平均含量
为 7.57 mg ·g -1 , R SD =2.23%(n =6), 表明方法重现性良
好 。
2.3.8 加样回收率试验:取已知含量驱虫斑鸠菊软膏约 0.5
g , 精密称定 , 置于锥形瓶中 , 精密移取芦丁对照品溶液(1.013
mg ·mL -1)适量 ,加甲醇约 25 mL ,超声 15 min ,取出 ,转移至
50 mL 量瓶中 ,用少量甲醇洗涤锥形瓶 ,定容至刻度 ,冰浴 1 h ,
取出 , 过滤 ;精取续滤液 2.0 mL , 置于 10 mL 量瓶中 , 照
“2.3.4”项下方法 ,自“加入 60%乙醇至 5.0 mL”起操作 ,测定
样品含量 ,计算加样回收率 ,结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果(n=6)
Tab1 Results of content determinat ion of samples(n=6)
称样量/ g 样品含量/mg 加入量/mg 测得量/mg 回收率/%
x
/ %
RSD/ %
0.509 28 3.86 3.04 6.78 96.23
98.14 1.49
0.502 61 3.80 3.04 6.87 100.71
0.499 43 3.78 3.04 6.76 98.16
0.510 26 3.86 3.04 6.85 98.35
0.495 79 3.75 3.04 6.71 97.23
0.500 65 3.79 3.04 6.77 98.18
2.3.9 样品含量测定:取驱虫斑鸠菊软膏 5批 , 按“ 2.3.2”项
下方法制备供试品溶液 ,按上述色谱条件测定 。结果 , 5批样品
总黄酮的平均含量为 7.80 mg ·g -1 。
3 讨论
本制剂主药的组成成分主要为黄酮类化合物 , 因还原反应
及金属盐类试剂的络合反应是鉴别黄酮类化合物的常用方法 ,
故选择铝盐与黄酮类化合物生成络合物的鉴别反应 。
本品为软膏剂 , 故有效提取测定物质是建立质量控制方法
的关键 。本文在大量预试验的基础上 , 通过考察不同提取溶媒
的种类和比例以及不同的处理方式对测定结果的影响 , 认为文
中所建立的方法简单 、稳定 、可靠 ,基本能有效地除去基质对测
定的干扰 ,可用于驱虫斑鸠菊软膏的质量控制 。
参考文献
[ 1] 卫生部药典委员会编.中华人民共和国卫生部药品标准-
维吾尔药分册 [S] .乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社 ,
1999:47 、150.
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· 2122· Ch ina Pharmacy 2008 Vo l.19 No.27 中国药房 2008年第 19卷第 27期
*主管药师。研究方向:中药、中成药的检验及质量标准。电话:
0660-6115839。E-mail:hongmeihua@gdda.gov.cn
小儿咳喘灵颗粒系由麻黄 、金银花 、苦杏仁 、板蓝根、石膏 、
甘草 、瓜蒌等 7味药组成的中药复方制剂 , 具有宣肺 、清热 , 止
咳 、祛痰 、平喘的作用 , 用于治疗上呼吸道感染 、气管炎 、肺炎 、
咳嗽等症[ 1 ]。其原质量标准仅有麻黄和甘草 2个理化反应的定
性鉴别[ 2 ] ,已不能有效控制 、评价其内在质量 。为了更好地控制
药品质量 ,笔者采用高效液相色谱(HPLC)法测定处方中君药
麻黄所含有效成分盐酸麻黄碱的含量 , 并尝试了用 2种提取方
法和色谱条件进行测定 。
1 仪器与试药
HPLC 仪 A , 包括 515型 Pum p泵 、 2487型紫外检测器
(美国Waters公司);HPLC仪 B , 包括 LC -10Avp型泵和
SDP -10Avp型紫外检测器 (日本岛津公司);超声波清洗器
(昆山市超声波仪器有限公司 , 功率:300 W , 频率:40 kHz);
AG135型双量程电子天平(瑞士Mettle r Toledo 公司);PB-
20型酸度计(德国 Sarto rius公司)。小儿咳喘灵颗粒及阴性样
品制剂均由广州中一药业有限公司提供;盐酸麻黄碱对照品
(中国药品生物制品检定所 ,批号:171241-200303);甲醇为色
谱纯 ,水为超纯水 ,其它试剂均为分析纯 。
2 方法与结果
2.1 方法(1)(水蒸气蒸馏法)[3]
小儿咳喘灵颗粒中盐酸麻黄碱含量测定的 2种HPLC 法比较
洪美华 1 , 2 *,卓小萍 2 ,何世柯 2 ,宋增炫 2 ,周本宏 1(1.武汉大学药学院 ,武汉市 430072;2.广东汕尾市药品检
验所 ,汕尾市 516600)
中图分类号 R283.627;R927.2 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2008)27-2122-03
摘 要 目的:比较测定小儿咳喘灵颗粒中盐酸麻黄碱含量的 2种高效液相色谱 (HPLC)法 。方法:(1)法色谱条件:色谱柱为
Phenomenex C 18(250 mm ×4.6 mm , 5μm), 流动相为甲醇-水 (1∶1), 检测波长为 254 nm ;(2)法色谱条件:色谱柱为 Phe-
nomenex C 18(250 mm×4.6 mm , 5μm),流动相为乙腈-磷酸溶液(内含 0.02 mol ·L -1磷酸二氢钾 、0.01 mol·L -1磷酸)=5∶
95 , 检测波长为 210 nm 。结果:(1)法盐酸麻黄碱的检测浓度在 0.08 ～ 40μg ·mL -1范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系
(r =0.999 9), 平均回收率为 101.72%, RSD =2.77%;(2)法盐酸麻黄碱的检测浓度在 0.4 ～ 400μg ·mL -1范围内与峰面积积
分值呈良好的线性关系(r =1.000 0),平均回收率为 99.60%, RSD =2.91%。结论:2种 HPLC 法结果均准确 , 专属性 、重现性
均好 , 但(1)法提取更完全 ,未使用有机溶剂 ,操作性更强 。
关键词 高效液相色谱法;小儿咳喘灵颗粒;盐酸麻黄碱;比较分析
Determination of Ephedrine Hydrochloride in Xiaoerkechuanl ing Granules by Two Different HPLC Meth-
ods:A Contrastive Analysis
HONG M ei-hua ,ZHOU Ben-hong(Colleg e of Pharmacy , Wuhan University ,Wuhan 430072 ,China)
HONG M ei-hua , ZHUO Xiao-ping , HE Shi-ke , SONG Zeng -xuan(Guangdong Shanw ei Inst itute fo r
Drug Control ,Shanw ei 516600 ,China)
ABSTRACT OBJECT IVE:T o dete rmine the content o f Ephedrine hydrochlo ride in Xiaoerkechuanling granules by tw o
HPLC methods.METHODS:The chromatog raphic conditions for the first HPLC met hod w ere as follow s:the phenomenex C 18
colum n(250 mm ×4.6 mm , 5μm)was used with methanol-water(1∶1)as mobile phase a t a de tection w aveleng th of 254 nm;
the chromatog raphic conditions fo r the second HPLC method w ere as follow s:the phenomenex C 18 column(250 mm×4.6 mm , 5
μm)w as used w ith ace tonitrile-phosphoric acid solu tion(con tain 0.02 mol ·L -1 po tassium dihydrogen phospha te and 0.01
mol ·L -1 phosphor ic acid)(5∶95)as mobile phase a t a detec tion w aveleng th of 210 nm.RESULTS:By HPLC method one , the
linear range o f Ephedrine hydrochlo ride w as 0.08μg ·mL -1 ～ 40μg ·mL -1(r =0.999 9)with the average recovery at 101.72%
and the RSD at 2.77%;by the second HPLC method , the linear range o f Ephedrine hydrochlo ride was 0.4 μg ·mL -1 ～ 400
μg ·mL -1(r =1.000 0)wit h t he average recovery at 99.60%and the R SD a t 2.91%.CONCLUS ION :Both of the two HPLC
met hods are accu rate , specific and reproducible , bu t by the fir st H PLC m ethod , the ex traction w as more comple te and m ore
operable , and no organic solvent w as used.
KEY WORDS HPLC;Xiaoerkechuanling granules;Ephedr ine hydrochlo ride ;Cont rastive ana lysis
1995:1.
[ 3] 国家药典委员主编.中华人民共和国药典(一部)[ S] .
2005年版.北京:化学工业出版社 , 2005:附录 12 、附录 28.
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(收稿日期:2008-06-18 修回日期:2008-09-02)