全 文 ：文山红柱兰组培技术研究＊
徐凌彦1 , 王玉英2 , 李枝林 1
(1.云南农业大学园林园艺学院 , 云南　昆明 650201; 2.云南农业职业技术学院 , 云南　昆明 650212)
摘要:以文山红柱兰种子为外植体 , 进行了种子无菌萌发 , 球茎丛生芽继代增殖 、 无根苗生根培养等的组培技
术研究。其研究结果表明:在 1/2 MS+0.2 mg/LBA+0.2 mg/LNAA的培养基上文山红柱兰种子的萌发效果最
好;在 1/2 MS+BA1.5 mg/L+NAA0.2 mg/L+80 g/L香蕉泥 +1 g/L花宝 4号培养基上进行增殖培养效果较好 ,
在 1/2 MS+0.6mg/LNAA+0.2 mg/LBA+0.3 %活性炭培养基的生根培养效果较好。苗高 6 ～ 8 cm时可出瓶炼
苗。
关键词:文山红柱兰;组培技术;种子外植体
中图分类号:S68　　文献标识码:A　　文章编号:1672-8246 (2008)03-0023-05
StudiesonTissueCultureTechniqueofCymbidiumwenshanense
XULing-yan1 , WANGYu-ying2 , LIZhi-lin1
(1.ColegeofHorticultureandLandscape, YunnanAgricultureUniversity, KunmingYunnan650201, P.R.China;
2.YunnanAgriculturalVocation-TechnicalColege, KunmingYunnan650212, P.R.China)
Abstract:Usingseedsasexplants, tissueculturetechniqueofC.wenshanenseincludingsterileseedgermination,
regenerationandrootingwasexperimentedandstudied.Theexperimentresultsshowedthatthesterileseedgermina-
tionmediumwas1/2MS+0.2 mg/LBA+0.2mg/LNAA, themediumforregenerationwas1/2 MS+1.5mg/L
BA+0.2mg/LNAA+80g/Lmashedbanana+1g/LHuabaoNo.4, themediumforrootinducingwas1/2 MS+
0.6mg/LNAA+0.2mg/LBA+0.3 % AC.Thetissuecultureplantsof6 to8 cmhighcouldbetransplanted.
Keywords:Cymbidiumwenshanense;tissueculturetechnique;explant
文山红柱兰 (Cymbidiumwenshanense)[ 1]又名
彩蝶玉兰 , 是我国兰花专家吴应祥先生和刘方近年
发表的新种 , 因原产云南省文山县而得名 , 为我国
特有的兰花物种 。文山红柱兰是兰科兰属大花亚属
的一种多年生附生草本植物 , 主要分布在云南东南
部 , 越南北部 [ 2] 。文山红柱兰的叶片呈带状 , 叶
色浓绿稍带黄 、 厚而有光泽;花序斜出 , 有花 3 ～
10朵 , 由于其萼片外面为浅褐色 , 因此花蕾也呈
浅褐色 , 花径 6 ～ 9 cm, 花瓣白色 , 有不明显的淡
红褐色脉纹 , 唇瓣白色 , 有红褐色脉和斑点 , 盛花
期具有淡雅的清香 , 花期 1 ～ 3月[ 3] 。此种兰花由
于叶形飘逸带浓绿色 , 花朵硕大 , 色洁白淡雅 , 并
有淡淡的清香 , 而具有较好的市场开发前景 。
近十多年来 , 兰花的快繁技术发展较快 。目前
部分品种的培育已进入产业化生产阶段 , 已建立起
蝴蝶兰 (Phalaenopsisamabilis)[ 4] 、 大花 蕙 兰
(C.hybridium)[ 5 ～ 10] 、 墨兰 (C.sinense)[ 11]等的快
繁体系。植物的无性快繁技术 , 大大带动了兰花的
产业化生产 , 且对于抢救那些处于濒危的野生兰花
物种具有重大的作用[ 12] 。目前 , 已有 70个属的兰
花可采用离体培养方法扩繁其后代 [ 13] 。文山红柱
兰由于发现较晚 , 因此极少看到有关其快繁研究的
　第 37卷　第 3期
　2008年 9月 　　　　　　　　　
西　部　林　业　科　学
JournalofWestChinaForestryScience　　　　　　　　　　
Vol.37　No.3　
Sept.2008　
＊ 收稿日期:2008-03-24
　　　基金项目:国家自然科学基金项目 (30760155)。
　　　第一作者简介:徐凌彦 (1983-), 女 , 云南昆明人 , 硕士研究生 , 主要从事兰花生物技术方面的研究。
　　　通讯作者简介:李枝林 (1955-), 男 , 云南大理人 , 教授 , 主要从事观赏植物资源利用及创新方面的研究。
DOI :10.16473/j.cnki.xblykx1972.2008.03.007
报道。仅有文山师范高等专科学校 , 生物资源开发
研究中心的丁长春等对文山红柱兰组织快繁体系进
行了初探性的研究 [ 14] 。本项研究较丁长春等人从
使用不同培养激素上对以文山红柱兰种子为外植体
的组培技术作了深入的研究 , 其中在 BA激素对文
山红柱兰种苗增殖率的影响方面做了系统的研究 。
并在其增殖培养基中首次添加了花宝 4号作为有机
附加物 。为文山红柱兰快繁体系的建立增添了新的
内容。
1　材料和方法
1.1　材料
应用云南农业大学花卉研究所引种栽培的云南
省文山州野生文山红柱兰植株 , 于 2006年 3月在
温室进行文山红柱兰的自交授粉 , 2 ～ 7天后其授
粉植株花蕊蕊柱的顶端下卷 , 并盖住蕊腔 (柱
头), 花瓣开始萎蔫 , 整个花朵开始收缩 , 一周后
子房开始膨大 。 11月从其兰花蒴果中收集种子作
为外植体进行其种子的无菌萌发。
1.2　培养基和培养条件
文山红柱兰的种子萌发 、继代和生根培养均以
改良 MS为其基础培养基。种子萌发培养基附加 30%
蔗糖 、 0.7%琼脂 , 肌醇 100 mg/L。增殖培养基附
加蔗糖 20 %、 琼脂 0.7%、肌醇 100 mg/L、花宝
4号 1 g/L、香蕉泥 8 %, 培养基的 pH值为 5.8;
其生根和壮苗培养基附加蔗糖 30%、 琼脂 0.7 %、
肌醇 100mg/L、 碳粉 3 g/L, pH值为 5.8。在不同
的培养阶段 , 附加不同种类和浓度的植物激素。培
养温度控制在 25±2℃, 光照强度为 1 500 Lux, 每
天光照 12 h。
2　结果与分析
2.1　不同培养基对种子萌发的影响
在进行文山红柱兰种子无菌萌发实验所用的基
本培养基中 , 设置了添加不同浓度的 BA及 NAA
激素 7个配方 。以此组成其种子萌发实验的 7种培
养基 。种子培养 40天后观察其萌发情况 , 结果见
表 1。
表 1　不同培养基的文山红柱兰种子无菌萌发状况
Tab.1　SeedgerminationofC.wenshanenseondiferenttestedmedia
培养
基号
基本培
养基
激素浓度 /mg· L-1
BA NAA
萌发率
/%
中间繁殖
体长势
培养基褐
变程度
1 0.2 0.2 95 长势粗壮　 无
2 0.4 0.4 93 较为粗壮　 无
3 0.6 0.6 86 长势一般　 无
4 1/2MS 0.8 0.8 75 长势稍瘦弱 无
5 1.0 1.0 88 稍粗壮　　 稍褐化
6 1.5 1.5 80 长势一般　 轻微褐化
7 2.0 2.0 80 长势一般　 轻微褐化
由表 1看出 , 文山红柱兰自交种的萌发较易 ,
不仅种子萌发较快 , 且种子的萌发率较高 。以其成
熟种子为外植体通过组织培养的方式接种到含不同
激素组合 (配方)培养基上的试验结果表明:在
其基本培养基都为低盐的 1/2 MS时 , 所添加的激
素 BA和 NAA的浓度组合组成的培养基对文山红
柱兰种子的萌发尤为重要 。 1号配方种子萌发形成
的中间繁殖体长势最好;其次是 2号配方对其种子
的萌发较为有利 。当 BA和 NAA的浓度大于 2时 ,
培养基出现轻微褐化 , 随着组培温度的升高和光照
的加强 , 其褐化程度有可能加重 。文山红柱兰种子
萌发后 , 放置的时间不宜过长 , 否则将会影响萌发
后原球茎 (PLB)的发育 。因此文山红柱兰的种子
经暗培发芽后 , 见光培养 10余天便可作再转接培
养。
2.2　不同培养基继代增殖培养效果
在文山红柱兰原球茎发育成小苗时接种到含
0.2 mg/LNAA激素与不同浓度 BA激素组合的培
养基上作继代增殖培养 , 60天后观察其增殖情况 ,
结果见表 2。
24
西　部　林　业　科　学 　　　　　　　　　　　　　2008年　
表 2　不同培养基的文山红柱兰丛生芽增殖状况
Tab.2　BudregenerationofC.wenshanenseondifferenttestedmedia
培养
基号
基本培
养基
激素 /mg· L-1
BA NAA
有机附
加物
丛生芽
数 /个
增殖率
/% 苗生长情况
1 (CK) 0 6 12 植株细长 , 叶淡绿有根长出
2 0.5 80 g/L香蕉泥 56 112 植株细长 , 叶浓绿　　　　
3 1.0 70 140 长势正常 , 叶浓绿　　　　
4 1/2MS 1.5 0.2 1g/L花宝 4号 97 194 长势正常 , 叶浓绿　　　　
5 2.0 80 160 长势正常 , 叶浓绿　　　　
6 2.5 78 156 植株粗壮 , 叶浓绿　　　　
7 3.0 70 140 植株粗壮 , 叶浓绿　　　　
8 3.5 65 130 植株粗壮 , 叶浓绿　　　　
9 4.0 60 120 植株粗壮 , 叶浓绿　　　　
注:接种数为 50个 , 丛生芽数为已减去母株后增殖的芽数。
在兰花的继代增殖中 , 香蕉泥对兰花的增殖有
影响 , 已为许多试验所证实 [ 15 ～ 16] 。花宝是美国的
一种综合性化学肥料 , 其的使用已风行世界数十
年 。花宝有 5种配方 , 适用范围不同 。花宝 4号的
N︰ P︰ K的配比为 25︰ 5︰ 20。主要功能是能
强壮植物的根 、 茎 、 叶 , 使其分芽和根群增多 , 茎
部健壮 。本试验所用的培养基中在添加香蕉泥的基
础上 , 又加入了 1 g/L的花宝 4号 , 使之加强了对
其幼苗的扶壮作用。从表 2可看出 , 在其培养基所
含的激素 NAA浓度相同的条件下 , 文山红柱兰原
球茎丛生芽的增殖率随激素 6 -BA浓度的升高而
增高 , 达到 1.5mg/L时增殖率最高 , 可达 194%,
且苗株长势正常 , 叶色浓绿 。激素 6-BA浓度再
高时 , 其增殖率又逐渐下降 。试验结果还表明 , 在
未加激素 6-BA的培养基中 , 其增殖率低 , 苗株
细长 , 长势较弱 , 叶片微有发黄 , 在规定的观察时
间内没有增殖芽 , 反而有较多的根长出 , 约在 80
条左右 , 有小芽长出;在高浓度的 6 -BA培养基
中 , 苗株较为粗壮 , 节间缩短 , 但长势较慢 。
另在增殖培养中 , 对文山红柱兰苗株细长的茎
进行切段增殖培养试验 , 试验结果其大部分茎段能
长出原球茎并分化成为丛生芽 , 长势正常;而另一
部分在其茎节间生长出愈伤组织 , 经对其愈伤组织
作培养 , 亦能够分化成丛生芽。由此证明在文山红
柱兰种苗的继代增殖中 , 可采用茎段分段诱导增殖
的方式 , 以提高其增殖效率 。
表 3　不同培养基的文山红柱兰苗株生根状况
Tab.3　RootingstatusofC.wenshanenseondifferenttestedmedia
培养
基号
基本培
养基
激素 /mg· L-1
BA或 KT NAA
转接时根
数 /条
总根数
/条
生根情况
平均根数 /条 平均根长 /cm 平均根粗 /cm
1 0 0 28 3 2.8 0.3
2 0.2 0 34 3 2.4 0.3
3 0.4 0 44 3 3.0 0.4
4 BA0.2 0.6 0 62 3 2.7 0.4
5 0.8 0 56 2 2.6 0.6
6 1.0 0 48 4 3.6 0.5
7 1.5 0 34 3 3.2 0.4
8 1/2MS 2.0 0 33 3 3.1 0.4
9 0 0 12 2 3.3 0.2
10 0.2 0 53 2 2.7 0.3
11 0.4 0 54 2 2.4 0.3
12 KT0.2 0.6 0 46 2 2.4 0.4
13 0.8 0 53 2 2.15 0.4
14 1.0 0 51 2 2.4 0.3
15 1.5 0 57 3 3.0 0.4
16 2.0 0 42 2 2.7 0.4
注:有机附加物为碳粉 (AC) 3g/L。
25
　第 3期　　　　　　　　　　徐凌彦等:文山红柱兰组培技术研究
2.3　不同培养基的生根培养效果
选择株高约为 5 cm的文山红柱兰无根苗株 ,
接种在添加不同 NAA浓度和相同浓度的 6-BA和
KT, 以及添加活性碳的生根培养基中进行对比试
验 , 50天后观察其苗株的生根状况 , 结果见表 3。
NAA激素广泛用于苗株的生根培养中 , 其与
细胞分裂素相互作用能促进苗株的生长。活性炭在
兰花的组织培养中具有促进苗株生根的作用 , 其机
理一般认为与活性炭减弱光照 , 抑制 IAA的光氧
化有关[ 17 ～ 18] 。花宝 5号的 N︰ P︰ K配比是 30
︰ 10︰ 10, 其主要作用是促进各类幼苗的快速生
长 。花宝 5号为国兰与洋兰新芽的初期生长提供了
营养。在参试的生根培养基的 16组配方中 , 明显
地突出了激素 NAA的作用 。此试验结果表明 , 在
NAA与 KT和 BA组合的生根培养基中 , NAA与
BA组合的苗株生根效果优于 NAA与 KT的组合 。
随着培养基中 NAA浓度的提高 , 其苗株的生根情
况呈现出缓慢上升的趋势 , 但其生根总数并没有随
着激素浓度的增加不断上升 , 在达到一定浓度后 ,
反而呈现下降的趋势 , 有部分苗株死亡。在试验初
期 , 培养基中还加入了花宝 5号 , 希望能有促进生
根 , 壮苗的效果 , 但在培养 30天左右时 , 绝大多
数的文山红柱兰苗株出现叶片萎蔫 , 叶绿素消失 ,
叶片卷曲 , 植株生长畸形等现象 , 且导致大部分苗
株最后死亡 , 在相同的培养基中去除花宝 5号后 ,
此现象消失 。说明在文山红柱兰苗株生根培养过程
中添加花宝 5号不利于其生长。当其生根的培养基
中所添加 BA激素的浓度为 0.2 mg/L, NAA激素
的浓度为 0.6 mg/L时 , 文山红柱兰苗株的生根效
果最佳 。
3　炼苗移栽技术
当文山红柱兰组培苗的根长达 1 cm左右时 ,
可将其苗木移出培养室 , 置于温室中继续培养 7天
左右。将文山红柱兰组培苗根部的培养基洗净 , 选
择灭菌苔藓作其炼苗用的基质 , 在专用温室中进行
炼苗。炼苗期间光照不宜过强 , 保持温室的温度为
20℃ ～ 25℃, 每天用喷头进行喷雾 , 以保持其苗根
部的湿润 , 使其空气相对湿度达 75 % ～ 85 %, 并
注意病虫防治。炼苗 2个月左右苗木长出新根 , 可
上盆栽植。
4　结语
(1)文山红柱兰组培技术的研究 , 通过采用
其种子为外植体 , 获取了种子无菌萌发球茎丛生芽
继代增殖 , 无根苗的生根培养以及炼苗移栽等的组
培配套技术 , 为文山红柱兰的种苗培育提供了新途
径。
(2)文山红柱兰的种子萌发较易 , 萌发率高。
以低盐度的 1 /2MS为基本培养基加入浓度为 0.2
mg/L的激素 BA和浓度为 0.2 mg/L的激素 NAA
作为培养基对文山红柱兰种子的萌发较为有利。当
所添加的激素浓度大于 2 mg/L时 , 培养基出现轻
微褐化 , 表明此期间所用的此两种激素的浓度不宜
过高 。另外 , 种子萌发之后要注意及时转接 , 以免
影响其种苗后期的生长 。
(3)以低盐度的 1 /2MS为基本培养基加入
1.5 mg/L的 BA和 0.2mg/L的 NAA为增殖培养基
对文山红柱兰球茎丛生芽的诱导效果最好 , 添加这
两种激素的浓度过高或过低都会降低其诱导效果。
试验发现培养时间的长短也是影响其丛生芽增殖率
的一个因素 , 时间过短不能达到预期的增殖数量 ,
过长影响苗株后期长势 , 使苗株变得瘦弱 , 还会影
响后期生根效果 。此期的培养时间以 60 ～ 70天为
好。
(4)在文山红柱兰组培苗的增殖培养过程中 ,
要注意保持充足的光照 。此间若光照不足 , 使其苗
株出现徒长 、 节间增多且细长 , 叶片发黄等现象。
其苗株还会出现白化现象 , 将严重影响其增殖效
果。
(5)在文山红柱兰组培苗的生根试验中 , 以
低盐度的 1/2MS为基本培养基 , 分别添加激素
BA、 KT与 NAA组合作为其生根培养基 。其试验
结果表明添加 BA较 KT明显。在 1/2MS基本培养
基中加入 0.6 mg/L的 NAA、 0.2 mg/L的 BA和
0.3 %活性炭 , 最适合文山红柱兰无根苗的生根培
养。经试验表明 , 在文山红柱兰组培苗的生根培养
期间 , 加花宝 5号对其苗的生根不利。
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