全 文 ：[科研报道]
知母中菝葜皂甙元含量测定
马长华1 , 钱 捷2 , 杨 2
(1.北京中医药大学 ,北京 100029;2.北京中医药大学附属东直门医院 ,北京 100700)
摘要:目的:知母中菝葜皂甙元含量测定方法的改进。方法:薄层扫描法:显色剂 10%高氯酸乙醇溶液。测定波长
530nm。结果:此方法斑点稳定时间长 ,线性关系良好 ,平均加样回收率为 96.7%。结论:本方法适用于知母中菝葜皂甙
元的含量测定。
关键词:知母;菝葜皂甙元;检测方法;薄层扫描
中图分类号:R284.1 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2000)11-0804-03
Determination of Sarsasapogenin in Rhizoma Anemarrhenae
MA Chang-hua1 , QIAN Jie2 , YANG Jie2
(1.Beij ing Universi ty of Tradi tional Ch inese Medicine.Beij ing 100029 , Ch ina;2.Beij ing Un iversity of Tradit ional Chinese Medicine Dong Zh i
Men Hospital.Beij ing 100700 , Ch ina)
Abstract:Objective:To improve the determinant method of Sarsasapogenin in Rhizoma Anemarrhenae.Meth-
ods:Using 10%HClO4-ethanol solution as the spray reagent , the scanning w aveleng th was 530nm.Results:
The stable t ime w as over two hours.The linearity of this method w as w ell and the recovery of the added sample
w as 96.7%.Conclusions:This method can be used for content determination of Sarsasapogenin in Rhizoma
Anemarrhenae.
Key words:Rhizoma Anemarrhenae;Sarsasapogenin;Detection method;TLC Scan
收稿日期:2000-04-05
作者简介:马长华(1960～ ),男(满族),北京市人 ,副教授;电话:010-64286946.
《中国药典》(1995年与 2000年)知母的含量测
定 ,均以菝葜皂甙元为代表性成分 ,采用薄层扫描方
法测定其含量 。任爱农等人[ 1] 发现用药典方法显
色 ,斑点褪色快 ,稳定性差 ,影响实验结果的准确性 ,
有待改进 。我们在对知母药材中菝葜皂甙元含量进
行测定时 ,曾经对 3种不同的显色条件进行比较 ,结
果表明 ,以 10%高氯酸为显色剂时 ,斑点稳定性好 。
本试验用盐酸水解调至中性后 ,加入硅藻土 ,搅拌均
匀。置索氏提取器中 ,加氯仿回流提取 ,以薄层扫描
法测定菝葜皂甙元含量。方法稳定 ,结果准确 ,适用
于知母药材中菝葜皂甙元的含量测定 ,对制剂中知
母的含量测定也有一定的参考价值 。
1 仪器与实验材料
CS-930薄层扫描仪(日本岛津)。
菝葜皂甙元对照品(中国药品生物制品检定
所);知母药材为河北 、山西 、北京市售;硅胶预制板
(青岛);所用试剂均为分析纯 。
2 样品溶液与对照品溶液的制备
2.1 样品溶液的制备 取知母干燥粉末 1g ,精密
称定 。置锥形瓶中 ,精密加乙醇 25m l ,称定重量 ,浸
泡过夜 ,超声处理 40min。放冷 ,再称定重量 。用乙
醇补足减失的重量 ,摇匀 ,滤过 。精密量取续滤液
10ml ,加盐酸1ml ,置水浴上用蒸气缓缓回流 1h 。放
冷 ,倾入小烧杯中 ,边摇边滴加 40%氢氧化钠至中
性 。加入硅藻土 5g ,拌匀 ,水浴上挥干溶剂。硅藻
土置索氏提取器中 ,加氯仿回流提取 3h。回收氯
仿 ,残渣用氯仿溶解并转移至 10ml量瓶中 ,稀释至
刻度 ,摇匀 ,备用。
2.2 对照品溶液的制备 取菝葜皂甙元对照品
5mg ,精密称定。置 10ml量瓶中 ,用氯仿溶解并稀
释至刻度 , 摇匀 , 备用(对照品溶液的浓度为 0.
48mg/ml)。
3 薄层色谱条件的选择
3.1 薄层板 硅胶G 薄层预制板(青岛);展开剂:
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苯-丙酮(9∶1),上行法 2次展开。
3.2 3 种显色剂的比较 显色剂 1[ 2] :甲液:取水
25ml ,缓慢加硫酸 50ml ,放冷后 ,再加乙醇 25ml ,摇
匀;乙液:8%香草醛无水乙醇溶液 。用时将 5份甲
液与 1份乙液混合。
显色剂 2:甲液:3%高氯酸乙醇溶液;乙液:8%
香草醛乙醇溶液。用时将 1 份甲液与 1 份乙液混
合。
显色剂 3:10%高氯酸乙醇溶液。
用上述 3种显色剂显色时 ,均于 70°C 加热 5 ～
10min ,至斑点显色清晰 。
将对照品溶液 6μl分别点于薄层板 ,依上述方
法展开 ,分别显色 。用显色剂1 、显色剂2时斑点显
亮黄色;用显色剂 3时斑点显紫红色 ,分别测定斑点
吸收光谱 ,如图 1所示 。
图 1 光谱图
-·-显色剂 1 显色剂 2 显色剂 3
用各自的最大吸收波长每隔 10min测定斑点峰
面积值 ,结果见表 1 。
表 1 菝葜皂甙元显色后稳定性观察
观察时间
(min) 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
RSD1)
%
显色剂 1 67823.92 6561634 61033.15 - - - - - - - - - 5.3
显色剂 2 256249.8 2508873 243369.6 231765.3 228475.7 - - - - - - - 4.9
显色剂 3 44104.54 43972.63 44179.65 44180.42 4402750 44099.46 44188.91 44053.78 44024.18 44140.24 44088.79 44081.27 0.13
1)RSD 大于5.0%时 ,不再测定。
结果表明 ,显色剂 3 配制简单 ,斑点稳定时间
长 ,但灵敏度较显色剂 2低;显色剂 2配制较简单 ,
斑点稳定时间较长 ,其特点是灵敏度较高;显色剂 1
配制复杂 ,斑点稳定时间最短 ,并且硫酸浓度较高 ,
溶液粘度大 ,给喷雾显色带来一定困难。综合以上
结果 ,我们选择 10%高氯酸乙醇溶液作为显色剂 ,
测定波长为 530nm 。
3.3 标准曲线的绘制 分别准确吸取菝葜皂甙元
标准溶液 2 , 4 , 6 , 8 , 10μl点于薄层板上 ,以苯-丙酮
(9∶1)为展开剂 ,展距 7cm 。取出 ,晾干。再用同一
展开剂二次展开。取出 ,晾干 ,喷以 10%高氯酸乙
醇溶液 ,在 70°C 加热 5 ～ 10min 至斑点显色清晰 。
在薄层板上覆盖同样大小玻璃板 ,周围用胶带固定 ,
照薄层色谱法进行测定。测定波长λs=530nm 。以
点样量(x)为横坐标 ,斑点峰面积积分值(y)为纵坐
标 ,绘制标准曲线 ,计算回归方程为 y =12441.26x
+9322.65 , r=0.9998。
结果表明 ,菝葜皂甙元在 0.96-4.80μg 范围内
具有良好的线性关系 ,但曲线不通过原点 ,故采用外
标两点法定量。
3.4 精密度考察 同板精密度:精密吸取同一样品
溶液 4μl×5点于同一薄层板上 ,依 4.3项标准曲线
的绘制方法测定 。结果峰面积积分值的平均值为
37645.82 , RSD %=2.0;异板精密度:精密吸取同一
样品溶液 4μl分别点于 5块不同薄层板上 ,依法测
定 。结果平均值为 1.42%, RSD%=2.8 ,表明精密
度良好 。
3.5 样品含量测定 精密吸取毛知母样品溶液
4μl 、知母肉样品溶液 10μl 、菝葜皂甙元对照品溶液
4μl 、8μl点于薄层板上依法测定 ,结果见表 2。
表 2 知母中菝葜皂甙元的含量(n=3)
样品 来原 含量(%) RSD(%)
1毛知母 河北 1.42 2.9
2毛知母 河北 1.13 3.0
3毛知母 山西 1.21 2.5
4知母肉 由 1加工 0.36 1.8
5知母肉 河北 0.32 2.4
6知母肉 北京 0.41 2.8
3.6 加样回收实验 取知母粉末 0.5g ,精密称定。
加入一定量菝葜皂甙元对照品 ,按样品制备同法操
作 ,依法测定 ,计算回收率 ,结果见表 3。
表 3 加样回收实验结果
样品含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
2.996 3.060 6.015 99.64
2.924 3.060 5.862 96.01
2.948 3.060 5.917 97.03 96.7
2.956 3.060 5.930 93.82 RSD=2.1%
2.932 3.060 5.904 97.12
4 小结与讨论
4.1 实验中比较了薄层色谱法测定知母中菝葜皂
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甙元含量使用的 3种显色剂 ,其中 10%高氯酸乙醇
溶液显色稳定性较好 ,稳定时间 2h以上 ,操作简便 ,
适用于知母药材中菝葜皂甙元的含量测定。
4.2 《中国药典》知母项下规定 ,知母中菝葜皂甙元
含量不少于 1%。本实验测定结果显示毛知母中菝
葜皂甙元含量较高 ,可以符合药典要求。将鲜知母
剥去外皮晒干者 ,习称“知母肉” ,本实验结果显示知
母肉中菝葜皂甙元含量明显低于毛知母 ,达不到药
典的要求。这一结果提示知母中菝葜皂甙成分可能
在表皮部分分布较多 ,有必要作进一步的研究。
参考文献:
[ 1] 任爱农 ,季锡忠 ,龙湘鸿.知母中菝葜皂甙元含量测定方法探讨
[ J] .中成药 , 2000 , 22(2):171
[ 2] 中华人民共和国药典[ S] .一部 ,北京:化学工业出版社 , 2000 ,
142.
伤痛外搽酊活血祛瘀作用的研究
蒋孟良1 , 董桂兰1 , 易延逵1 , 李安国1 , 李 云2 , 刘国荣2
(1.湖南中医学院 ,湖南 长沙 , 410007;2.株洲运动创伤药物研究所 ,湖南 株洲 412000)
摘要:目的:探讨伤痛外搽酊的活血祛瘀作用。方法:采用耳廓微循环法测定了小鼠微血管管径和 RBC 流速;旋转玻璃
株瓶法 、比浊法测定了血小板粘附与聚集性;凝血酶原时间(PT)法和优球蛋白溶解法测定了动物的 PT 和纤溶活性。结
果:伤痛外搽酊对肾上腺素所致血瘀模型之微血管具有明显扩张作用 ,并可加快微血管血流速度 , 对家兔血小板粘附性
与聚集性具有显著抑制作用 ,且可延长凝血酶原时间和提高纤溶活性。结论:伤痛外搽酊具有显著的活血祛瘀作用 , 其
强度较正红花油稍好。
关键词:伤痛外搽灵;活血祛瘀;微循环;血小板功能;凝血酶原时间;纤溶活性
中图分类号:R969 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2000)11-0806-03
收稿日期:1999-08-30
作者简介:蒋孟良(1954～ ),男 ,副教授 ,硕士生导师,主要从事中药药理及炮制研究。电话:0731-5381527.
伤痛外搽灵属新的中药制剂 ,由三七 、血竭 、马
钱子 、草乌等组成。经乙醇浸渍而成的酊剂 ,具有活
血祛瘀 、消肿止痛等作用 ,临床用于瘀血肿痛等 ,作
用快 ,疗效高。 Ⅱ期临床对 520例急慢性软组织损
伤病例进行观察 ,结果总有效率为 97.7%[ ] 。为验
证和探讨其药理作用 ,笔者以正红花油为阳性对照 ,
肾上腺素血瘀模型小鼠的耳廓微循环等进行了实验
研究 ,表明本品具有良好活血祛瘀作用 。
1 实验材料
1.1 实验动物 N IH 小鼠 ,日本大耳白家兔:购自
湖南中医学院实验动物中心 ,合格证号:湘医动字
(1995)20-001 ,20-0030。
1.2 药品与试剂 伤痛外搽灵:株州运动创伤药物
研究所 ,批号 980418 ,正红花油:新加坡依玛打联华
药业公司 ,批号 819802;盐酸肾上腺素:无锡市第四
制药厂 ,批号 980101;乌拉担:AR ,北京化工厂 ,批
号 970607。
1.3 实验仪器 生物显微镜:国营江南光学仪器
厂;显微测微尺:0.01mm ,长春市第一光学仪器厂。
2 方法与结果
2.1 耳廓微循环试验[ 1] 取健康 NIH 小鼠 50只 ,
体重 18 ～ 21g ,按体重 、性别 ,随机分为 5组 ,每组 10
只 ,每鼠右耳用 8%硫化钠脱毛 ,再用温水洗净 , 24h
后进行实验 。实验时先用 12%的乌拉坦0.1ml/10g
体重进行麻醉 ,再将右耳置显微镜载物台上 ,放大
100倍观察 ,并用测微尺测定其微动脉与微静脉管
径大小 ,观察微血管 RBC 流速 ,分别按快速(直线
状)记 4分 ,中速(虚线状)记 3分 ,慢速(粒状)记 2
分 ,停止(瘀滞状)记 1 分 ,再每鼠尾静脉注射 1∶
1000肾上腺素 0.1ml/10g 体重 ,同上测定微血管管
径与流速 ,然后分别滴上不同受试物 0.05ml/20g体
重(第 1组为 60%乙醇对照组 ,第 2组为正红花油 ,
第 3组为 13.783%外搽灵 ,第 4组为 41.34%外搽
灵 ,第 5 组为 68.915%外搽灵), 给药后 10min 、
20min分别同上测定微血管管径与流速 ,对数据进
行成组 t 检验比较 ,结果见表 1 ～ 3。
2.2 血小板功能的测定
2.2.1 对家兔血小板粘附性的影响[ 2] 取体重 1.6
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中 成 药
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