全 文 ：一9 5 2一 药物分析杂志C 枯 nJh Pr a mA na l 2( 0 )5
,
25 ( 8 )
高效液相色谱 一蒸发光散射检测法测定知母中获奠皂昔元的含量
沙东旭 , 陈桂范 , 张满来
(辽宁省药品检验所 沈阳 n o 2 3)
摘要 目的 :建立知母中菠羹皂昔元的含量测定方法 ,为其提供质量标准 。 方法 :应用高效液相色谱 一蒸发光散射检测器 , iD -
am on isl C
I 。
(巧。 ~ x 4
.
6 ~
,
5 卿 )色谱柱 , 以甲醇 一水 ( 9 5 : 5) 为流动相 ,流速为 0 . 8 m L · m in 一 ’ , 漂移管温度为 90 ℃ ,载气
流速为 1 . S L · m in 一 ’ 。 结果 :菠葵皂昔元在 1 . 04 一 5 . 2 此 范围内呈 良好线性关系 ,平均回收率为 97 . 6 % ( RS D 二 2 . 1% ) 。 分
析了湖北 、 山西及辽宁等产地知母中菠葵皂普元的含量 ,不同产地知母中菠葵皂昔元的含量为 0 . 91 % 一 2 . 94 % 。 结论 : 该方
法简便 、 准确 ,无干扰 ,可用于知母中菠莫皂昔元的的质量控制 。
关键词 : 知母 ;菠葵皂昔元 ; H P L C 一 E此 D
H P L C 一 E L S D D e t emr i
n a t i o n o f S a r s a s a P o g e ul n in
A n e m a 刀.h e n a a sP h o de ot 记云5 B g e .
S H A D
o n g 一 x u , C H EN G u i 一 fa n , Z H A N G M a n 一 la i
( L ao
n i n g In s it 一u t e fo r D ur g C o n加 l , S h e n y a n g 1 1X() 2 3 , Cih n a )
A b s t r a c t o bj
e e it v e : oT
e s ta b l i s h ht e 四a n t i tat i v e m e t h o d of r s ar s a s a p o g e n in in Ane am hrT e an 呷 h o de ol ide s B g e . b y
HLP C
一 E玲D . M e ht od : hT e e o l u mn u s e d w a s a p a e k e d w it h s 林m s t a t i o n a砂 ph a s e D i a m o n s i l C l : ( 4 . 6 m m x 15 0
mrn
,
5 林m )
.
hT
e m o b i le ph a s e c o n s i s t e d 。 f m e t h an o l 一 w at e r ( 9 5 : 5 )
,
w i山 a n ow ar t e 。 f 0
.
5 m L
·
m i n
一 ’ , th e c o n
-
t e n ts of
s踢 a s a p o邵 n i n we er m e a s u er d . A t a te m p e ar tu er of d ir ft tu b e Of 90 ℃ a n d t h e n e b u l i z e r n i t r o g e n fl ow ar te
w as 1
.
S L
·
m i n
一 1 .
R e s u l t : hT
e l i n e ar arn 罗 of ht e e o m p o n e n t w a s 1
.
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.
2 2 协9 . S e v e r al s a m p l e s o f A n e ma hr
e -
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a v e r a g e er e o v e叮 o f s a sr a s a P o g e n i n in e ur d e m at e ir a l w a s 9 7 . 6% ( SR D = 2
.
1% )
.
C o n c lus i
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.
K e y wo dr
s : A n e m a r r h e n a a 冬p ho de l o记 e s B g e . ; s a r s as a p o g e n i n ; H P LC 一 E玲 D
知母 A n e m a hrT e n a asr h o de lo ide s B g e . 为常用中
药 ,收载于 2 00 年版中国药典 〔’ 〕 。 现代药理研究表
明知母皂昔及皂昔元为其清热泻火 、 生津润燥的主
要成分〔2〕 , 其中菠葵皂昔元作为指标成分用于知母
药材及其制剂的质量控制 。 20 0 年版中国药典中
知母的含量测定方法为薄层扫描法 , 采用 了二次层
析 ,显色后扫描 ,该方法操作烦琐 ,误差较大 ;并且有
水解条件不易控制 、 使用毒性试剂— 苯等缺点 。本文对知母中菠葵皂昔元的含量测定方法进行了研
究 ,用水代替乙醇使水解条件可控 ,氯仿代替苯作为
提取溶剂 ,采用高效液相色谱 一 蒸发光散射检测器
检测 ,建立了知母的质量控制方法 。
1 仪器和试药
美国 W at e sr s巧 双泵 ;美国 lA t ec h 20 0 型蒸发
光散射检测器 ; 7 7 2 5 1手动进样器 (美国 hR e o d y n e ) :
cE h or m 98 色谱工作站 (大连依利特科学仪器有限
公司 ) ;空气发生器 (天津市达因仪器厂 ) 。
知母药材来源详列于表 1并经本室吴继岑药师
鉴定为百合科植物知母 A en lan 厅入e an asP ho de le 记e s
B ge
. 的 干燥根茎 。 菠莫皂 昔元对照 品 ( 07 4 -
20 0 05
,供含量测定用 , 中国药品 生物制 品检定
所 ) 。 甲醇为色谱纯 , 其他试剂均为分析纯 ;水为超
纯水。
2 色谱条件
D i a m o n s i l C
I : 分 析柱 ( 4 . 6 m m x 15 0 m m , 5
林m ) ;流动相 : 甲醇 一 水 ( 9 5 : 5 ) ; 流速 : 0 . 8 m L ·
m in
一 ’ , E玲D 检测器漂移管温度 : 90 ℃ ;载气流速 :
1
.
S L
·
m in
一 ’ ; 柱温 : 室温 。 对照 品溶液进样 5 , 10
DOI : 10. 16155 /j . 0254 -1793. 2005. 08. 015
药物分析杂志C hi nJ ph a r mA na l 25 00, 2 5 ( 8 )
匹 ,供试品进样 5 一 10 林L 。 按以上色谱条件得到对
照品 、知母药材的色谱分离图 ,见图 1 。
. 1 . … 1 .0 4 8 12A
8 1 2 t /
一 i n
图 1 对照品 ( A ) 、样品 ( B )高效液相色谱图
F ig 1 I l p L C e hID
m a t o gr a l l飞5 of r e fe o n e e s l lb s atn
e e ( A ) an d sazn
p l e ( B )
1
. 菠莫皂昔元 (
~
a op ge in n)
3 溶液的制备
3
.
1 对照品溶液 精密称取菠莫皂昔元对照品适
量 ,加甲醇溶解制成 0 . 3 m g · mL 一 ’ 的溶液 。
3
.
2 供试品溶液 取本品粉末 (过三号筛 )约 0 . 5
g〔同时另取本品粉末测定水分 ( 中国药典 20 0 年
版一部附录 XI H 第一法 ) 」,精密称定 , 置具塞锥形
瓶中 ,精密加乙醇 25 m L ,称定质量 ,浸泡过夜 ,超声
处理 (功率 Zo w ,频率 30 k zH )40 而 n ,放冷 ,再称
定质量 ,用 乙醇补足减失的质量 ,摇匀 ,滤过 ;精密量
取续滤液 10 tnL , 置水浴中蒸尽乙醇 ,加水 10 tnL ,盐
酸 l mL ,置水浴中回流 Z h ,取出 ,放冷至室温 ,边振
摇边滴加 40 % 氢氧化钠溶液至溶液颜色由橙黄突
变为橙红 , 用氯仿萃取 2 次 , 每次 50 m L ,合并氯仿
提取液 ,蒸干 ,残渣加甲醇溶解 , 转移至 10 m L 量瓶
中 ,并稀释至刻度 , 摇匀 , 即得 。
4 方法与结果
4
.
1 检测器参数优化 根据流动相种类和比例 , 在
不同漂移管温度和不同载气流速条件下观察菠葵皂
昔元对照 品的信号强度 , 最后确定漂移管温度 90
℃ ,载气流速 1 . S L · m in 一 ’为最优参数 。
4
.
2 线性关系考察 精密称取菠葵皂昔元对照品
10
,
4 mg
,置 10 m L 量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻
度 , 摇匀 , 制成每 l m L含 1 . 0 4 4 mg 的溶液 。 分别精
密吸取 1 , 2 , 3 , 4 , 5 林L , 依次注人液相色谱仪 ,按上
述色谱条件测定峰面积 , 以进样量的自然对数为横
坐标 ,色谱峰面积的自然对数为纵坐标 ,绘制标准曲
线 , 回归方程为 :
Y = 4
.
16 0 8X + 1
.
464 8
r = 0
.
9 9 9 9
结果表明筱葵皂昔元对照品进样量在 1 . 04 一 5 . 2
林g 范围内对数值与峰面积值的对数值呈良好的线
性关系 。
4
.
3 稳定性试验 取待测供试品溶液 , 在 0 , 2 , 4 ,
6
,
7 h 时进样测定 , SR D 为 0 . 76 % 。
4
.
4 精密度试验 精密吸取 0 . 3 m g · m L 一 ’对照
品溶液 10 林L ,重复进样 5 次 ,测定 , R SD 为 0 . 85 % 。
4
.
5 重复性试验 取同一批次的知母药材 5 份 ,精
密称定 ,按 “ 3 . 2 ” 项下方法操作 , 依法测定 , 进样 10
卜L ,药材中菠羹皂昔元平均含量 (未扣除水分 , n =
5 )为 1 . 5 2 % , SR D 为 2 . 0% 。
4
.
6 回收率试验 取 本品 粉末 0 . 25 9 ( 含量
1
.
6 % )精密称定 , 精密加人乙醇 20 m L , 再精密加
人菠奠皂昔元对照品溶液 (0 . 7 84 mg · rnIJ 一 ’ ) s mIJ ,
余按 “ 3 , 2 ” 项下方法操作 , 依法测定 。 进样 10 林L ,
平均回收率 ( n = 5) 为 97 . 6% , sR D 为 2 . 1% 。
4
.
7 最低检测限及定量限 取 0 . 3 m g · mL 一 ’ 对
照品溶液 ,用甲醇依次稀释成一系列 由高到低的梯
度浓度溶液 ,在上述色谱条件下分别进样测定 , 最低
检测限 ( S/ N = 3) 为 0 . 06 此 ,最低定量限 ( s/ N 二
10 )为 0 . 13 林g 。
4
.
8 样品测定 分别精密吸取对照 品溶液 5 , 10
泌 与供试品溶液 5 一 10 林 L ,注人液相色谱仪 ,依上
述色谱条件测定 , 以外标两点法对数方程计算菠葵
皂昔元的含量 ,结果见表 1 。
表 1 样品含 , 测定结果【n = 3)
aT b 1 R se lu st of
, ” n P leS d e et n川 au 如 n
菠葵皂普元含量
e o n t e口 t of
R SD
/%` 田比旧旧 .训罗山 ) /%
2叨49165793L.01L9463127卯8的住LL么.2之上辽宁本澳 (氏瓜 j , u aD山 g )
辽宁沈阳 (乳 , y明 g , U aD n i n g )
辽宁丹东 ( D an do n g , b ao in n g )
辽宁大连 ( D山an , U ao山 g )
辽宁辽阳 ( U aoy 哪 , u aD n i n g )
山西省 ( Sh an 万 i p
~
e
)
辽宁锦州 ( J i n里 h o u , U aom n g )
辽宁朝阳 ( C卜即 y an g , U a o n m g )
辽宁鞍山 ( nA Bhan
,
u . 川叱 )
湖北省 ( H u be i p。 汕e e )
一 9 54一 药物分析杂志 C hi nJ Ph arm An al Z)( X 5, 2 5 ( 8 )
4 讨论
4
.
1 菠葵皂昔元在紫外区内几乎无吸收 ,仅在近紫
外区有末端吸收 ,采用高效液相色谱紫外法检测时 ,
往往由于灵敏度低 、 基线易漂移及溶剂的干扰而无
法测定 ;另有文献报道采用示差法 〔’ 】和蒸发光散
射 4[] 测定菠葵皂昔元的含量 ,后者虽然克服了薄层
扫描法 、示差法的不足 , 但是仅用 了甲醇作为流动
相 ,并且水解时的温度及蒸汽量不易控制 ,如果不慎
就会造成待测成分损失 ;另外不宜用毒性溶剂苯提
取和溶解样品 。
4
.
2 实验中对供试品溶液制备方法作了考察 ,分别
考察了萃取溶剂和次数 、水解时间及方式 。 实验结
果表明 , 可以用氯仿代替毒性试剂苯 , 萃取 2 次 , 每
次 30 m ;L 菠莫皂昔元在酸性乙醇中对热不稳定 ,成
分易受到损失 ,而菠葵皂昔元在酸水中比较稳定 ,在
水浴中水解比较完全 , 因此水解方式确定为样品溶
液蒸干乙醇 ,加水溶解 ,加盐酸在水浴中水解 。
4
.
3 蒸发光散射检测器 , 由于流动相在检测前即已
蒸发 ,因此提高了基线的稳定性 。 雾化气体流速和
漂移管温度是蒸发光散射检测器的 2 个重要可调节
参数 s[] 。 实验中经过反复 、 仔细调节参数 ,得到了
最优信噪比及平稳基线 。
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,
16 ( 6 )
: 4 14
(本文于 2以M 年 9 月 26 日修改回 )
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