全 文 ：贵州 科 学 一 ,
七
贵州地区蜘蛛抱蛋属植物 区序列分析及其
亲缘关系研究
黄 海 ` 王安仙 , 刘
医学检验系 ,贵阳
张玛源
贵阳医学院
杨 `
以叉 贵阳中医学院
何顺志 “
药学系 ,贵阳
摘 要 从贵州不同地区采集的 株蜘蛛艳蛋属植物 ,采用直接测序对其核糖体 内间隔区 序列进行测定 ,用于分
析蜘蛛艳蛋属植物间的亲缘关系。测序结果提示该植物的 巧 区域的 在 一 之间 ,有 个变化位 ,氛 ,提
示可用于对形状相似的蜘蛛抱蛋属植物进行分子生物学分类和用于系统发育分析 。
关键词 蜘蛛抱蛋属 , 序列 ,百合科
中图分类号 叭 十 文献标识码 文章编号 侧刀一 沮一仪日 一
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蜘蛛抱蛋属 记 一 属于广泛的
百合科 ,主要分布于亚洲东部热带和亚热带地区
郎楷永等 , 。该属植物为多年生草花本 ,花
单生 ,总花梗常很短 ,单生或簇生于甸甸 、具密节的
根状茎上 ,花出现于地面 ,多数小 ,很不起眼 ,易被它
物掩盖 ,花期短 一 个月 苏何玲等 , ,带
花标本采集困难不易分类 郎楷永等 , 唐绍清
等 , 。因而采用分子生物学方法进行分类 ,可
收稿 日期 加 一 一 修回日期 一 一
基金项目 国家自然科学基金项目 筑科农
。
作者简介 黄海 一 男 ,副教授 ,博士 ,主要从事分子生物学及其在
植物基因组中的研究。 一 脚 。 。
通讯作者 何顺志 ,男 ,教授 。 一 司 沼 。
作为现有分类方法的一种必要补充 。在 基因
中 , 和 基 因间隔序列称为
,其结构为 巧 一
一 。组成该片段的不同部分 、
和 序列变异差别较大 , 最为保守 ,
的识别效果好于 宁淑萍等 , 。本研
究用采集自贵州省不同地区的 株蜘蛛抱蛋属植
物 ,提取基因组 扩增核糖体 中的内转录
间隔区 序列 ,用 区探讨相互间的亲缘关
系。为蜘蛛抱蛋属植物进行分类 ,提供分子生物学
方面的依据 。
2 期 黄 海 ,等 贵州地区蜘蛛抱蛋属植物 巧 区序列分析及其亲缘关系研究
材料与方法 结 果
植物材料与试剂及仪器
本研究所用的蜘蛛抱蛋属植物由贵阳中医
学院何顺志教授采集和鉴定 。一 ℃保存待用 。
株蜘蛛抱蛋— 分别采自贵州省的安龙县
号 、沿河县 护滋
加 号 、荔波县 胡记
林 — 号 、开阳县
通胡记 肠
号 和平塘县 油 娜 “ , ·
号 。
乙醇 、醋酸钠 、植物基因组 提取试
剂盒 天根生化科技 北京 有限公司 等 。
型 扩增仪 、 一
凝胶成像分析系统 。
方法
全基因组 提取 将新鲜冷冻的嫩叶
或干重组织 放人已高温灭菌并冷冻
过的研钵中 ,倒人液氮 ,研磨成粉末状 ,移人 而
管中 ,按植物基因组 提取试剂盒操作提取
出 后 ,室温下晾干后加 , ℃水浴
一 溶解 ,其间颠倒混匀数次助溶 ,获得溶液 。
巧 区的 扩增 飞 区用引物
一 一 和
一 明叮 一
, , ,按程序 ℃预变性
接 ℃ , ℃ , ℃ 。
个循环 最后 ℃保温 进行扩增 。用
琼脂糖凝胶电泳检测 扩增结果 ,其 目的条带在
附近 。
产物直接测序 将扩增的 产物加
两倍体积的的冰无水乙醇 ,沉淀后离心 ,洗涤 次作
为测序模板送出进行测序分析 。
数据分析 测序结果用 软件
, ,
。 进行在线分析确认 。根据已报道
的序列资料 确定核糖体 内
转录间隔区 巧 界限 ,对序列比对和构建相互简约
树 ,采用 软件 刀 灯
犷 完成 。
, 序列的扩增
蜘蛛抱蛋属植物
的琼脂糖凝胶上电泳
序列经 扩增后在
结果 ,见图 。
图 , 序列扩增结果
区的碱基序列比对
测定的 条 飞 序列采角 软件比
对 ,该序列富含 含量 ,有 个碱基变化位点 ,
序列出现有缺失差异 ,其中序列 有 个 为最
多 ,所列序列见图 。
蜘蛛抱蛋属植物的 序列的系统发育分析
对 株蜘蛛抱蛋属植物样品测序结果排列后 ,
选用 区 一 用 进行系统发
育分析见图 。结果表明 株蜘蛛抱蛋植物的璐
序列之间的亲缘关系较近 。
讨论
蜘蛛抱蛋在中国南方分布非常广泛 ,由于环境
的差异和变迁而引起不同变异 ,这种变异使蜘蛛抱
蛋积累了广泛的遗传多样性 ,形成了不同的表型 ,在
贵州省不同地区的蜘蛛抱蛋外观差异较大 。我们对
采集的 株采用 扩增后直接测定 玲 序列 ,截
取 进行比较 ,该序列富含 含量
,在该区域有 个变化位点 ,说明蜘蛛抱
蛋植物的 飞 区是一个碱基高变区域 ,这与以往报
道相符 唐绍清等 , 。
本研究表明 ,蜘蛛抱蛋植物在 个不同采集点
之间的 序列存在差异 ,特别是在 巧 区域之间
的变异引起序列碱基的差异 ,提示 序列能够为
蜘蛛抱蛋属植物的分类和鉴定提供较为丰富的信息
位点 ,适用于种间系统发育分析 。而对于同属一种
采自不同地点的蜘蛛抱蛋在 仆 序列存在差异 ,也
52 贵 时 科 管 卷
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图 种蜘蛛抱蛋植物的 序列比较
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图 株蜘蛛抱蛋植物样品基于
序列之间的系统发育树
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有待进一步的研究 。
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【附中文参考文献 〕
郎楷永 ,李光照 ,刘演 ,韦毅刚 ,王任翔 , 中国种蜘蛛抱
蛋属植物的分类和植物地理的研究 〔 〕植物分类学报 ,
一
宁淑萍 ,颜海飞 ,郝刚 ,葛学军 , 植物 条形码研究
进展〔 」生物多样性 , 一
苏何玲 ,唐绍清 ,李焰斌 ,吕建珍 , 中国种蜘蛛抱蛋属植
物总 的抽提与纯化 〔 」广西园艺 , 一
唐绍清 ,苏何玲 ,李光照 , 种蜘蛛抱蛋属植物 仆 区序
列及其系统学意义 【〕广西师范大学学报 自然科学
版 , 一