全 文 ：北方园艺 2011(05):177 ～ 179 ·生物技术 ·
作者简介:周鑫(1969-),男,硕士,副教授 ,现主要从事植物组织培
养和园林苗圃的教学与生产及科研工作。 E-mail:shw mdjlk@
163.com。
收稿日期:2010-12-14
宽叶红门兰组织培养育苗研究
周 　鑫
(黑龙江林业职业技术学院,黑龙江牡丹江 157011)
　　摘　要:以花梗腋芽为外植体 ,筛选出宽叶红门兰组织培养育苗的适宜培养基配方。结果表
明:宽叶红门兰最佳诱导培养基MS+BA 2.0 mg/ L ,增殖培养基MS +BA 1.5 mg/L+NAA 0.3
mg/ L ,生根培养基1/2MS +BA 0.1 mg/ L+NAA 1.0 mg/L。
关键词:宽叶红门兰;花梗腋芽;组织培养
中图分类号:S 682.310.36　文献标识码:A　文章编号:1001-0009(2011)05-0177-03
　　宽叶红门兰(Orchis lati folia Linn.)为兰科红门兰
属多年生草本植物 ,总状花序 ,花紫红色或粉红色 ,具有
退化的雄蕊 ,蒴果。在我国主要分布在黑龙江 、内蒙古 、
西藏等省 ,全草入药 ,具有强心 、补肾 、生津 、止渴 、健脾胃
的功效。栽培种为名贵观赏植物 ,盆栽或作为花坛 、花
境植物。在我国北方园林应用前景广阔 ,但常规繁殖方
法增殖速度较慢 ,不能满足市场需求。组织培养为宽叶
红门兰优良品种快速繁殖提供了有效途径 ,有利于宽叶
红门兰的新品种培育和次生代谢的研究 ,对兰科植物的
研究并探索其发育规律起到促进作用。
1　材料与方法
1.1　试验材料
刚形成的花梗作为外植体材料。
1.2　试验方法
1.2.1　外植体的消毒　采集外植体材料用自来水冲洗
后 ,用 70%的乙醇消毒 5 ～ 10 s ,将乙醇倾去 ,用无菌水
冲洗外植体。在超净工作台上用 0.1%的氯化汞溶液分
别浸泡外植体 4 、6、8 、10 min后 ,注入适量的无菌水 ,反
复冲洗 5 ～ 8遍 ,每次 3 min ,接着把消过毒的外植体用
无菌纱布吸干水分 ,放于灭菌的培养皿上 ,切段 ,每段至
少有 1个芽 ,接种到MS+BA 1.0 mg/L培养基上。
1.2.2　基本培养基 、生长调节剂　外植体在 MS +BA
1.0 mg/L上培养 ,待腋芽萌发后转移到 MS 、1/2MS 、KC
为基本培养基 ,附加BA 1.0 mg/ L+NAA 0.1 mg/L 、BA
1.0 mg/L +IBA 0.1 mg/L 、KT 1.0 mg/L +IBA 0.1
mg/ L、KT 1.0 mg/ L+NAA 0.1 mg/L 的培养基上培
养 ,每种培养基接种20个外植体 ,4次重复。
1.2.3　诱导培养基　在1.2.2基础上 ,将外植体接种在
以 MS为基本培养基 ,细胞分裂素BA浓度分别为 4.0、
3.0、2.0 、1.0 、0.5、0.1 mg/L 的培养基上培养 ,每种培养
基接种 20个材料。
1.2.4　增殖培养基　将诱导产生的芽接种在以 MS为
基本培养基 ,细胞分裂素 BA ,浓度分别为 2.0 、1.5、1.0、
0.5 mg/ L ,生长素选用NAA ,浓度分别为0.5 、0.3、0.1 、0
mg/L 的培养基上培养 ,每种培养基接种 20个材料。
1.2.5　生根培养基　将 2 cm 以上芽接种到生根培养
基 ,以1/2MS为基本培养基 ,生长素选用 NAA ,浓度分
别为 2.0 、1.5 、1.0、0.5 mg/L。细胞分裂素 BA ,浓度分
别为 0.5 、0.3、0.1 、0 mg/L 的培养基上培养 ,每种培养基
接种 20个材料。
1.3　培养条件
培养基含糖 3%,琼脂 7 g/ L , pH 5.8 ,环境温度
(25±2)℃,光照 2 000 lx ,每天光照时间 10 ～ 12 h。
2　结果与分析
2.1　消毒处理时间对外植体消毒效果的影响
外植体在培养基MS+BA1.0 mg/ L培养 2周后观
测结果(表1 、图1),表明升汞消毒作用明显 ,消毒效果随
时间增加而加强 ,外植体消毒 10 min时已经没有污染 ,
消毒 8 min开始外植体出现药害 ,随组织成熟的程度不
同危害程度不同 ,10 min时死亡率明显增高 ,危害程度
严重;外植体成活率在 4 ～ 8 min区间随着时间增加上
升 ,但是8 min后随时间延长而下降 ,消毒时间以 8 min
时污染较少 ,药害较轻 ,死亡较少 ,成活最高。因此 ,用
0.1%升汞消毒外植体8 min效果最好。
表 1　　外植体消毒时间与消毒效果相关性统计
消毒时间
/min 接种数 污染数
污染率
/ % 死亡数
死亡率
/ % 成活数
成活率
/ %
4 40 17 42.5 0 0 23 57.5
6 40 9 22.5 0 0 31 77.5
8 40 2 5 3 7.5 35 87.5
10 40 0 0 25 62.5 15 37.5
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·生物技术· 北方园艺 2011(05):177～ 179
图1　外植体的时间消毒与效果相关性图
2.2　基本培养基 、生长调节剂选择结果
外植体萌发后的芽转接后 ,培养 4周观测结果(表
2),通过方差分析(表 3)表明 ,不同培养基 、不同生长调
节剂以及培养基与生长调节剂组合交互效应对芽增殖
影响显著 ,基本培养基增殖效果依次是 MS >1/2MS>
改良 MS>KC(表 4、图 2),生长调节剂组合增殖效果依
次是 1号>2号>4号>3号(表 5、图 3),因此 ,宽叶红
门兰组培基本培养基采用MS效果最好 ,细胞分裂素采
用BA最好 ,生长素采用NAA效果最好。
表2 芽增殖倍数统计表
基本培养基 生长调节剂/ mg·L-1 1 2 3 4
MS BA 1.0+NAA 0.1 4.0 4.1 3.9 4.0
BA 1.0+IBA 0.1 3.2 2.2 2.9 2.0
KT 1.0+IBA 0.1 0.6 1.0 0.8 0.9
KT 1.0+NAA 0.1 1.1 1.4 1.1 1.5
1/2MS BA 1.0+NAA 0.1 2.6 3.2 2.0 2.5
BA 1.0+IBA 0.1 2.1 2.3 2.1 1.7
KT 1.0+IBA 0.1 1.0 0.7 1.1 1.4
KT 1.0+NAA 0.1 1.2 1.2 1.4 0.9
改良MS BA 1.0+NAA 0.1 2.2 2.0 2.4 2.1
BA 1.0+IBA 0.1 1.3 1.5 1.7 1.5
KT 1.0+IBA 0.1 1.0 0.9 1.3 1.1
KT 1.0+NAA 0.1 1.2 1.3 1.2 1.4
KC BA 1.0+NAA 0.1 1.5 1.2 1.1 1.6
BA 1.0+IBA 0.1 1.0 1.1 1.2 1.3
KT 1.0+IBA 0.1 1.2 1.3 0.0 1.0
KT 1.0+NAA 0.1 1.6 1.4 1.4 1.4
　　注:增殖倍数=>0.5cm芽总数/接种材料数。
　　表 3 增殖倍数方差分析表
变异来源 平方和 自由度 均方 F Sig.
基本培养基 7.849 3 2.616 35.269 .000
生长调节剂 22.437 3 7.479 115.029 .000
基本培养基＊生长调节剂 11.916 9 1.324 12.840 .000
注:线性回归的复相关系数等于0.999 ,方差分析中Sig<0.05表明处理间差异显著。
　　表 4　　　培养基对增殖倍数影响统计
培养基 MS 1/ 2MS 改良MS KC
平均增殖倍数 2.16 1.7 1.5 1.2
图 2　培养基对增殖倍数影响
　　表 5　　生长调节剂对增殖倍数影响统计
生长调节剂组合
/mg·L-1
BA 1.0+
NAA 0.1
BA 1.0+
IBA 0.1
KT 1.0+
IBA 0.1
KT 1.0+
NAA 0.1
培养基编号 1 2 3 4
平均增殖倍数 2.5 1.8 1.0 1.3
图 3　生长调节剂对增殖倍数影响
2.3　最佳诱导培养基选择结果
由表 6可知 , BA浓度超过 3.0 mg/L 形成愈伤组
织 ,低于0.5 mg/ L时 ,生长缓慢 ,外植体在MS+BA 2.0
mg/L 上诱导芽生长最适宜。
　　表 6 外植体诱导生长情况
　　培养基 　　　　　　生长情况
MS+BA 4.0 mg/L 1周芽开始萌动,外植体出现大量愈伤组织
MS+BA 3.0 mg/L 1周芽开始萌动, 2周后外植体基部出现愈伤组织
MS+BA 2.0 mg/L 1周芽开始萌动, 3周芽高生长2.0cm ,生长正常
MS+BA 1.0 mg/L 2周芽开始萌动, 4周芽高2.0cm ,生长正常
MS+BA 0.5 mg/L 3周芽开始萌动, 6周芽高2.0cm ,生长缓慢
MS+BA 0.1 mg/L 1周后无明显变化 ,4周后外植体死亡
2.4　增殖培养基选择
诱导芽在增殖培养基生长 4周后观测结果(表 7、图
4),BA浓度对比组中 BA 1.5 mg/ L时增殖倍数明显高
于其它组 ,在BA 1.5 mg/L组中NAA 0.3 mg/L增殖倍
数最高 ,因此 ,增殖最佳培养基选择 MS+BA 1.5 mg/ L
+NAA 0.3 mg/L。
　　表 7 不同培养基的芽增殖倍数
NAA 浓度
/mg·L-1
BA浓度/mg·L-1
0.5 1.0 1.5 2.0
0 2.2 2.6 3.1 1.5
0.1 1.8 3.0 4.5 1.6
0.3 1.1 3.3 4.8 1.9
0.5 1.1 2.2 4.0 2.4
图4　不同培养基芽增殖倍数
2.5　生根培养基选择
分化苗转接到生根培养基培养 ,最早1周开始生根 ,4
周后观测结果(表 8 、图 5), NAA 浓度 1.0 ～ 1.5 mg/ L ,
BA 0.1 ～ 0.3 mg/ L ,生根效果较好 ,生根率为 64.9%～
93.4%,最佳生根培养基为1/2MS +BA 0.1 mg/L+NAA
1.0 mg/L ,生根率为93.4%。
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北方园艺 2011(05):177 ～ 179 ·生物技术 ·
　　表 8　　生长调节剂浓度对生根率的影响 %
BA浓度
/mg·L-1
NAA浓度/mg·L-1
0.5 1.0 1.5 2.0
0 43.9 69.8 52.7 41.0
0.1 45.8 93.4 64.9 42.3
0.3 29.2 85.3 72.8 55.5
0.5 10.9 73.2 68.7 57.9
图 5　生长调节剂浓度对生根率的影响
2.6　练苗与移栽
当试管苗生长至 3 ～ 5 cm 左右 ,根 2 ～ 3条时可以
进行练苗 ,将试管苗连同培养容器一起移到温室 ,5 d后
打开瓶塞 2～ 3 d ,取出试管苗用自来水冲洗掉根部附着
的培养基 ,定植于苔藓(珍珠岩或蛭石)中 ,保持 90%以
上的相对湿度 ,并通风 ,温度20 ～ 25℃,3周后相对湿度
逐渐降低至65%。每周浇 1次 10%的 MS培养基大量
元素 200 mL/m2 。4周试管苗长出新根可以进行移栽。
3　小结
宽叶红门兰组织培养以花梗为外植体时 ,0.1%升
汞消毒 8 min效果较好。最佳培养基配方为:芽诱导培
养基 MS +BA 2.0 mg/L ,增殖培养基为 MS +BA 1.5
mg/L+NAA 0.3 mg/L ,生根培养基 1/2MS +BA 0.1
mg/L+NAA 1.0 mg/L。
参考文献
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社 ,1993.
Study on Tissue Culture of Orchis latifolia Linn.
ZHOU Xin
(Heilongjiang Forestry Vocation Technical College, Mudanjiang , Heilong jiang 157011)
Abstract:Taking pedicle axillary buds as explants and researched the best culture conditions for Orchis lati folia Linn..
The results show ed that the optimal induction medium was MS+BA 2.0 mg/L , multiplication medium was MS +BA
1.5 mg/L+NAA 0.3 mg/ L , rooting medium was 1/2MS+BA 0.1 mg/L+NAA 1.0 mg/ L.
Keywords:Orchis lati folia Linn.;pedicle axillary buds;tissue culture
冬季农药保 存注意事项
　　1　存放农药的地方 ,温度应不超过 25℃,更要注意远离火源 ,以防药剂高效分解。低温要注意防冻 ,温度保持在
1℃以上。防冻的常用办法是用碎柴草 、糠壳或不用的棉被覆盖保温。
2　发挥性强的农药要注意密封 ,避免挥发降低药效 ,污染环境 ,危害人体健康;对已失效或剩余的少量农药不可
在田间地头随地乱倒 ,更不能倒入池塘 、小溪 、河流或水井。也不能随意加大浓度后使用 ,应采取深埋处理 ,避免污染
环境。
3　农药要集中存放在一个地方 ,做好标记。瓶装农药如若破裂 ,要换好包装 ,贴上标签 ,以防误用。
4　粉剂农药要放在干燥处 ,以防受潮结块而失效。
5　农药不能与粮油 、豆类 、种子 、蔬菜 、食物以及动物饲料等同室存放 ,特别注意不要放在小孩可接触的地方。
6　分类贮存。按化学成分 ,农药可分为酸性 、碱性 、中性三大类。这三类农药要分别存放 ,距离不要太近 ,防止
农药变质;也不能和碱性物质 、碳铵、硝酸铵等同时存放在一起。
7　不要把农药和易燃易爆物品存放在一起 ,如烟熏剂 、汽油等 ,防止引起火灾。
8　防止日晒。用棕色瓶子装着的农药一般需要避光保存。需避光保存的农药 ,若长期见光曝晒 ,就会引起农药
分解变质和失效。例如乳剂农药经日晒后 ,乳化性能变差 ,药效降低。所以在保管时必须避免光照日晒。
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