全 文 ：昆明学院学报 2012，34(3):30 ～ 32 CN 53 －1211 /G4 ISSN 1674 －5639
Journal of Kunming University
收稿日期:2012 － 05 － 04
基金项目:云南省教育厅科学研究基金资助项目(09C0132)
作者简介:杨黎江(1969—) ，女，云南昆明人，副教授，硕士，主要从事生理学和药理学研究．
通讯作者:马银海(1964—) ，男，云南昆明人，教授，主要从事天然产物研究． E-mail:myh5929251@ 163． com
重楼皂苷类化合物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
杨黎江1，沈 放1，王德斌2，路 斌1，马银海3*
(1．昆明学院 生命科学与技术系，云南 昆明 650214;2．昆明学院 农学院，云南 昆明 650214;
3．昆明学院 化学科学与技术系，云南 昆明 650214)
摘要:将重楼皂苷类化合物 PHAC-A和 PHAC-B配制为高、低质量浓度组，以灌胃方式连续给药 7 d，测定小鼠腹
腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数．结果显示，PHAC-A，PHAC-B高、低质量浓度组对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬
百分率和吞噬指数的影响均高于对照组和阳性对照组(P ＜ 0． 05) ;两组比较，PHAC-A对巨噬细胞吞噬功能的促
进作用明显高于 PHAC-B．结果表明，重楼皂苷类化合物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能具有明显促进作用，并以
PHAC-A的作用最强．
关键词:重楼;偏诺皂苷;薯蓣皂苷;巨噬细胞;吞噬作用
中图分类号:R285 文献标识码:A 文章编号:1674 － 5639(2012)03 － 0030 － 03
The Effects of the Saponins in Rhizoma Paridis Yunnanensis
on Phagocytic Function of Peritoneal Macrophages of Mice
YANG Li-jiang1，SHEN Fang1，WANG De-bin2，LU Bin1，MA Yin-hai3
(1． Department of Life Science and Technology，Kunming University，Yunnan Kunming 650214，China;
2． College of Agriculture，Kunming University，Yunnan Kunming 650214，China;
3． Chemical Science and Technology Department，Kunming University，Yunnan Kunming 650214，China)
Abstract:Mice were administered intragastrically different dose of the Saponins in Rhizoma Paridis Yunnanensis，PHAC-A or PHAC-
B，for 7 continuous days，then the devouring percentage and index of peritoneal macrophage cells were determined． The results show
that both the high and the low dose of PHAC-A or PHAC-B develop the devouring percentage and index of peritoneal macrophage cells，
which is significantly higher than that of the negative group and the positive group(P ＜ 0． 05)． Compared to PHAC-B，PHAC-A has
better effect on the macrophage phagocytosis． The results suggest that the Saponins in Rhizoma Paridis Yunnanensis，especially PHAC-
A，can obviously develop phagocytic function of peritoneal macrophages．
Key words:Paris Rhizome (Paris polyphylla Smith varyunnanensis (French．)Hand． -Mazz) ;pennogenyl saponins;dioscins;macro-
phage;phagocytosis
重楼属植物全世界共有 24种，我国拥有 19种，在
我国西南各省区种类和资源极为丰富，是一类极具药
用价值的植物［1］．重楼皂苷类化合物是重楼中的主要
有效成分，有文献报道［2］其中多数具有止血、抗肿瘤、
免疫调节等多种独特的药理活性．目前对重楼的药理
研究和临床应用基本集中于粗提物和复方制剂，而对
其皂苷类成分的研究和开发未见报道．为进一步研究
重楼皂苷成分的免疫调节活性，拟分离纯化获得重楼
的两种主要皂苷类成分偏诺皂苷(PHAC-A)和薯蓣皂
苷(PHAC-B)，探索其对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用，
为重楼的合理开发和深入应用提供科学依据．
1 材料与方法
1. 1 仪器与试剂
高速离心机(Backman，Microfuge 22R) ;精密水
浴锅(土耳其，nüve) ;生物显微镜(Olympus) ;标准
型净化工作台(SZX － ZP) ;恒温培养箱(德国
BIND) ;微量分析天平(瑞士梅特勒 XS205DU) ;混
匀器;手动计数器;显微成像系统等．
试剂选用国产分析纯;黄芪注射液(国药准字:
Z13020999)为阳性对照．
1. 2 动物
体质量为 18 ～ 22 g 成年昆明小鼠，雌雄不拘，
随机分组．购于昆明医学院实验动物中心(许可证
号:2005017)．
1. 3 方法
1. 3. 1 样品
重楼皂苷类化合物 PHAC-A和 PHAC-B由昆明
学院天然产物研究所马银海教授分离制备．经鉴定，
DOI:10.14091/j.cnki.kmxyxb.2012.03.024
PHAC-A和 PHAC-B样品中主要成分含量(质量分
数)＞ 98% ．
1. 3. 2 动物分组
分组前，为小鼠提供(20 ± 2)℃室温环境，让
其自由饮水、进食，适应环境数日． 将小鼠随机分
为对照组、阳性对照组和实验组(分别将 PHAC-A，
PHAC-B 稀释为质量浓度为 0. 1 mg /mL 和 0. 02
mg /mL的高、低两组，即 PHAC-A 高、低质量浓度
组和 PHAC-B 高、低质量浓度组) ，每组 10 只． 阳
性对照组和实验组每天灌胃样品 0. 5 mL，对照组
每天灌胃同等体积的生理盐水，每天定时灌胃，连
续灌胃 7 d．
1. 3. 3 鸡红细胞(CRBC)悬液的制备［3］
自健康雄鸡鸡翼静脉抽血加入 5 倍于鸡血量的
Alsever保存液中(4 ℃冰箱保存 2 周)．使用时，在超
净工作台上将鸡血缓慢倒入无菌离心管中，加入无
菌生理盐水摇匀，离心洗涤，2 000 r /min，5 min，反
复 3 次．洗涤后，配成质量分数为 5%鸡红细胞生理
盐水悬液，4 ℃冰箱保存备用．
1. 3. 4 CRBC细胞完整性检查
CRBC注射前应制血涂片进行细胞完整性检
查．将 CRBC 生理盐水悬液制血涂片，晾干后滴加
Wright染液，染色 15 min，蒸馏水冲洗，晾干后镜检，
观察 CRBC细胞是否完整．
1. 3. 5 重楼皂苷类化合物对小鼠腹腔巨噬细胞吞
噬作用的测定［4 － 5］
灌胃第 7 d 每只小鼠腹腔注射 3 mL 质量分数
为 5%淀粉液，24 h 后腹腔注射 1 mL 质量分数为
2% CRBC 液，40 min 后断颈处死小鼠，腹腔注射
1. 5 mL Hanks液，轻揉小鼠腹部，使 Hanks液充分
涮洗腹腔内巨噬细胞． 剖开腹部吸取腹腔液滴片
(每只小鼠滴 3 张平行片) ，37 ℃恒温培养 30 min，
生理盐水冲洗滴片，冷风吹干，甲醇固定 5 min 后用
Giemsa-Wright染液染色，镜检，计算巨噬细胞吞噬
指数(PI)和吞噬百分率．计算公式如下:
巨噬细胞吞噬指数(PI)= 被吞噬的 CRBC 总
数 /100 个巨噬细胞;
巨噬细胞吞噬率 = (吞有 CRBC 的巨噬细胞
数 /100 个巨噬细胞)× 100% ．
1. 3. 6 数据处理
所有数据经 SPSS 13. 0 软件处理，各组对小鼠
腹腔巨噬细胞吞噬功能影响的比较采用单因素方差
分析，q检验，P ＜ 0. 05 表示差异有统计学意义．
2 实验结果
2. 1 小鼠腹腔巨噬细胞
将小鼠腹腔巨噬细胞吞噬情况进行显微拍照
(见图 1 ～图 3) ，巨噬细胞吞噬情况如下．
在显微照下，可清楚分辨出 CRBC 细胞、巨噬
细胞(Mφ)和巨噬细胞的吞噬情况，并进行计数．
图 1 小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)
和鸡血红细胞(CRBC)
图 2 吞噬有 CRBC的巨噬细胞
图 3 吞噬多个 CRBC的巨噬细胞
2. 2 重楼皂苷类化合物对小鼠巨噬细胞吞噬百分
率的影响
分别将 PHAC-A，PHAC-B 稀释为 0. 1 mg /mL
和 0. 02 mg /mL高、低两种质量浓度，以生理盐水作
为空白对照，黄芪注射液(质量浓度为 0. 1 mg /mL)
作为阳性对照，分组测定其对小鼠腹腔巨噬细胞吞
噬百分率的影响，其结果见图 4．
13第 3 期 杨黎江，沈 放，王德斌，等:重楼皂苷类化合物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
结果表明，阳性对照组和 PHAC-A，PHAC-B 组
均能够明显增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性，且
PHAC-A，PHAC-B不论在低质量浓度还是在高质量
浓度时与阳性对照比较，对巨噬细胞吞噬活性的促
进作用差异都有统计学意义．与其它组比较，PHAC-
A组对小鼠巨噬细胞吞噬活性的促进作用最强，其
中低质量浓度组的促进作用也明显高于对照组、阳
性对照组和 PHAC-B组．
2. 3 重楼皂苷类化合物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬
指数的影响
分别将 PHAC-A，PHAC-B 稀释为 0. 1 mg /mL
和 0. 02 mg /mL高、低两种质量浓度，以生理盐水作
为空白对照，黄芪注射液(质量浓度为 0. 1 mg /mL)
作为阳性对照，分组测定其对小鼠腹腔巨噬细胞吞
噬指数的影响，其结果见图 5．
结果表明，阳性对照组和 PHAC-A，PHAC-B 组
与对照组比较均能够明显增强小鼠巨噬细胞的吞噬
功能，PHAC-B 在 0. 02 mg /mL 质量浓度时对小鼠
腹腔巨噬细胞吞噬功能的增强作用与阳性对照组
(质量浓度为 0. 1 mg /mL)相比差异无统计学意义，
而 PHAC-A在同样质量浓度时表现出显著的促进作
用，且显著高于 PHAC-B 低质量浓度组和阳性对照
组，促进作用接近 PHAC-B 高质量浓度组(差异无
统计学意义)． 与其它两组比较，PHAC-A 组对小鼠
巨噬细胞吞噬功能的促进作用最强，低质量浓度组
的促进作用明显高于对照组、阳性对照和 PHAC-B
的低质量浓度组．
3 讨论
巨噬细胞是机体免疫功能的关键细胞，在免疫
应答过程中起辅佐作用，当病原微生物或其它抗原
进入机体后，它承担着摄取、加工和提呈抗原的重要
作用．巨噬细胞能产生多种免疫分子，如 IL-1，IL-6，
IL-8，IL-10，IL-12 等白细胞介素，生成干扰素 INF-
α，β，可对免疫应答进行正、负调节效应，因此巨噬细
胞的功能在一定程度上反映了机体免疫能力的强
弱．巨噬细胞作为体内执行吞噬异物的重要细胞之
一，当异体抗原性物质 CRBC进入小鼠体内后，注射
至小鼠腹腔的淀粉可诱导小鼠周身巨噬细胞迁移至
腹腔导致巨噬细胞聚集并吞噬． 所以小鼠腹腔巨噬
细胞数量的变化和吞噬能力的改变可作为衡量机体
非特异性免疫功能的重要指标，用于评价药物对机
体防御功能的影响［6］．
已有的研究表明，重楼总皂苷具有抗肿瘤、止血
和调节免疫等药理作用． PHAC-A，PHAC-B 是从传
统中药重楼中分离纯化的皂苷类成分，据文献报道
重楼中的活性成分偏诺皂苷元和薯蓣皂苷元能促进
小鼠粒 /巨噬细胞克隆形成细胞(GM-CFC)增殖，同
时是作用较强的免疫调节剂［2］．本文研究结果显示，
重楼皂苷中的 PHAC-A，PHAC-B明显具有增强小鼠
腹腔巨噬细胞的吞噬活性和提高吞噬指数的作用，
与阳性对照组黄芪注射液比较，重楼皂苷类化合物
对巨噬细胞吞噬活性的促进作用明显高于黄芪注射
液，并以 PHAC-A 的促进作用最强．由此提示，重楼
总皂苷中对机体免疫功能具明显增强作用的皂苷类
化合物为 PHAC-A，它能提高小鼠腹腔巨噬细胞的
吞噬功能，呈现出具有显著提高吞噬百分率和吞噬
指数的作用．巨噬细胞对药物作出的反应，可能与细
胞表面的分子受到刺激有关． 分布于巨噬细胞表面
的受体分子影响其代谢及功能的变化，主要表现在
细胞的趋化、识别、吞噬、增殖、生长及免疫反应等方
面．本研究所涉及到的重楼皂苷类化合物可能正是
通过对巨噬细胞表面分子的作用，增强其吞噬异物
的能力，因而在试验中观察到小鼠腹腔巨噬细胞吞
噬功能的显著改善，即 PHAC-A，PHAC-B 具有明显
提高小鼠免疫功能的作用．
对重楼皂苷类化合物的研究，不但可避免粗提
物或复方制剂中其它成分对其活性的影响降低药
效，亦可消除这些成分在人体产生的副作用，同时还
可因其成分和功效明确，为研制和开发新型药物顺
利进入市场提供科学依据．
［参考文献］
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23 昆明学院学报 2012 年 6 月