全 文 ：表 2　样品中芒果苷的含量测定结果(n=3)
Tab 2　Results of content determination of mangiferin(n=3)
批号 含量 /mg 片- 1 平均含量 /mg 片 -1 RSD /%
050306 57. 70
59. 46 59. 03 2. 00
59. 95
050308 60. 91
59. 26 59. 84 1. 56
59. 34
050309 61. 86
61. 46 61. 96 0. 91
62. 57
3　讨论
用醇-水系统时[ 2. 3] ,芒果苷的峰型不够尖锐 ,峰
比较宽 ,而且有少许的拖尾 ,出峰时间在 10 min 之
后 ,既不准确也不方便质量控制 。经过调整流动相
系统为乙腈-水的系统 ,峰形明显改善 ,且出峰时间
也提前。
本实验中 ,三乙胺的量是重要的影响因素。当
三乙胺浓度小于0. 5%时(pH 3)峰形较好 ,但当其
浓度大于0. 7%(pH 3 . 5)峰形较宽 ,且有少许拖尾 ,
影响峰形的因素是否与 pH 值的改变有关 ,尚需进
一步研究 。
参考文献:
[ 1] 　邓家刚 ,郑作文 ,曾春晖. 芒果苷的药效学试验研究[ J] .中医
药学刊 , 2002 , 7(12):37.
[ 2] 　刘华刚 ,黄海滨 ,陈燕军. H PLC法测定芒果止咳片中芒果苷的
含量[ J] .中成药 , 1997 , 19(10):14-15.
[ 3] 　陈万生 ,李力 ,乔传卓 ,等.不同产地知母中芒果苷 、新芒果苷的
含量测定[ J] .中国中药杂志 , 2000 ,25(2):87-88.
[收稿日期] 2005-08-20
[ 作者简介] 郭继红 , 女 , 学士 , 主管药师 , 电话 010-88196166 , E-m ail:gh6302@sina. com . cn
高效液相-蒸发光散射检测器法测定知母中菝葜皂苷元含量
郭继红1 ,杨毅恒2 ,张艳华1 　(1. 北京大学临床肿瘤学院 ,北京 100036;2. 北京大学第三医院 , 北京 100083)
[ 摘要] 　目的:采用高效液相-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法测定知母中菝葜皂苷元的含量。方法:ODS-C8柱 , 流动相
为甲醇-水 ,梯度洗脱。因菝葜皂苷元为一甾体皂苷元 ,无紫外特征吸收 , 选择了通用型检测器—蒸发光散射检测器(ELSD)。
结果:菝葜皂苷元在0 . 12～ 4 . 0 μg 范围内具良好的线性关系 , r=0. 999 8 , 平均回收率为98 . 3%。结论:本方法有较高的灵敏
度和回收率 ,可用于知母中菝葜皂苷元的含量测定。
[ 关键词] 　知母;菝葜皂苷元;高效液相色谱;蒸发光散射检测器
[中图分类号] R927. 2　　[ 文献标识码] A　　[文章编号] 1001-5213(2006)08-0987-02
Determination of sarsasapogenin in Anemarrhena asphodeloides by HPLC-ELSD
GUO Ji-hong 1 , YANG Yi-heng2 ,ZHANG Yan-hua1(1 . The H ospital of Clinical Oncolog y , Beijing Unive rsity , Beijing
100036 , China;2. The Third H ospital , Beijing Univer sity , Beijing 100083 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To de te rmine the content of sar sasapogenin in Anemarrhena asphodeloides by HPLC. METHODS　
ODS colum n and a mobile phase o f me thanol-wa ter with g radient elution we re used w ith a unive rsal detec to r Evapo ration L ight
Scat te ring De tec to r (ELSD).RESULTS　The calibration curve was linear in the range of 0. 12- 4. 0 μg (r=0. 999 8) and the recov-
ery was 98. 3%. CONCLUSION　The method can be used fo r determination of sarsasapogenin in Anemarrhena asphodeloides.
KEY WORDS:Anemarrhena asphodeloides;sar sasapogenin;HPLC;ELSD
　　知母(Anemarrhena asphodeloides Bunge)为
百合科知母属植物的干燥根茎 。近年药理研究证明
具有抗菌 、解热 、降血糖等作用 。知母有效成分为多
种甾体皂苷 ,其皂苷元主要为菝葜皂苷元(sarsasa-
pogenin)[ 1] 。菝葜皂苷元的测定方法目前有薄层扫
描法和液相色谱法[ 2] ,因菝葜皂苷元为甾体皂苷元 ,
分子中没有共轭结构 ,无紫外特征吸收 ,对样品的检
测造成了一定的难度 。为此 ,本实验采用高效液相-
蒸发光散射检测器(ELSD)测定知母中菝葜皂苷元
的含量。
1　材料
岛津 LC- 10A 型高效液相色谱仪 , Alltech 500
蒸发光散射检测器(ELSD);菝葜皂苷元对照品(中
国药科大学天然药物化学教研室 ,批号 20050316纯
度99. 1%);知母药材(江苏省药材公司)。
2　方法和结果
2. 1　色谱条件　色谱柱:Inertsil C8-3(4. 6 mm ×
250 mm , 5 μm 加 C8预柱), 流动相:甲醇-水(88∶
987 中国医院药学杂志 2006年第 26卷第 8期 Chin H osp Pharm J , 2006 Aug , Vol 26 , No. 08
12),流速:1 mL min- 1 ,进样量:20 μL ,柱温:室温 。
2. 2　检测器条件　漂移管温度:80 ℃;气体流速:
1. 99 L min- 1 。
2. 3　样品溶液的制备　知母样品经干燥粉碎后准
确称取 1 g ,用 80 mL 乙醇于索氏提取器中提取 ,提
取液用旋转蒸发仪回收溶剂 ,残渣加 2 mo l L- 1盐
酸 20 mL 回流水解 2 h ,用 60 mL 氯仿分 3次萃取 ,
每次 30 min ,合并萃取液并回收氯仿 ,所得残渣经
石油醚脱脂后用甲醇溶解并最后定容为 50 mL ,制
成样品溶液。
2. 4　标准曲线及线性范围　精密称取菝葜皂苷元
对照品 20 mg ,置于 100 mL 量瓶中 ,加甲醇溶解并
稀释至刻度 ,作为贮备液。分别精密吸取菝葜皂苷
元贮备液0 . 3 , 0 . 5 , 1 . 5 , 2 . 5 , 4 . 0 , 5 . 0 , 6. 0 , 7. 5 , 10
mL ,置于 10 mL 量瓶中 ,以流动相溶解并稀释至刻
度 ,按上述色谱条件测定 ,用积分仪记录峰面积 ,以
对照品浓度的自然对数值为横坐标 ,以峰面积的自
然对数值为纵坐标 ,进行线性回归 ,得标准曲线为Y
=1. 258X +10. 21 , r=0 . 999 8 ,线性范围为0. 12 ～
4. 0 μg 。
2. 5　精密度试验　得 RSD为1 . 1%,表明仪器精密
度良好。
2. 6　日内稳定性实验　按供试品溶液的制备项下
操作 ,配制成一定浓度的供试品溶液 ,分别于 0 , 2 ,
4 ,8 , 12 h进样 ,峰面积积分值 RSD为1. 3%,说明样
品在日内是稳定的。
2. 7　重复性试验　精密称取同一批样品 ,按上述供
试品溶液的制备项下操作 ,配制成高 、中 、低 3 种不
同浓度的样品溶液各 5 份 ,定容至 2 mL。依次进
样 , RSD分别为0. 58%, 0. 88%,2. 6%,表明高 、中 、
低浓度的样品含量测定重复性良好 。
2. 8　回收率试验　分别称取已知含量的知母药材
样品 ,精密加入等量的菝葜皂苷元对照品 ,按供试品
溶液的制备法制备高 、中 、低 3种不同浓度的样品溶
液各 3份 ,定容至 10 mL 。依次进样 ,回收率分别为
98. 1%, 98. 7%, 98 . 1%(平均回收率为 98 . 3%),
RSD分别为2. 3%, 1. 5%, 3. 3%(平均值为2. 4%)。
结果见表 1。
2. 9　样品测定　分别精密称取十批知母药材 ,按上
述供试品溶液的制备法制备样品溶液 , 依上述
HPLC方法操作 ,测定结果见表 2 ,色谱图见图 1 。
3　讨论
根据 ELSD的检测原理 ,响应信号(散射光强
度)与雾滴中的样品浓度呈指数关系 ,即峰面积的自
然对数与样品浓度的自然对数呈线性关系 ,因此在
表 1　回收率试验
Tab 1　Recovery of dio sg enin
序号 样品
/g
峰面积
对照品
加入量
/ mg
对照品
检出量
/ mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
9 . 389 8 966 645 0 . 440 0. 424 1 96 . 39
1 9 . 392 9 108 509 0 . 440 0. 427 8 97 . 23
9 . 423 9 733 283 0 . 440 0. 442 5 100 . 60
7 . 822 4 592 669 0 . 360 0. 350 6 97 . 39
2 7 . 802 4 648 500 0 . 360 0. 354 1 98 . 36 98 . 3 2. 4
7 . 705 4 696 112 0 . 360 0. 360 6 100 . 20
7 . 202 3 454 163 0 . 320 0. 325 0 101 . 60
3 7 . 188 3 207 704 0 . 320 0. 312 1 97 . 53
7 . 180 3 067 576 0 . 320 0. 304 5 95 . 16
表 2　含量测定结果
Tab 2　Content of sar sa sapogenin
序号 样品 / g 峰面积 样品浓度 /mg L-1 百分含量 /%
1 9. 002 5 514 719 76. 95 0. 004 274
2 9. 100 5 708 976 77. 69 0. 004 269
3 9. 080 5 060 647 75. 12 0. 004 137
4 8. 895 4 924 864 74. 55 0. 004 191
5 9. 021 9 416 497 89. 37 0. 004 953
6 9. 008 8 999 157 88. 24 0. 004 898
7 8. 933 7 683 101 84. 43 0. 004 726
8 8. 978 8 354 223 86. 43 0. 004 813
9 9. 001 7 880 792 85. 03 0. 004 723
10 9. 224 9 924 652 90. 69 0. 004 916
图 1　高效液相色谱图
A.菝葜皂苷元对照品;B. 样品
Fig 1　HPLC chromatogram s
A. sarsasapogenin reference subs tance;B. sam ple
本实验中以峰面积和样品浓度的对数值进行线性回
归得标准曲线 。
ELSD检测器的操作参数有流动相的流速 、漂
移管温度及气体流速。本实验在色谱条件固定的情
况下 ,选择合适的检测参数 ,使信噪比最高 。
通过对 HPLC-ELSD法各方面进行考察 ,其精
密度 、稳定性 、准确性等指标均能符合要求 ,且有较
高的专属性和灵敏度 ,说明 HPLC-ELSD法可用于
测定知母药材中菝葜皂苷元的含量。
菝葜皂苷元为知母中几种主要甾体皂苷的母核
皂苷元 ,因此可通过测定菝葜皂苷元的含量对知母
药材的质量进行控制。
参考文献:
[ 1] 　江苏新医学院编.中药大辞典(上)[ M ] .第 2版. 上海:上海人
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[收稿日期] 2005-12-27
988 中国医院药学杂志 2006年第 26卷第 8期 Chin H osp Pharm J , 2006 Aug , Vol 26 , No. 08