全 文 ：现代药物与临床 Drugs & Clinic 第 29 卷 第 7 期 2014 年 7 月 ·737·
HPLC- CAD 法测定盐制前后知母中知母皂苷 BⅡ和菝葜皂苷元
吴 莹 1, 2, 3，高 慧 1, 2, 3*，宋泽璧 1, 2, 3
1. 辽宁中医药大学 药学院，辽宁 大连 116600
2. 国家中医药管理局中药炮制原理解析重点研究室，辽宁 大连 116600
3. 辽宁省中药炮制工程技术研究中心，辽宁 大连 116600
摘 要：目的 利用 HPLC–电雾式检测器（charged aerosol detector，CAD）联用技术建立知母中知母皂苷 BⅡ和菝葜皂苷
元的测定方法，并比较知母盐制前后两种成分的变化。方法 知母皂苷 BⅡ以乙腈–水（25∶75）为流动相，进样量为 10 μL；
菝葜皂苷元以甲醇–水（95∶5）为流动相，进样量为 20 μL；其他色谱条件均采用 Thermo C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），
体积流量为 1 mL/min，柱温为 30 ℃；Corona 参数：氮气压力为 241.3 kPa，Filter：High，Range：200 pA。结果 知母皂
苷 BⅡ在 0.305～4.880 μg 线性关系良好，r＝0.999 4，平均回收率为 99.1%，RSD 值为 1.2%；菝葜皂苷元在 0.490～7.840 μg
线性关系良好，r＝0.999 1，平均回收率为 98.0%，RSD 值为 1.3%。知母中知母皂苷 BⅡ为 3.16%～5.92%，盐制后为 4.15%～
7.20%；知母中菝葜皂苷元为 0.42%～1.39%，盐制后为 0.52%～1.54%。结论 CAD 检测器具有较为平稳的基线和较高的灵
敏度，更加适用于知母皂苷类及含有较弱或无紫外吸收成分的测定，知母盐制后知母皂苷 BⅡ和菝葜皂苷元的量均有所升高。
关键词：知母；盐知母；知母皂苷 BⅡ；菝葜皂苷元；HPLC-CAD
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：1674 - 5515(2014)07 - 0737 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.1674-5515.2014.07.009
Determination of timosaponin BⅡand sarsasapogenin in Anemarrhenae Rhizoma
before and after processing with salt-water by HPLC-CAD
WU Ying1, 2, 3 , GAO Hui1, 2, 3, SONG Ze-bi1, 2, 3
1. College of Pharmacy, Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Dalian 116600, China
2. Key Laboratory of Processing Theory Analysis of State Administration of Traditional Chinese Medicine, Dalian 116600, China
3. Engineering Technology Research Center of Traditional Chinese Medicine processing of Liaoning Province, Dalian 116600, China
Abstract: Objective To establish a method for the determination of timosaponin BⅡ and sarsasapogenin in Anemarrhenae Rhizoma
by HPLC with the charged aerosol detector (CAD), and to compare the contents of the two components in Anemarrhenae Rhizoma
before and after processing with salt-water. Methods Analysis was performed on Thermo C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm).
Acetonitrile – water (25∶75) was as the mobile phase for timosaponin BⅡ with the injection volume of 10 μL, and methanol – water
(95∶5) as the mobile phase for sarsasapogenin with injection volume of 20 μL. The other chromatographic conditions were : flow rate
of 1 mL/min and column temperature of 30 ℃. The Corona parameters were as follows: nitrogen pressure was 241.3 kPa, high filter,
and range of 200 pA. Results The linear range of timosaponin BⅡ was 0.305 — 4.880 μg (r = 0.999 4), and the average recovery
rate was 99.1% (RSD = 1.2%). The linear range of sarsasapogenin was 0.490 — 7.840 μg (r = 0.999 1), and the average recovery rate
was 98% (RSD = 1.3%). The contents of timosaponin BII were obtained over 3.16% — 5.92% for Anemarrhenae Rhizoma and 4.15%
— 7.20% after processing; The contents of sarsasapogenin were obtained over 0.42% — 1.39% for Anemarrhenae Rhizoma and 0.52%
— 1.54% after processing. Conclusion CAD has some advantages in saponins detection of Anemarrhenae Rhizoma such as its steady
baseline and good sensitivity. CAD is the most favorable detector for the determination of saponins or other constituents without UV
absorption, and the contents of timosaponin BⅡ and sarsasapogenin increase after processing.
Key words: Anemarrhenae Rhizoma; processed with salt-water; timosaponin BⅡ; sarsasapogenin; HPLC-CAD

收稿日期：2014-05-19
基金项目：国家自然科学基金资助项目（81102810）；教育部高等学校博士学科点专项科研基金资助项目（20012133120009）
作者简介：吴 莹（1987—），女，硕士，从事中药炮制原理研究。Tel: (0411) 87586115 E-mail: 823209547@qq.com
*通信作者 高 慧，副教授，博士，从事中药炮制原理研究。Tel: (0411) 87586011 E-mail: gaohutcm@163.com
现代药物与临床 Drugs & Clinic 第 29 卷 第 7 期 2014 年 7 月 ·738·
知母为百合科知母属植物知母 Anemarrhena
asphodeloides Bunge 的干燥根茎，始载于《神农本
草经》，具有清热泻火、滋阴润燥的功效，临床常用
于外感热病、高热烦渴、肺热燥咳、骨蒸潮热等
症[1]。主产于河北，传统认为河北易县西陵一带所
产品质最佳，称之为西陵知母。历版《中国药典》
收载知母的品种均为生知母、盐知母。知母皂苷是
知母中的活性成分，知母皂苷 BⅡ和菝葜皂苷元分
别是《中国药典》2010、2005 年版知母测定的指标
性成分，因属甾体皂苷，无紫外吸收，故均采用蒸
发光散射检测器（ELSD）。ELSD 的特点是散射光
的对数响应值与组分的质量的对数呈线性关系，但
此对数关系变异性较大，且其灵敏度较低，最低检
测限在 50～100 ng。电雾式检测器（charged aerosol
detection，CAD）与 ELSD 比较，具有更高的灵敏
度，对无紫外吸收化合物的检测，其最低检测限达
到了 1 ng[2]，更适用于含有较弱或无紫外吸收的皂
苷类成分分析。本实验采用 HPLC-CAD 法测定不
同产地的知母和盐知母中知母皂苷 BⅡ和菝葜皂苷
元，并比较知母盐炙前后变化，为知母饮片的质量
控制提供实验依据。
1 仪器与试药
LC—20AB 型高效液相色谱仪（日本岛津公
司），配置自动进样器、PDA 检测器；Corona 电雾
式检测器（美国 ESA 公司）；KQ—250DB 型数控超
声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；电热恒温
水浴锅（北京市长风仪器仪表公司）；Mettler AE240
型十万分之一分析天平（瑞士 Mettler）；FA1004B
电子天平（上海精密科学仪器有限公司）。
知母皂苷 BⅡ对照品（质量分数≥98%，批号
Z08-110523）购自江西本草天工科技责任有限公司；
菝葜皂苷元对照品（质量分数≥ 98%，批号
110744-200509）购自中国食品药品检定研究院。8
个不同产地知母药材见表 1，经辽宁中医药大学翟
延 君 教 授 鉴 定 为 百 合 科 知 母 属 植 物 知 母
Anemarrhena asphodeloides Bunge 的干燥根茎。甲
醇、乙腈为色谱纯，娃哈哈纯净水，其余试剂均为
分析纯。

表 1 不同产地的知母药材样品
Table 1 Samples of Anemarrhenae Rhizoma from different habitats
编号 产 地 备注
1 河北省易县大华龙乡 采于 2013 年 3 月
2 河北省易县西陵太和庄 采于 2013 年 10 月
3 河北省易县西陵龙泉庄 采于 2013 年 10 月
4 河北省易县西陵龙泉庄 采于 2013 年 10 月
5 山西省 散货，购于 2010 年 9 月
6 四川省 购自四川新荷花中药饮片有限公司（批号 1204167）
7 安徽省亳州市 散货，购于 2010 年 9 月
8 内蒙古 散货，购于 2010 年 9 月

2 方法与结果
2.1 盐知母的制备
按前期优选的炮制工艺自行炮制[3]。100 g 知母
饮片加入 30 mL 盐水（含 3 g 食盐）拌匀润透，在
150～160 ℃炒制 8 min，得盐知母，收率为 98%。
2.2 知母皂苷 BⅡ的测定
2.2.1 色谱条件 Thermo C18 柱（250 mm×4.6
mm，5 μm），乙腈–水（25∶75）为流动相，体积
流量为 1 mL/min，进样量为 10 μL，柱温为 30℃；
Corona 参数：氮气压力为 241.3 kPa，Filter：High，
Range：200 pA。
2.2.2 对照品溶液的制备 取知母皂苷 BⅡ对照品
适量，精密称定，加入 30%丙酮制成 4.88 mg/mL
对照品溶液，备用。
2.2.3 供试品溶液的制备 取样品粉末 0.5 g（过 4
号筛），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 30%
丙酮 25 mL，称定质量，超声处理（功率 400 W，
频率 40 Hz）30 min，取出，放冷，再称定质量，用
30%丙酮补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，
即得。
2.2.4 线性关系考察 精密吸取 4.88 mg/mL 知母
皂苷 BⅡ对照品溶液，用 30%丙酮逐级稀释成 30.5、
现代药物与临床 Drugs & Clinic 第 29 卷 第 7 期 2014 年 7 月 ·739·
61、122、244、488 μg/mL 溶液，进样分析，测定
色谱峰面积。以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐
标，绘制标准曲线，计算回归方程，得回归方程
Y＝145 105 X＋459 248，r＝0.999 4。结果表明，知
母皂苷BⅡ在 0.305～4.880 μg与峰面积呈良好的线
性关系。
2.2.5 精密度试验 精密吸取 4.88 mg/mL 知母皂
苷 BⅡ对照品溶液，连续进样 6 次，测定知母皂苷
BⅡ峰面积，计算得其 RSD 值为 0.5%。
2.2.6 稳定性试验 取生知母（样品 1）供试品溶
液，每次进样 10 μL，分别在 0、1、2、4、6、8、
10 h 进样分析，测定知母皂苷 BⅡ色谱峰面积，计
算得其 RSD 值为 1.45%。结果表明供试品溶液在
10 h 内稳定性良好。
2.2.7 重复性试验 取生知母（样品 1）6 份，分别
制备供试品溶液，按上述色谱条件进样测定知母皂
苷 BⅡ色谱峰面积，计算知母皂苷 BⅡ质量分数的
RSD 值为 1.2%。
2.2.8 加样回收率试验 取生知母粉末（样品 1）
0.25 g，平行 6 份，精密称定，分别精密加入 0.455
mg/mL 知母皂苷 BⅡ对照品溶液 20 mL，制备供试
品溶液，进样分析，测定知母皂苷 BⅡ峰面积，计
算回收率，结果平均回收率为 99.1%，RSD 值为 1.2%。
2.2.9 样品测定 取不同产地的生、盐知母样品，
分别制备供试品溶液，进样测定，外标法计算生、
盐知母中知母皂苷 BⅡ的质量分数，结果见表 2，
色谱图见图 1。
表 2 不同产地生、盐知母中知母皂苷 BⅡ和菝葜皂苷元的
测定结果（n=2）
Table 2 Determination of tmosaponin BⅡ and sarsasapogenin
in Anemarrhenae Rhizoma and Anemarrhenae
Rhizoma processed with salt-water from different
habitats (n=2)
知母皂苷 BⅡ/% 菝葜皂苷元/% 编号
生知母 盐知母 生知母 盐知母
1 3.71 5.32 1.14 1.36
2 4.20 5.83 1.21 1.39
3 5.75 7.11 1.34 1.52
4 5.92 7.20 1.39 1.54
5 3.34 4.92 0.43 0.61
6 3.16 4.15 0.44 0.58
7 3.22 4.56 0.42 0.52
8 3.21 4.34 0.46 0.57

1-知母皂苷 BⅡ
1- timosaponin BⅡ
图 1 知母皂苷 BⅡ对照品（A）、生知母（B）和盐知母（C）
的 HPLC-CAD 色谱图
Fig. 1 HPLC-CAD chromatograms of timosaponin BⅡ
reference substance (A), Anemarrhenae Rhizoma
sample (B), and Anemarrhenae Rhizoma processing
with salt-water sample (C)
2.3 菝葜皂苷元的测定
2.3.1 色谱条件 Diamonsil C18 柱（250 mm×4.6
mm，5 μm），甲醇–水（95∶5）为流动相，体积
流量为 1 mL/min，进样量为 20 μL，柱温为 30℃；
Corona 参数：氮气压力为 241.3 kPa，Filter：High，
Range：200 pA。
2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取菝葜皂苷元对
照品适量，加甲醇制成 3.92 mg/mL 对照品溶液，
备用。
2.3.3 供试品溶液的制备 取样品粉末（过三号筛）
0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇
25 mL，称定质量，浸泡过夜，超声处理（功率
200 W，频率 30 kHz）40 min，放冷，再称定质量，
用乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过。精密量取续
滤液 10 mL，蒸干，加水 10 mL，盐酸 1 mL，加热
回流 2 h，取出，冷至室温，边振摇边滴加 40%氢
氧化钠溶液至溶液颜色由橙黄突变为橙红，用三氯
甲烷振摇提取 2 次，每次 30 mL，合并三氯甲烷液，
蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至 10 mL 量瓶中，并






A
1
1
1
C
B
0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5
t / min
现代药物与临床 Drugs & Clinic 第 29 卷 第 7 期 2014 年 7 月 ·740·
稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3.4 线性关系考察 精密吸取菝葜皂苷元对照品
溶液，逐级用甲醇稀释成 24.5、49、98、196、392
μg/mL 溶液，进样分析，测定色谱峰面积。以质量
浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，
计算回归方程，得回归方程 Y＝1 994 152.3 X＋
17 035.6，r＝ 0.999 1。结果表明，菝葜皂苷元在
0.490～7.840 μg 与峰面积呈良好的线性关系。
2.3.5 精密度试验 精密吸取 3.92 mg/mL 菝葜皂
苷元对照品溶液，按照上述色谱条件，连续进样 6
次，测定菝葜皂苷元峰面积，计算得其 RSD 值为
0.79%。
2.3.6 稳定性试验 取生知母（样品 1）供试品溶
液，每次进样 10 μL，分别在 0、1、2、4、6、8、
10 h 进样分析，测定菝葜皂苷元色谱峰面积，计算
得其 RSD 值为 1.3%。结果表明供试品溶液在 10 h
内稳定性良好。
2.3.7 重复性试验 取生知母（样品 1）6 份，分别
制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算菝葜
皂苷元质量分数的 RSD 值为 1.2%。
2.3.8 加样回收率试验 取生知母粉末（样品 1）
0.25 g，平行 6 份，精密称定，分别精密加入 0.350
mg/mL 菝葜皂苷元对照品溶液 8 mL，制备供试品
溶液并测定，计算回收率，结果平均回收率为
98.0%，RSD 值为 1.3%。
2.3.9 样品测定 取不同产地的生、盐知母样品，
分别制备供试品溶液，进样测定，外标法计算生、
盐知母中菝葜皂苷元的质量分数，结果见表 2，色
谱图见图 2。
可见不同产地知母药材中知母皂苷 BⅡ质量分
数为 3.16%～5.92%，盐制后质量分数为 4.15%～
7.20%；菝葜皂苷元质量分数为 0.42%～1.39%，盐
制后质量分数为 0.52%～1.54%。表明盐制后知母皂
苷 BⅡ和菝葜皂苷元质量分数均有所升高。
结果表明，河北易县一带产知母，即“西陵知
母”中知母皂苷 BⅡ和菝葜皂苷元的量明显高于山
西、四川、安徽和内蒙等产地，可见知母皂苷 B
Ⅱ和菝葜皂苷元的量与知母药材的道地性呈现正
相关。
3 讨论
电雾式检测器作为一种新型通用检测器，其检
测信号不依赖于被检测物质的化学结构，对不同结
构的化合物有统一的响应[4]，已经用于皂苷类、糖、

1-菝葜皂苷元
1-sarsasapogenin
图 2 菝葜皂苷元对照品（A）、生知母（B）和盐知母（C）
的 HPLC-CAD 色谱图
Fig. 2 HPLC-CAD chromatograms of sarsasapogenin
reference substance (A), Anemarrhenae Rhizoma
sample (B), and Anemarrhenae Rhizoma processing
with salt-water sample (C)
脂质和多肽等样品的检测[5-10]。文献报道[5]，通过对
皂苷类成分的检测分析，与紫外和蒸发光散射检测
器相比，电雾式检测器更加灵敏、准确和稳定。本
实验建立 HPLC-CAD 法测定知母中知母皂苷 BⅡ
和菝葜皂苷元，为知母及其他含有较弱或无紫外吸
收成分药材的质量控制和分析研究提供参考。实验
结果表明，得到的知母皂苷 BⅡ和菝葜皂苷元标准
曲线，CAD 检测器的响应值与组分的质量呈线性关
系，不同于蒸发光散射检测器响应值与组分质量的
对数关系，且更便于计算。
知母皂苷 BⅡ是《中国药典》2010 年版规定的
指标性成分，具有抗抑郁[11]、保护神经细胞损伤作
用[12]，其快速制备方法已有报道[13]。知母中所含甾
体皂苷水解后的苷元主要是菝葜皂苷元，能间接反
映总皂苷的量。因此，测定知母中这 2 种皂苷更能
反映药材的真实质量状况。知母盐制后这 2 种皂苷
量均增加，可能为盐知母滋阴降火作用增强的物质
基础之一。推测知母在炮制过程中受辅料和加热等
因素影响，其他皂苷发生水解，转化成知母皂苷 B
Ⅱ和菝葜皂苷元，具体的转化机制还需进一步研究。






A
1
1
1 C
B
0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0
t / min
现代药物与临床 Drugs & Clinic 第 29 卷 第 7 期 2014 年 7 月 ·741·
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