全 文 ：收稿日期:2006-05-22
作者简介:廖保宁(1983-),男 , 现就读于右江民族医学院临床
医学系本科。通讯联系人:黄锁义。
黄鹌菜中总黄酮的提取及对羟自由基的清除作用
廖保宁1 ,张婧萱2 ,黄锁义3
(右江民族医学院:1.02级临床医学本科班;2.03级检验医学本科班;3.化学教研室:广西 百
色　533000)
摘要:目的:为充分利用黄鹌菜植物资源 , 避免资源的浪费 , 探讨黄鹌菜中总黄酮的提取 、鉴别及对羟自由基
清除作用。方法:采用超声波乙醇浸提法从黄鹌菜中提取黄酮类物质 ,对所提取的黄酮类物质进行验证 , 并
用分光光度法测定含量 , 用黄鹌菜中总黄酮对羟自由基清除作用进行试验。结果:测得样品中总黄酮的含量
C=0.5267mg/ ml ,回收率为 100.6%, 其纯度和产率均较高。结论:该方法采用全物理过程 , 无任何污染 , 是
提取黄鹌菜中黄酮类物质的有效途径。黄鹌菜中总黄酮提取液对 Fenton 体系产生的·OH 自由基有很好的清
除作用。
关键词:超声波提取;黄鹌菜;总黄酮;鉴别;自由基;清除
中图分类号:O624.42+1　文献标识码:A 　文章编号:1005-5320(2006)06-0050-02
Extracting of total flavanone from youngia japonica and its effects on scavenging of hydroxyl radicals
LIAO Bao-ning1 ,ZHANG Jing-xuan2 , HUANGSuo-yi3
(Youjiang Medical College for Nationalities:1.Grade 02 ,Department of Clinical Medicine;2.Grade 03 ,Depart-
ment of Laboratory Medicine;3.Department of Chemistry ::Baise Guangx i 533000 , China)
Abstract:Objective:In o rder to make use of the resources of youngia japonica , avoid wasting and approach the extraction of total fla-
vanone of youngia japonica and its effects on scavenging of hydroxyl radicals.Methods:The flavonids w ere ex tracted by ethanol as the
solvent from young ia japonica w ith ultrasonic wave and ethanol extraction.Using spectrophotometry to ex tract and check the flavanone of
youngia japonica.The effect of ex tracts on Mentha haplocalyx Briq scavenging of hydroxyl radicals w as studied.Results:By this method
getting the density of the total flavanone of youngia japonica is C=0.5267 mg/ml and the rate of recovery is100.6%.Conclusion:This
tex t provides the ex traction and purify ing methods to get the outcome and the purity of the flavanone are all very high .This method is a
purely physical process and has no t any pollution.I t is an ideal way to ex tract the flavanone of youngia japonica.Total Flavanone from
youngia japonica have effects on scavenging of hydroxy l radicals.
Key Words:ultrasonic wave treatment;youngia japonica;total flavanone;identification;hydroxy l radical;scavenging
　　黄鹌菜[ Youngia japonica(L.)DC.] ,为菊科植物黄鹌菜
的全草 ,别名又叫野芥菜 。一年生或二年生草本 ,高约 20 ～
80 cm ,花期 4 ～ 5月 。生于路边荒野 ,分布于我国长江以南
各地及陕西 ,中国黄鹌菜属一新种[ 1] ,性味甘、微苦 ,凉 、清
热 、解毒 、消肿 、止痛 ,可用于治感冒 、咽痛 、乳腺炎 、结膜炎 、
疮疖、尿路感染 、白带 、风湿性关节炎[ 2] 。
近年来 ,超声技术应用于提取植物中的生物碱 、苷类、生
物活性物质 、动物组织浆的毒质等研究已有报道[ 3 , 4] ,很多研
究表明 ,利用超声波产生的强烈振动、高的加速度 、强烈的空
化效应 、搅拌作用等 ,可加速植物材料中的有效成分进入溶
剂 ,从而增加有效成分的提取率 ,缩短提取时间 ,并且还可避
免高温对提取成分的影响[ 4] 。但超声技术应用于提取黄鹌
菜中黄酮类物质的研究尚未见报道 ,为此 ,本实验报道用超
声波乙醇浸提法提取黄鹌菜总黄酮 ,鉴别及其提取物总黄酮
对羟自由基的清除作用研究 ,现报道如下 。
材料与方法
1　仪　器
KQ5200DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限
公司);722可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司);
ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂);SHB-II I
循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)。
2　试　剂
95%乙醇;无水乙醇 、亚硝酸钠 、硝酸铝 、氢氧化钠 、三氯
化铝、盐酸 、氨水 、冰醋酸 、乙酸乙酯 、乙酸镁 、甲醇 、镁粉 、正
丁醇 、芦丁标准品(中国药品生物制品检定所);30%双氧水 、
硫酸亚铁 、水杨酸(以上试剂均为 AR)。
新鲜黄鹌菜(采自广西百色市)。
3　方　法
3.1　总黄酮成分提取　取新鲜黄鹌菜 ,烘干 ,粉碎 。称取黄
鹌菜粉末 6g ,加 80 ml 95%乙醇 ,超声波提取 2.5 h ,抽滤 。
滤渣再加 80 ml 95 %乙醇 ,超声波提取 2.5 h ,抽滤 ,合并两
次滤液 ,浓缩至滤液仅剩 20 ml左右为止 ,放置 100 ml容量
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瓶中 ,用 60%乙醇稀释至刻度 ,得样品液 。
3.2　测定方法依据　以芦丁为对照品测定黄鹌菜中总黄酮
的含量 ,加入铝离子试剂 ,同时控制适宜 pH值 ,使黄酮化合
物与铝盐形成络合物 ,在可见光区能获得稳定的特征吸收
峰 。
结果与讨论
1　定量实验—总黄酮的含量测定
1.1　波长的选择　取样品液适量 ,在 0.30 ml 5%亚硝酸钠
溶液存在的碱性条件下 ,经硝酸铝显色后 ,以试剂为空白参
比液在 420 ～ 700 nm波长范围测定络合物的吸光度 ,络合物
于 510 nm波长处有最大吸收 ,故测定时选用此波长 。
1.2　标准曲线的绘制 　分别精密吸取芦丁对照液(0.10
mg/ml)0.00 ,0.50 , 1.00 , 2.00 , 3.00 , 4.00 , 5.00 ml于 10.00
ml容量瓶中 ,分别加入 5%亚硝酸钠溶液 0.30 ml ,摇匀 ,静
置 6 min;再加 10%硝酸铝溶液 0.30 ml ,摇匀 ,静置 6 min;再
加 4%氢氧化钠溶液 4.00 ml , 用 60%乙醇稀释至刻度 ,摇
匀 ,静置 12 min ,以试剂作空白 ,于 510 nm处测吸光度 。吸
光度测定结果见表 1 。
表 1　紫外可见分光光度计测定芦丁对照液吸光度
C(mg/ml)0.00 0.005 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05
吸光度 0.00 0.074 0.095 0.121 0.220 0.276 0.341
　　根据上表得回归方程:A =3.000×10-2 +6.000C , r =
1.0000。
1.3　提取物含量的测定　精密吸取样品液 0.50 ml ,置 10
ml容量瓶 ,按标准曲线的制备方法测定吸光度 A=0.188 ,根
据回归方程:A =3.000×10-2+6.000C ,计算样品中总黄酮
的含量 C=0.5267 mg/ml。
1.4　回收实验　精密量取样品液 1.00 ml ,加入标准芦丁对
照品 1.00 ml(0.10 mg/ml),同前样品测定方法操作测定吸
光度 ,求出回收率为 100.6% 。
2　定性实验—总黄酮的鉴别
2.1　颜色反应　紫外光下呈色反应:取该样品溶液点在滤
纸上 ,在可见光下呈灰黄色 ,在紫外光下呈灰褐色并有荧光
斑点。浓氨水反应:取该样品溶液点在滤纸上 ,将滤纸在氨
水上方熏 0.5 min ,立即在紫外光下观察 ,呈极明显的黄褐色
荧光斑点 。三氯化铝反应:取样品溶液点在滤纸上 ,滴加 1%
三氯化铝乙醇溶液 ,吹干 。在可见光下呈灰黄色 ,在紫外光
下呈黄色荧光斑点 。乙酸镁反应:取样品溶液点在滤纸上 ,
滴加 1%乙酸镁甲醇溶液 ,吹干 ,紫外光下呈黄色斑点 。盐酸
—镁粉反应:取乙醇提取液 1 ml于试管中加镁粉 ,再加入浓
盐酸数滴(1次加入),在泡沫处呈紫红色 。
2.2　纸层析　取样品溶液 10μl点在滤纸上 。用正丁醇∶醋
酸∶水=4∶1∶5(体积比)为展开剂 ,上行展开 5 h ,取出晾干 。
喷 1%氯化铝乙醇溶液 ,吹干后于紫外光下 ,可见荧光斑点 。
3　总黄酮提取物对·OH清除作用
参照 Fenton 反应的方法建立反应体系模型[ 5] , 利用
H2O2 与 Fe2+混合产生·OH ,但由于·OH具有很高的反应活
性 ,存活时间短 ,若在反应体系中加入水杨酸 ,就能有效地捕
捉·OH ,并产生有色产物 。该产物在 510 nm 处有强吸收 ,若
在此反应体系中加入具有清除·OH功能的被测物 ,便会与水
杨酸竞争·OH ,从而使有色产物生成量减少 ,采用固定反应
时间法 , 在相同体积的反应体系(8.8 mmol/LH2O21 ml , 9
mmol/LFe2+l ml , 9 mmol/L 1 ml水杨酸—乙醇溶液)加入一
系列不同浓度的黄鹌菜总黄酮提取液 ,并以蒸馏水为参比 ,
与试剂空白液比较 ,在 510 nm处测量各浓度下的吸光度 ,便
能测定被测物(总黄酮)对·OH的清除作用 ,其清除率计算公
式:
清除率(%)=A0-Ax
A
×100
以实验的提取液总黄酮作为样品 ,分别取不同体积的样
品定容到 10m1分别测其对·OH的清除作用 。结果可看出:
随着黄鹌菜总黄酮提取液对由 Fenton体系产生的·OH 有一
定的清除作用 ,随着黄鹌菜总黄酮提取液浓度的增加 ,对·
OH自由基的清除能力也增强 ,说明当黄酮类物质的浓度增
加时 ,其清除率也增大 。
4　讨　论
实验结果表明 , 本实验方法工艺简单 , 回收率为
100.6%。利用本实验所提供的超声波提取 、纯化方法而得
到的黄酮类物质其纯度较高 。超声波可以强化乙醇浸提法 ,
达到省时 、高效 、节能的目的 ,此方法采用全物理过程 ,无任
何污染 ,是一条理想的提取黄酮类物质的途径 ,具有广阔的
应用前景 。
黄酮类化合物是一大类天然产物 ,广泛存在于植物界 ,
是许多中草药的有效成分 ,具有很高的药用价值 。在自然界
中最常见的是黄酮和黄酮醇 ,其它包括双氢黄(醇)、异黄酮 、
双黄酮 、黄烷醇 、查尔酮 、橙酮 、花色苷及新黄酮类等[ 6] 。天
然来源的生物黄酮分子量小 ,能被人体迅速吸收 ,能通过血
脑屏障 ,能进入脂肪组织 ,进而体现出如下功能:消除疲劳 、
保护血管 、防动脉硬化 、扩张毛细血管 、疏通微循环 、抗脂肪
氧化 、抗衰老 、活化大脑及其他脏器细胞的功能 。
黄酮类化合物具有抗癌 、抗肿瘤 、抗心脑血管疾病 、抗炎
镇痛 、免疫调节 、降血糖 、治疗骨质疏松 、抑菌抗病毒 、抗氧
化 、抗衰老 、抗辐射等作用[ 7 , 8] 。本实验结果表明 ,黄鹌菜中
含有较为丰富的黄酮 ,其提取物总黄酮对羟自由基具有很好
的清除作用 。因此 ,黄鹌菜具有广泛开发和利用价值 ,值得
综合利用 。
参考文献:
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及其含量测定[ J] .右江民族医学院学报 , 2005 , 27(6):
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