全 文 ：· 790　 · 第 二 军 医 大 学 学 报
Acad J S ec Mil Med Univ
　2006 Jul;27(7)
·技术方法·
知母中菝葜皂苷元前处理方法探讨
朱东亮 ,李　翔 ,娄子洋 ,董　昕 ,柴逸峰＊
(第二军医大学药学院药物分析学教研室 , 上海 200433)
[ 摘要] 　目的:对《中国药典》 2005 版一部中知母药材的菝葜皂苷元含量测定的前处理条件进行改进。方法:采用 L9(33)正
交设计表 ,对超声时间 、提取溶剂乙醇的比例以及超声次数等因素进行优化。为确保色谱方法的沿用性 , 还做了加样回收率考
察。结果:最终确立了 70%乙醇超声 20 min提取 2 次作为最优的提取条件 , 再进行水解得到皂苷元进行含量测定。结论:
与药典方法比较 ,改进后的方法测定的含量结果有了较大提高 ,能够反映出样品中真实的菝葜皂苷元含量。
[ 关键词] 　知母;菝葜皂苷元;提取法
[ 中图分类号] 　R 284.2　　　[ 文献标识码] 　A　　　[ 文章编号] 　0258-879X(2006)07-0790-02
Pretreatment of sarsasapogenin in Rhizoma Anemarrhenae:a research of methodology
ZH U Dong-liang , LI Xiang , LOU Z i-yang , DONG Xin , CHAI Yi-feng＊(Depar tment of Drug Analy sis , School o f Pharmacy
Second M ilitar y Medical Univ ersity , Shanghai 200433 , China)
[ ABSTRACT] 　Objective:To improve the pre treatment me thod described in ChP(2005 Edition , Vol Ⅰ)fo r the de te rmination
of sarsasapogenin in Rhizoma Anemarrhenae.Methods:Acco rding to o rthogonal de sign L9(33), the ex traction time , alcoho l
concentra tion , ex traction frequency , etc.we re modified to achieve the be st ex traction outcome with ultrasonic w ave extr action.
Results:The optimal ex traction condition included 70% alcoho l and twice ultr asonic wave ex traction , 20 min each time.F inally
hydrolization w as applied to obtain sar sasapogenin for determination.Conclusion:Compared w ith the pretr eatment method in
ChP , this im proved extr action me thod show s a higher sar sasapogenin content in determination and is more accur ate in ref lecting
the true content of sar sa sapogenin in R hizoma Anemarrhene.
[ KEY WORDS] 　Rhizoma Anemarrhene;sar sa sapogenin;ex traction
[ Acad J Sec M il Med Univ , 2006 , 27(7):790-791]
[基金项目] 　上海市科委重大项目(2403DZ19548);上海市科委科技
攻关项目(02419125).Supported by Key Program of Shanghai Science
and T ech nology Comm it tee(2403DZ19548), Grants for Tackling Key
Prog ram of Shanghai S cience and Technology C ommit tee(02419125).
[ 作者简介] 　朱东亮 ,硕士.
＊Corresponding autho r.E-mail:YfC hai2003 c@163.com
　　《中国药典》 2005 版一部中知母(Anemarrhena asphode-
loides Bge.)的含量测定 , 以菝葜皂苷元作为指标成分 , 采用
高效液相色谱法 , 蒸发光散射检测方式进行测定[ 1] , 笔者在
实验中发现药典方法中药材的前处理中存在一定的不合理 ,
没有充分提取药材中的菝葜皂苷元 , 有待进一步改进。本研
究主要对知母药材中菝葜皂苷元的提取方法进行考察和改
进。
1　仪器和试药
　　WATERS 510 双泵(美国WATERS);7725i手动进样器
(美国 RHEODYNE);SEDEX 75 型蒸发光散射检测器(法国
S EDRE);Sr3dv色谱数据工作站(上海军锐)。
　　知母药材由本校药学院生药学教研室陈万生副教授分
别采集自安徽亳州 、山东济南 、湖南长沙和浙江温州 , 通过鉴
定均为百合科植物知母的干燥根茎 , 并按照《中国药典》2005
版一部要求干燥 , 切片 , 粉碎并过 3 号筛。菝葜皂苷元购自
中国药品生物制品检定所(批号:0744-990)。乙醇 、乙腈均
为色谱纯 ,水为纯净水。
2　方法和结果
2.1　色谱条件　采用《中国药典》2005 版方法[ 1] 。
2.2　提取方法改进
2.2.1　正交实验设计　采用超声波提取 , 选取对超声提取
有影响的 3个因素 , 即超声时间(A)、乙醇比例(体积比)(B)
以及提取次数(C), 每个因素选择了3 个水平 , 采用 L9(33)正
交表进行正交实验设计。
2.2.2　样品液的制备与测定　精密称取药材粉末 0.5 g ,置
25 ml量瓶中 , 按正交设计方案加入不同比例的乙醇适量 ,超
声提取 , 用少量乙醇洗涤残渣 ,合并提取液并过滤 , 精密量取
续滤液 10 ml ,水浴蒸干 , 加水 10 ml , 盐酸 1 ml , 水浴回流 2
h ,冷至室温 ,用氯仿萃取 2 次 , 每次 30 ml , 合并氯仿提取
液 , 蒸干 , 残渣加甲醇溶解 , 转移至 10 ml 量瓶中 , 并稀释至
刻度 , 摇匀 ,即得。按“ 2.1 色谱条件”项下试验 , 进样 20 μl ,
外标曲线法计算菝葜皂苷元的含量。
　　以菝葜皂苷元的含量作为指标成分 , 优选提取条件 , 测
定结果见表 1 , 方差分析结果见表 2 , 3 个因素对提取结果影
第 7期.朱东亮 ,等.知母中菝葜皂苷元前处理方法探讨 · 791　 ·
响大小的顺序为 B>C>A , 其中 B 是影响提取结果的主要
因素。最佳的提取条件为:A 2B2C2 , 即 70%乙醇超声提取 2
次 ,每次 20 min。方差分析结果表明:乙醇浓度对结果影响
最为显著(P<0.05)。
表 1　正交实验结果
Tab 1　Results of orthogonal experimental design
N o. Ext ractiontime(A , t/min)
Ethanol%(B, V/ V , %)
Ex tract ion
frequen cy(C)
Content of
sarsasapogenin(mg/g)
1 1(10) 1(40) 1(1) 1.19
2 1 2(70) 2(2) 2.06
3 1 3(95) 3(3) 1.37
4 2(20) 1 2 1.85
5 2 2 3 2.21
6 2 3 1 0.94
7 3(30) 1 3 1.33
8 3 2 1 1.62
9 3 3 2 1.13
T1k 4.62 4.37 3.75 -
T2k 5.00 5.89 5.04 -
T3k 4.08 3.44 4.91 -
R 0.92 2.45 1.29 -
表 2　方差分析表
Tab 2　Analysis of variance
Sou rce
Sum of
Squares
f M ean
Square
F P
Ext raction t ime(A) 0.116 2 0.058 1.930 >0.05
Ethan ol%(B) 1.363 2 0.682 22.710 <0.05
Ext raction frequency(C) 0.104 2 0.052 1.738 >0.05
R 0.060 2 0.030 - -
2.3　加样回收率试验　精密称取知母药材粉末 5 份各 0.5
g , 分别精密加入菝葜皂苷元对照品 ,按供试液制备方法制备
得 5个加样回收的样品溶液。分别在上述色谱条件下进行
检测。实验测得平均加样回收率为 106.4% , RSD=2.61%
(n=5)。
2.4　2 种方法测定结果比较　取 4 个产地的知母药材 , 分别
按上述供试液制备方法和《中国药典》 2005 版一部知母前处
理方法制备样品溶液 ,色谱条件同前 , 测定结果见表 3。
3　讨　论
　　药典前处理方法:取本品粉末(过 3 号筛)约 0.5g , 精密
称定 ,置具塞锥形瓶中 , 精密加乙醇 25 ml , 称定质量 ,浸泡过
夜 ,超声处理(功率 200 W ,频率 30 kHz)40 min , 放冷 ,再称
定质量 , 用乙醇补足减失的质量 , 摇匀 , 滤过;精密量取续滤
表 3　样品含量测定结果
Tab 3　Result of sarsasapogenin
contents determination
(n=3 , x±s , mg/ g)
S ou rce of R hizoma
A nemarrhenae
Meth od
in ChP
Im proved
method
Anhui Bozhou 0.93±0.11 1.32±0.09
Shandon g Ji nan 1.86±0.13 2.35±0.14
H u nan Changsha 1.12±0.13 2.18±0.19
Zhejiang Wenzhou 1.54±0.17 2.95±0.18
液 10 ml ,置水浴中蒸尽乙醇 ,加水 10 ml , 盐酸 1 ml , 置水浴
中回流 2 h , 取出 ,冷至室温 , 边振摇边滴加 40%氢氧化钠溶
液至溶液颜色由橙黄突变为橙红 ,用氯仿萃取 2 次 , 每次 30
ml ,合并氯仿提取液 ,蒸干 , 残渣加甲醇溶解 , 转移至 10 ml
量瓶中 , 并稀释至刻度 , 摇匀 ,即得。
　　知母药材中菝葜皂苷元并不是最主要的存在形式[2 ～ 4] ,
通常与糖结合形成皂苷 , 单纯采用乙醇为提取溶剂 , 采用超
声方法提取皂苷类成分 ,难以提取完全[ 5] 。本文为优化提取
条件进行了正交设计 ,得到的最优的提取方法为 70%乙醇超
声 20 min 2 次提取知母皂苷 , 再用水解方式得到苷元 , 可以
充分提取出菝葜皂苷元。
　　加样回收率试验结果表明 ,改进后的方法可以继续沿用
药典中的色谱条件 ,准确性能够得到保证。
　　本法简化了药典方法 ,删减了 40%氢氧化钠调节 pH 值
的步骤 , 对含量测定结果并无影响。
　　从 4个产地的知母药材含量测定结果看出 ,采用改进后
方法提取菝葜皂苷元 , 可以更好地反映药材中菝葜皂苷元的
真实含量。
[ 参 考 文 献]
[ 1] 　中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[ S] .
北京:化学工业出版社 , 2005:148.
[ 2] 　陈万生 , 刘垣升 , 乔传卓 , 等.不同产地知母的化学成分及萨
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[ 3] 　沙东旭 , 陈桂范 , 张满来.高效液相色谱-蒸发光散射检测法测
定知母中菝葜皂苷元的含量[ J] .药物分析杂志 , 2005 , 25:
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[ 4] 　廖洪利 , 王伟新 , 赵福胜 , 等.知母化学成分研究进展[ J] .药
学实践杂志 , 2005 , 23:12-14.
[ 5] 　韩丽萍 , 赵树进 , 李俭洪.大孔树脂法提取知母总皂苷[ J] .中
药材 , 2004, 27:288-289.
[ 收稿日期] 　2006-04-21　　 [ 修回日期] 　2006-05-25
[ 本文编辑] 　尹　茶