全 文 ：第 l卷 第 4期 分析测试技术与仪器
1 9 5年 1 2月 A NA Y SI LSA N DE TS T】 NG E TC HO O G N LY A N D
o V fu r ne 1 Nu m e b r 4
I NS TU RME S N Tec D
.
1 9 5
分析测试新方法 (1 2一 1匀
知母及制剂中菠葵皂贰元
的反相高效液相色谱测定
杨宁莲
(宁夏自治区医院
杨文远
银川 7 5) (X1 2)
王天勇 `
(宁夏大学分析测试中心 银川 7 5 ( X犯 l)
摘 要 用反相 高效液相 色语法测定 了知母及其制 剂 中的援莫皂武元 , 建立 了 中药及制 剂 中搜
葵皂武 元刚 定的 色谱方 法 。 为知毋及其制 剂 的质量评价提供 了一种新的分析方法 。
关键词 援莫皂武元 知毋 制 剂 反相 高效液相 色谱法
1 前 言
知母为百合科知母属植物的干燥根茎 , 是传统中药 , 其功能有清热降火 、 滋阴清肺 、
生津润燥 , 主治外感热病 、 高热烦渴 、 肺热燥咳 、 骨蒸潮热 、 肾虚火 旺 、 肠燥便秘等 。 近
年药理研究证明还具有抗菌 、 解热 、 降血糖等作用 。 知母有效成份为多种 街体皂贰 , 其贰
元主要为菠葵皂贰元 lo[]
菠葵皂贰元的分离 、 测定方法文献报道较少 , 近年来出现的方法有薄层扫描法「刁 和气
相色谱法阎 , 而用反相高效液相色谱法的报道甚少 。 本研究用反相高效液相色谱法分离并测
定了中药知母及其制剂中的菠葵皂贰元 , 取得满意结果 。 本方法简便 、 灵敏 、 准确 , 具有
较好的通用性 , 为知母及其制剂的质量考察提供了一种新的方法 。
2 实验部分
2
.
1 仪器与试剂 、 样品
仪器 : 高效液相色谱 S IH M A D Z U L C 一 6A 系统 , 班D 一 6A 检测器 , S L C 一 6A 系统控
制器 , C 一 3R A 数据处理系统 , 以上均为 日本岛津制作所产品 。 C SF 一 IA 超声波发生器 ,
上海超声波仪器厂 。 M洲 p o er 溶剂过滤系统 , 美国 M l lP o er 公司 。
试剂与样品 : 甲醇 , 优级纯 , 北京化工厂 。 氯仿 、 乙醇 、 盐酸均为优级或分析纯 。 菠
奠皂贰元 , 中国药品生物制品检定所 。 知母样品由宁夏区医院提供 , 经中药主管药师何富
章鉴定为知母 A n a n a n h e n a a印 h o del o id es B un ge 。 制剂 , 知柏地黄丸 , 河南省宛西制药厂 。
* 通讯联系人 。
收稿 日期 : 19 5 一 06 一 09 ; 收到修改稿日期 : 19 5 一 07 一 29 。
第 4 期 杨宁莲等 : 知母制剂中菠葵皂贰元的反相高效液相色谱测定 13
2
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2 色谱条件
色谱柱 : Sl hm一 p a ck CL C一 OD S巧 ~
x 6 .0
~
i
.
d
., 填料粒度为 5 # m , 带有前置保
护柱 ; 流动相 : 甲醇 , 临用前以 .0 2 # m 微孔滤膜过滤 , 并经超声脱气处理 ; 检测器 : FJ D
一 6A , 灵敏度 : 8 x 10一租 u邓 S ; 流速 : .0 s m L l/ ` n ; 柱温为室温 。
2
.
3 样品溶液的制备
知母样品经干燥粉碎后准确称取 1 9 , 用 80 11止 乙醇于索氏提取器中提取无色馏出液 ,
并用 H甲 L C 法定性检查确认待测组分已提取完全 。 提取液用旋转蒸发器回收溶剂 , 残渣加
2 0 In L 2mo l几 盐酸回流水解 Z h , 用 60 m L 氯仿分三次回流萃取 , 每次 30 而n 。 回收氯
仿 , 残渣用 甲醇溶解并最后定容为 50 m L , 制成样品溶液 。
制剂经粉碎后准确称取 4 9 , 按上述知母样品相同方法进行提取 、 水解 、 萃取 , 然后 回
收氯仿 , 残渣用甲醇溶解并定容为 10 In L , 制成制剂的待测样品溶液 。
3 结果与讨论
3
.
1 标准溶液的配制与线性实验
准确称取菠莫皂贰元 10 gm 用甲醇溶解并定容为 10 m L , 浓度为 1 . 0 9几 , 然后稀释成
含 0 . 0 5、 0 . 1 0、 0 . 30 、 0 . 50 、 0 . 70 、 0 . 9 0 和 1 . X() g L/ 菠莫皂贰元的系列标准溶液 。 按 2 . 2 节
所述色谱条件 , 每次进样 5户L , 以峰面积 A 对浓度 c 进行回归 , 浓度范围 .0 05 一 1 . 0 9几 ,
得回归方程为 : A = 862 5 . 2 l C 一 2 5 . 50 r = 0 . 99 9 7
3
.
2 样品分析 门
样品溶液 (包括知母样品和
制剂样品) 经 M浙 p o er 溶剂过
滤系统过滤后 , 在上述相同色
谱条件下进样 , 每次 5 群L , 知
母样品色谱图见图 1 , 制剂样品
色谱图见图 2 。
3
.
3 精密度试验
在 ~匕述相同色谱条件下 , 用浓
度为 0 . 50 9L/ 的菠 莫皂贰元标
准溶液各进样 6 次 , 每次 5 料L ,
分别测定各次的峰面积 A , 然后
求其平均值和 SR D 。 结果见表 1 。
3
.
4 回收率测定
分别精密称取 已测知含量
的知母样品 6 份 , 每份重 .0 5 9 ,
其 中三份不加标样 作为基样 ,
按样品分析方法进行测定 , 求
得三次测定平均值作为基样含
量 , 另三份分别加标样 g mg , 同
0 5 10 15
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图 1 知母样品色谱图
峰 1为筱莫皂贰元
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制剂样品色谱图
峰 1为筱莫皂贰元
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分析测试技术与仪器 第 1卷
表 1精密度试验
1a?I兔 I P阳改盘妇 1加盆
A 单次测定值 A 平均值 S R D (% )
4 17 2 4 19 4 4 15 2 4 1卯 4 165 423 2 4 17 8 . 2 07 6
样按样品分析方法测定 , 计算回收率 , 结果见表 2o
表 2 回收率测定
T戒触 2 ` 众血门曲圈曲咖 of ” 沉” 悦 I’y
基样含量 加标样量 加标样后测得量 回收率 回收平均值
(% )
9 7
.
6
飞7一,、ù八“月琦%一7了On月`一Q了n,(印 g )
17
.
85
17
.
82
17
.
9 5
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3
.
5 样品前处理方法的优化
知母样品中贰元测得量与水解时间的关系 , 实验结果见表 3。
表 3 水解试验
1习众 3 E x 碑峋 . 图 . of hdy 川班台
水解时间 ( h)
贰元含量 ( m乡g/ )
0
.
5
1.4 20
1
.
0
1.7 70 1.8 2
2
.
0
18
.
23 1.8 23
3
.
0
18 23 18
.
23 18
.
23
4
.
5
1.8 24 1.8 24
知母样品水解后用氯仿回流萃取 , 贰 表 4 萃取试验
元测得量与萃取次数的关系 , 实验结果见
~
4 E x碑 dm曰出 of
~表 4 。 一上述实验结果表明 , 为兼顾贰元提取 萃取次数 1 2 3 4 一鉴完全和缩短分析时间 , 则优选水解时间为 』贰元含鼻( gm g)/ ’ 7 .31 ’ “ · ’ 9 2垦23卫圣2玉坚兰Z h , 萃取次数为 3 次为宜 。 卜3 . 6 样品分析结果将知母样品 、 制剂样品按 2 . 3 节方法制备样品溶液 , 在 2 . 2 节所述色谱条件 「进样 , 每次 5 拜L , 以外标法定量 , 每种样品平行测定 5 次 。 知母样品中菠莫皂贰元含量为 1.82 3mg 德 ,sR D 为 .0 73 % ; 制剂样品中菠莫皂贰元含量为 .0 38 gm 电 , RS D 为 .0 87 % 。4 结 语知母及其制剂的质量评价 , 迄今为止 , 尚无较理想的定量方法 。 中国药典 1990 年版只收载了三种鉴别方法作为定性的依据阅 , 而并未列 出合适的含量测定方法来量化知母的质量指标 。 本文建立的反相高效液相色谱方法 , 对知母及其制剂有效成分的含量测定有较好的
第 4 期 杨宁莲等 : 知母及制剂中获奕皂贰元的反相高效液相色谱测定
精密度和准确度 。 菠莫皂贰元是街体贰元 , 从其结构看 , 分子中不具共扼结构 , 故不宜用
U V 检测 , 而用 班检测 。 从本文采用的色谱条件考察 , 色谱柱为 O D S 柱 , 流动相仅用 甲
醇即可完成知母中复杂成分的分离 , 检测器为 租D , 柱温为室温 , 以上设备均为 H P L C 的
基本配置 , 所用条件亦为基本必备条件 , 故本方法具有较好的通用性和广 泛的适用性 , 凡
具有 H P LC 仪器的实验室均可完成知母及制剂中有效成分的分离和定量测定 。
致谢 : 知母样品承何富章先生鉴定 , 特此致谢 。
参 考 文 献
〔l] 江苏新医学院编 . 中药大辞典 (上 ) , 上海人民出版社 , 上海 ,
f2] 张国刚 , 徐绥绪 , 周 密 . 中草药 , l更辫 , 25 (2) : 69 .
3[] 李长秀 , 张铁垣 , 陈维杰 . 分析测试学报 , 19 5 , 14( :l) 61 .
4[] 中华人民共和国卫生部药典委员会编 . 中华人民共和国药典
北京 , 1空灭) : 184 .
19 :7 1367
.
( 19叩 年版 , 一部 ) , 人 民卫生出版社 ,
D e t e r而n a it o n o f S a rs a s a P o g e n in i n A n em a r h en a
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(仆 e H o sP iatl o f iN n gx i a A u t o n o om u s R e g i o n , YI l l e h u a n 7 500 2 1)
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(乃 e C e n加 o f A x l a ly is s an d T es t ln g , iN n g劝a U n iv e r S lyt , iY n ch au n 7 50 0 2 1)
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