全 文 ：收稿日期:2008-12-23
基金项目:北京市科技计划项目(209090501040902);农业部牧草种质资源保护项目
作者简介:刘永财(1981-),男 ,吉林松原人 ,硕士 ,主要从事牧草种质资源研究。
通讯作者:孟　林(1966-),男 ,内蒙古乌兰察布人 ,副研究员 ,博士 ,主要从事草业科学研究。
新麦草种质遗传多样性的 ISSR分析
刘永财1 , 2 ,孟　林1 ,张国芳1 ,毛培春1 ,张德罡2
(1.北京市农林科学院 北京草业与环境研究发展中心 ,北京　100097;2.甘肃农业大学 草业学院 ,甘肃兰州　730070)
　　摘要:利用 ISSR标记对 15 份新麦草(Psathyrostachys juncea)种质资源进行遗传多样性检测。 为获得稳定的新麦草
ISSR反应体系 , 对反应条件中的 dNTP、Taq 酶浓度 、引物浓度 、Mg2+浓度等因子进行了优化 , 建立起的最佳反应体系
为:25μL的反应体系中含有 dNTP 2.5 μL、Taq 酶 0.2μL、Primers 1 μL、Mg2+1.5μL、2.5 μL 10×Buffer、2 μL模板 DNA和
ddH2O 15.3 μL。 ISSR标记结果显示 ,筛选出的重复性好 、谱带清晰的 ISSR引物 8条 , 共获得 84 个扩增位点 , 其中多态
性位点 72 个 , 多态性比率(PPB)为 85.7%。 通过遗传相似系数(GS)的计算 , 供试种质材料间的 GS 值在
0.440 5～ 0.904 8之间 , 表现出丰富的遗传多样性。通过聚类分析 , 将 15 份新麦草种质材料划分为四大类 , 且呈现出
一定的地域性分布规律。
关键词:新麦草;ISSR分子标记;遗传多样性;聚类分析
中图分类号:S543.03　　文献标识码:A　　文章编号:1000-7091(2009)05-0107-06
Genetic Diversity Analysis of 15 Psathyrostachys juncea Germplasm
Resources by ISSR Molecular Marker
LIU Yong-cai1 , 2 ,MENG Lin1 , ZHANG Guo-fang1 ,MAO Pei-chun1 ,ZHANG De-gang2
(1.Beijing Research and Development Center for Grasses and Environment ,
Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences ,Beijing　100097 ,China;2.Pratacultural College ,
Gansu Agricultural University ,Lanzhou　730070 ,China)
Abstract:The genetic diversities of 15 Psathyrostachys juncea germplasm resources were analyzed by ISSR molecular
marker.Based on the basic system , four factors of Taq DNA polymerase , random primers ,Mg2+ , and dNTPs which affect
ISSR-PCR amplifying results of P.juncea were optimized.An optimal ISSR-PCR system including 2.5μL dNTPs ,2 μL
template DNA , 0.2μL Taq DNA polymerase ,1 μL random primers ,1.5 μL Mg2+ ,2.5 μL 10×PCR Buffer ,15.3μL
ddH2O , and the total volume was 25 μL ,was established.The results of ISSR marker showed that 8 primers ,which could
show clearer bands and had good repetition ,were selected from 25 primers and detected a total of 84 bands , among which
72 bands were polymorphic.The average percentage of polymorphic bands(PPB)was 85.7%.According to
0.440 5-0.904 8 of the GS values , the germplasm and materials of P .juncea showed rich genetic diversity.Based on
cluster analysis of the genetic characteristics , 15 P.juncea germplasm could be divided into 4 groups according to the
nearest phylogenetic relationship.In most cases , the germplasm and materials from the same country were in the same
group and showed the definite rules of geographical distribution.
Key words:Psathyrostachys juncea ;ISSR molecular marker;Genetic diversity;Cluster analysis
　　新麦草(Psathyrostachys juncea(Fisch.)Nevski)又
名俄罗斯野黑麦(RussianWildrye),是苏联植物学家
S.Nevski从大麦属(Hordeum)中分离出来的 ,为多年
生短根茎丛生牧草 ,耐旱 、耐盐碱 、抗寒性强 、耐牧 、
易建植 ,是优良的放牧型禾草 。在我国自然分布于
天山 、阿尔泰山和青藏高原等地[ 1 ,2] 。
近年来我国新麦草种质资源的搜集 、保存 、鉴定
和育种利用研究工作取得了一定的进展 ,且开展了
新麦草染色体组和细胞遗传学等的研究和应用[ 3] 。
随着生物技术的发展 ,进一步深化新麦草种质资源
遗传多样性及有利基因的发掘与利用研究 ,成了育
种取得突破性进展的关键 。1994年由 Zietikiewicze
华北农学报·2009 , 24(5):107-112
等[ 4]创建了 ISSR(Inter-simple sequence repeat)分子标
记技术 ,并以重复性和稳定性好[ 5 ,6]的特点被广为
认可 ,目前 , ISSR标记已被广泛应用于玉米 、油菜 、
小麦 、水稻和大豆等许多作物的品种鉴定 、系统分
类 、遗传多样性检测 、基因定位和遗传图谱构建等研
究中[ 7-11] 。杭焱等[ 13]应用 ISSR标记分析了华山新
麦草种质的遗传多样性 ,但应用 ISSR标记技术对新
麦草种质的遗传多样性的研究还未见报道。本研究
收集了6个国家的15份新麦草种质材料 ,运用 ISSR
分子标记技术对其遗传多样性进行研究 ,旨在揭示
新麦草种质资源的亲缘关系和分子遗传特点 ,为新
麦草种质的合理利用及新品种选育提供理论依据 。
1　材料和方法
1.1　供试材料
从美国国家植物种质资源库收集到6个国家的
15份新麦草种质材料(表 1),在北京市农林科学院
草业中心日光温室育苗 ,将过筛土与草炭按 2∶1混
合装入有孔塑料花盆(高 18 cm ,底径 16 cm ,口径 26
cm),3次重复 ,每重复 30株苗 ,选择健康生长植株 ,
每份材料采集 10株 ,每株取幼嫩叶片 1.5 ～ 2 g 左
右。用冰盒迅速带回实验室 ,转入-20℃冰箱保存
待用 。
表 1　种质材料名称及来源
Tab.1　Names and sources of germplasm and materials
序号
Serial number
种质材料编号
ID of germplasm
and materials
种质材料名称
Name of germplasm
and materials
来源
Countries or regions
XMC01 W6 13128 X93224 Xinjiang , China
XMC02 PI595184 X93257 Xinjiang , China
XMC03 PI440623 BOZOISK Ⅱ-3 Russia
XMC04 PI565053 DJ4156 Russia
XMC05 PI429801 689 Russia
XMC06 PI429807 1136 Russia
XMC07 PI619565 96N-238 Mongolia
XMC08 PI619484 96N-312 Mongolia
XMC09 PI476299 VINALL North Dakot , United States
XMC10 PI549118 BOZOISKY-SELECT Utah , United States
XMC11 PI565050 DJ-4152 Kazakhstan
XMC12 PI565074 AJC-603 Kazakhstan
XMC13 PI598618 VIR U-0134634 Kazakhstan
XMC14 PI598626 VIR U-0134627 Kazakhstan
XMC15 PI578854 SWIFT Saskatchewan , Canada
表 2　试验因子处理
Tab.2　Each treatment of experimental factors
试验因子
Experimental factors
因子处理
Treatments of experimental factors
1 2 3 4 5 6
dNTP/(mol/ L) 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4
TaqDNA 聚合酶/(U/25μL) 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4
Primers/(μmol/ L) 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
MgCl2/(mol/ L) 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0
1.2　新麦草叶片 DNA的提取
本试验采用 CTAB[ 12] (Cetyl trimethyl ammonium
bromide)法并加以改良 ,采取每重复供试材料的幼嫩
叶片 ,分别提取基因组DNA。
1.3　ISSR-PCR扩增
扩增程序为:94℃预变性 3 min;94℃变性 30 s ,
46 ～ 60℃退火 45 s ,72℃延伸 90 s ,进行 35个循环;
最后 72℃延伸 10 min ,然后置于4℃保存 。
1.4　ISSR-PCR反应体系的优化
ISSR反应的基本体系为 25 μL 反应体系 ,其中
包括 2 μL(2.5 mmol/L)dNTP , 0.2 μL(5 U/μL)
TaqDNA聚合酶 , 0.5 μL(10 μmol/L)Primers , 2.5 μL
10×PCR Buffer(Mg2+Free), 2 μL(25 mol/L)MgCl2 ,2
μL模板 DNA , 17.8 μL dd H2O[ 13 ,14] 。以此反应体系
为基础 ,反应条件优化包括 dNTP 、Taq酶浓度 、引物
浓度 、Mg2+浓度等 4个因子 。选取 3个因子保持不
变 ,按照一定梯度变化单一因子进行筛选 ,依此方法
对 4个因子进行逐个筛选 。各因子的浓度梯度处理
见表 2。
1.5　引物的筛选
在试验确定的最佳反应体系基础上 ,经过 PCR
扩增筛选 ,选出扩增条带较多 、信号强 、背景清晰的
引物 。
本试验 ISSR反应引物采用加拿大哥伦比亚大
108　 华　北　农　学　报 24卷
学(UBC)提供的序列 ,并由上海生工合成 ,共 25条 ,
相关信息见表 3。
表 3　本试验所选引物的相关信息
Tab.3　Information of ISSR primers in the experiment
引物编号
Primer name
引物序列(5′-3′)
Sequence(5′-3′)
退火温度
Tm
碱基长度
Primer length
802 ATATATATATATATATG 35.3 17
807 AGAGAGAGAGAGAGAGT 52.18 17
808 AGAGAGAGAGAGAGAGC 54.59 17
809 AGAGAGAGAGAGAGAGG 54.59 17
811 GAGAGAGAGAGAGAGAC 54.59 17
824 TCTCTCTCTCTCTCTCG 54.59 17
825 ACACACACACACACACT 52.18 17
826 ACACACACACACACACC 54.59 17
827 ACACACACACACACACG 54.59 17
834 AGAGAGAGAGAGAGAGYT 52.74 18
835 AGAGAGAGAGAGAGAGYC 55.02 18
840 GAGAGAGAGAGAGAGAYT 53.88 18
841 GAGAGAGAGAGAGAGAYC 56.16 18
842 GAGAGAGAGAGAGAGAYG 56.16 18
844 CTCTCTCTCTCTCTCTRC 56.16 18
845 CTCTCTCTCTCTCTCTRG 56.16 18
847 CACACACACACACACARC 56.16 18
855 ACACACACACACACACYT 53.88 18
856 ACACACACACACACACYA 53.88 18
857 ACACACACACACACACYG 56.16 18
859 TGTGTGTGTGTGTGTGRC 56.16 18
860 TGTGTGTGTGTGTGTGRA 53.88 18
864 ATGATGATGATGATGATG 48.19 18
873 GACAGACAGACAGACA 51.55 16
880 GGAGAGGAGAGGAGA 53.57 15
1.6　琼脂糖电泳检测
刚扩增出来 PCR产物 ,进行琼脂糖凝胶电泳 。
取5.0 μL 扩增产物 ,加入 2.0 μL 上样缓冲液 ,然后
在1%的琼脂糖凝胶上点样 ,5 V/cm电泳 1 ～ 1.5 h ,
最后在紫外凝胶成像系统上观察。
1.7　数据统计与分析
以扩增条带在相对迁移位置的有无 ,记为“1”或
“0”。按 Nei 的方法计算材料间的遗传相似系数
(GS),计算公式为:GS= 2Nij
N i +N j ,其中N ij为材料 i 和 j
共有的扩增条带数 ,Ni 为材料 i的扩增条带数 ,Nj 为
材料 j 的扩增条带数 ,根据GS值按不加权成对群算
术平均法(UPGMA)对新麦草种质材料进行遗传相似
性聚类。数据使用NTSYS-PC V2.1进行统计分析。
2　结果与分析
2.1　ISSR-PCR反应体系的优化
dNTP 浓度对 ISSR-PCR反应的影响作为 PCR反
应中的原料 ,dNTP 浓度一般在 0.4 mol/L 时没有清
晰条带出现 ,浓度过高抑制了扩增;低于 0.2 mol/L
时条带不清晰;在 0.25 mol/L 时扩增效果最佳(图
1-A)。在PCR反应中 ,酶的用量是影响 PCR的一个
重要因素 ,当酶的用量为 0.4 ～ 0.6 U/25μL 时条带
少且亮度不足 ,说明产物扩增较少;1.4 U/25μL 时
条带再次不清晰;0.8 ～ 1.2 U/25μL 时条带清晰稳
定(图 1-B)。引物浓度在 0.5 ～ 0.6 μmol/L时 ,1 000
bp以上几乎没有扩增出任何条带;当引物浓度在
0.1 ～ 0.3 μmol/L时浓度过低 ,其与 DNA模板结合位
点少 ,扩增产量下降 , 500 bp以下条带不清晰;0.4
μmol/L有清晰稳定的条带(图 1-C)。对 MgCl2 的 6
个处理中 0.5 ～ 1.5 mol/L 范围内多态性比较丰富 ,
1.5 mol/L时最佳(图1-D);浓度高于 2.0mol/L时条
带较少。
A.泳道 1～ 6分别代表 dNTP 浓度 0.15 , 0.20 , 0.25 ,0.30 , 0.35 , 0.40 mol/ L;B.泳道 1～ 6分别代表 TaqDNA 聚合酶浓度 0.4, 0.6 ,0.8 , 0.1 , 1.2 , 1.4
U/25μL;C.泳道 1～ 6分别代表Primers浓度 0.1 , 0.2 , 0.3 , 0.4 , 0.5, 0.6 μmol/ L;D.泳道 1～ 6分别代表MgCl2 浓度 0.5 , 1.0 , 1.5, 2.0, 2.5 , 3.0
mol/ L;M.DNA marker。
A.Lane 1 to 6 are 0.15 , 0.20 , 0.25 ,0.30, 0.35 , 0.40 mol/ L dNTP respectively;B.Lane 1 to 6 are 0.4 ,0.6 , 0.8 , 0.1 , 1.2 , 1.4U/25μL Taq DNA polymerase
respectively;C.Lane 1 to 6 are 0.1, 0.2 ,0.3 ,0.4 , 0.5 , 0.6μmol/ L random primers respectively;D.Lane 1 to 6 are 0.5 , 1.0, 1.5, 2.0 ,2.5 ,3.0mol/L MgCl2
respectively.M.DL5000 DNA marker.
图 1　不同因子的扩增结果
Fig.1　Amplification of different factors
5期 刘永财等:新麦草种质遗传多样性的 ISSR分析 109　
　　综上分析结果 ,新麦草 ISSR-PCR 最佳反应体
系:25 μL 的反应体系中含有 dNTP 2.5 μL 、Taq 酶
0.2μL 、Primers 1 μL 、Mg2+1.5μL 、2.5μL 10×Buffer 、
2 μL 模板 DNA和 ddH2O 15.3 μL。
2.2　引物的筛选
从25条引物中最终筛选出了条带清晰 ,多态性
较好的引物8条(表 4)。
表 4　引物筛选结果
Tab.4　Results of primer selecting
引物编号
Primer name
引物序列(5′-3′)
Secquence
(5′-3′)
退火温度
Tm
碱基长度
Primer
length
825 ACACACACACACACACT 52.18 17
834 AGAGAGAGAGAGAGAGYT 52.74 18
835 AGAGAGAGAGAGAGAGYC 55.02 18
840 GAGAGAGAGAGAGAGAYT 53.88 18
841 GAGAGAGAGAGAGAGAYC 56.16 18
845 CTCTCTCTCTCTCTCTRG 56.16 18
847 CACACACACACACACARC 56.16 18
859 TGTGTGTGTGTGTGTGRC 56.16 18
2.3　ISSR扩增位点多态性分析
利用已优化好的 ISSR-PCR反应体系对 15份新
麦草种质材料进行遗传多样性分析 ,通过 1%琼脂
糖凝胶电泳检测 ,结果见图 2。
15份新麦草种质材料经过 8 个引物扩增共获
得84个扩增位点 ,其中多态性位点 72个 ,平均多态
性比率为 85.7%,每个引物的扩增位点为8 ～ 13个 ,
平均 10.5个 ,并且所选用的 8条引物基本上均能独
立地将15份新麦草种质材料区分开 ,充分说明供试
的新麦草种质材料间存在较大的遗传变异 ,具有丰
富的遗传多态性(表 5),进一步证实利用 ISSR分子
标记可以检测出新麦草种质材料间亲缘关系。
表 5　ISSR分子标记扩增结果
Tab.5　The results of ISSR amplication
引物
Primer
扩增总位点数
Total numbers
of polymorphism
bands
多态性位点数
Numbers of
polymorphism
bands
多态性比率/ %
The percent
of polymorphism
bands
825 13 11 84.62
834 10 9 90.00
835 12 11 91.67
840 13 12 92.31
841 8 5 62.50
845 10 9 90.00
847 9 7 77.78
859 9 8 88.89
　Sum 84 72 -
　Mean 10.5 9.0 85.7
　　利用筛选出的 8个 ISSR引物对 15份新麦草种
质材料的基因组 DNA 进行 PCR扩增 ,共获得的 84
个扩增位点 ,通过计算种质材料间的遗传相似系数
(GS 值),从表 6可以看出 15份新麦草种质材料间
的GS值变化范围在 0.440 5 ～ 0.904 8 ,其中 XMC09
与XMC10间的遗传相似性最高 ,GS值为 0.904 8 ,亲
缘关系最近;XMC02与 XMC04的遗传相似性最低 ,
GS值只有 0.440 5 ,亲缘关系最远。15份种质材料
中 ,各材料间 GS 值大于 0.9的占 0.95%,0.8 ～ 0.9
之间的占 4.76%,0.7 ～ 0.8之间的占20%,0.6 ～ 0.7
之间的占 37.1%,0.5 ～ 0.6之间的占32.3%,GS 值
小于 0.5的占 4.8%,说明供试种质材料间的遗传基
础较宽 ,大部分材料之间相对遗传距离较远。整体
GS值分布较大 ,遗传差异显著 ,遗传多样性丰富。
表 6　基于 ISSR标记的 15 份新麦草种质材料的相似性系数
Tab.6　Genetic similarity coefficients of 15 P.juncea germplasm based on ISSR analysis
种质材料序号
Serial number
of germplasm
and materials
XMC01 XMC02 XMC03 XMC04 XMC05 XMC06 XMC07 XMC08 XMC09 XMC10 XMC11 XMC12 XMC13 XMC14 XMC15
XMC01 1.0000
XMC02 0.7143 1.0000
XMC03 0.5476 0.6190 1.0000
XMC04 0.4643 0.4405 0.6786 1.0000
XMC05 0.5595 0.5833 0.6071 0.7619 1.0000
XMC06 0.5000 0.5000 0.5714 0.6071 0.7024 1.0000
XMC07 0.5238 0.5714 0.5952 0.7262 0.7500 0.7143 1.0000
XMC08 0.5357 0.5595 0.5833 0.7857 0.6905 0.6548 0.8214 1.0000
XMC09 0.5476 0.5714 0.5238 0.6548 0.6071 0.5000 0.5952 0.6548 1.0000
XMC10 0.5952 0.5952 0.5714 0.6310 0.5595 0.5476 0.5952 0.6786 0.9048 1.0000
XMC11 0.6310 0.6071 0.5595 0.6667 0.6429 0.6071 0.6548 0.7143 0.6548 0.7024 1.0000
XMC12 0.5833 0.5833 0.5357 0.6667 0.6905 0.6548 0.7024 0.7143 0.6548 0.6548 0.8095 1.0000
XMC13 0.6190 0.6190 0.5476 0.7024 0.7024 0.6429 0.6905 0.7262 0.6190 0.6190 0.8452 0.8452 1.0000
XMC14 0.5595 0.5357 0.5833 0.7619 0.7143 0.6310 0.6786 0.6905 0.5595 0.5357 0.7857 0.7381 0.7976 1.0000
XMC15 0.5357 0.5595 0.5833 0.5952 0.6429 0.6310 0.7500 0.6667 0.8214 0.7500 0.6429 0.6429 0.6071 0.6190 1.0000
110　 华　北　农　学　报 24卷
图中数字 1～ 15分别代表 XMC01-XMC15种质材料序号;M.DL5000 DNA marker。
Number 1-15 in figure represented the serial numbers XMC1-XMC15 of germplasm and materials respectively;M.DL5000 DNA marker.
图 2　引物 834 电泳扩增图谱
Fig.2　Results of PCR amplication using primer 834
2.5　聚类分析
根据 ISSR标记计算的遗传相似系数矩阵 ,按
UPGMA法构建了材料间的遗传关系聚类图 。结果
表明 , ISSR标记能将 15份新麦草种质区分开来 ,根
据遗传相似系数进行聚类分析表明(图 3),以相似
系数 0.65为标准 ,15份新麦草种质可分为四大类
群:第一类包括来自于美国的 XMC09 、XMC10与加
拿大的 XMC15;第二类包括来自于俄罗斯的
XMC04 、XMC05 、XMC06 ,蒙古的 XMC07 、XMC08 、哈萨
克斯坦的 XMC11 、XMC12 、XMC13 、XMC14;第三类包
括俄罗斯的 XMC03;第四类包括中国的 XMC01 、
XMC02。由此结果可以看出 ,多数来源地相同的种
质表现出较为密切的亲缘关系 ,聚于同一类的新麦
草种质材料具有一定的地域性 。
图 3　15 份新麦草种质材料基于遗传
相似系数的 UPGMA 聚类图
Fig.3　UPGMA-derived dendrogram of 15 Psathyrostachys
juncea germplasm based on genetic similarity coefficients
3　讨论
ISSR分子标记技术已广泛应用于农作物 、牧草
等种质资源的遗传多样性分析研究中 ,取得了稳定
的效果。特别是在引物筛选中 ,尚海英等[ 14]在黑麦
草属植物研究中 ,从 35 条 ISSR 引物中筛选出扩增
谱带清晰的 7 条引物 ,占 20%;杭焱等[ 13]在华山新
麦草的研究中 ,从 100 条 ISSR引物中筛选出了 12
条 ,占 12%;刘丽等[ 15]在野牛草的研究中 ,从 50条
ISSR引物中筛选出 7 条 ,均能得到清晰的扩增产
物 ,尽管如此 ,由于其具有稳定性好 ,多态性高的显
著优点 , ISSR仍然是评价黑麦属遗传多样性的一种
有效分子标记技术 。
在基因组 DNA的提取过程中 ,对传统的 CTAB
方法进行了改良 ,在去除蛋白过程中加入与氯仿等
体积的饱和酚 ,有效地去除了蛋白 ,并对 DNA 进行
了二次抽提达到了良好的效果 ,为试验的顺利进行
提供了保证 。通过针对 dNTPs 、Taq 酶 、引物 、Mg2+
等浓度因子的优化 ,建立了一个稳定的新麦草 ISSR
扩增体系 ,能够获得比较理想的扩增图谱。最终试
验结果表明 ,筛选出的 8 条 ISSR引物在 15份新麦
草种质材料中 ,共获得 84个扩增位点 ,其中具多态
性的扩增位点有 72个 ,平均多态性比率达 85.7%。
杨艳等[ 16]完成了新麦草遗传多样性等位酶分析 ,测
定的 6 个酶系统中确定了 9个等位酶点 ,多态位点
平均值达 90.4%。ISSR标记和等位酶分析的结果 ,
均表明新麦草种质资源具有丰富的多态性 。
从分子水平来说 ,遗传距离的变幅越大 ,说明其
遗传分化越大 ,遗传多样性高 。从本研究的结果来
看 ,15份新麦草种质材料间的遗传相似系数最大的
为 0.904 8 ,最小的为 0.440 5 ,表明新麦草在遗传进
化过程中 ,随着时空的变化 ,其基因组 DNA 发生变
异 ,从而构成了丰富的新麦草种质资源基因库。采
用遗传相似距离进行 UPGMA聚类分析 ,从聚类图
上看多数来源地相同的种质表现出较为密切的亲缘
关系 。范彦等[ 17]通过聚类分析把 28份扁穗牛鞭草
分为 2类 ,同一地区的扁穗牛鞭草品种(系)基本聚
在同一类 ,呈现出具有一定的地域性分布规律。本
试验供试的种质材料中来自北美的 3份材料被聚为
一类 ,尤其是来自美国的 XMC09 、XMC10遗传相似
系数高达 0.9048 ,表明其亲缘关系极近。来自俄罗
斯的 XMC04 、XMC05 、XMC06 , 蒙 古的 XMC07 、
XMC08 、哈萨克斯坦的 XMC11 、XMC12 、XMC13 、
XMC14 ,均属于亚洲中部和欧亚大陆北部的地区 ,被
5期 刘永财等:新麦草种质遗传多样性的 ISSR分析 111　
聚为一类。来自中国新疆的 2份种质相聚为一类 。
来自俄罗斯的 XMC03被单独聚为一类 ,说明其遗传
分化较大 ,可能与植物生长的当地环境也有一定的
关系 。
新麦草种质的遗传基础广阔 ,遗传距离大 ,在基
因型表现特异性的同时 ,又有较强的地域性 。在进
行新麦草杂交育种时 ,应尽可能选择亲缘关系较远
的育种材料 ,以便杂交后代有更多机会出现理想的
性状组合 ,培育优异的新麦草新品种。
参考文献:
[ 1] 　李治强.坝上高原牧草新秀—新麦草[ J] .河北畜牧兽
医 , 2001 , 17(8):33-35.
[ 2] 　谷安琳 , Larry Holzworth , 云锦凤.新麦草在内蒙古干旱
草原的建植试验[ J] .中国草地 , 1994(5):12-14.
[ 3] 　王　勇 ,徐春波 ,松　梅.我国新麦草属牧草研究进展
[ J] .中国草地 , 2005 , 27(2):66-71.
[ 4] 　Zietkiewicz E , Rafalski A , Labuda D , et al.Genome finger-
printing by simple sequence repeat(SSR)-anchored poly-
merase chain reaction amplification[ J] .Genomics , 1994 , 20:
176-183.
[ 5] 　McGregor C E , Lambert C A , Grey ling M M , et al.A com-
parative assessment of DNA fingerprinting techniques(RAPD ,
ISSR , AFLP and SSR) in tetraploid potato(Solanum tubero-
sum L.)germplasm [ J] .Euphytica , 2000 , 113:135-144.
[ 6] 　Wolhf K , Zietkiewicz E , Hofstra H , et al.Identification of
chrysanthemum cultivars and stability of fingerprint patterns
[ J] .Theor Appli Genet , 1995 , 91:439-447.
[ 7] 　Femandez M E.Figueiras A M , Benlto C.The use of ISSR and
RAPD markers for detecting DNA polymorphism.Genotype i-
dentification and genetic diversity among barley cultivars with
known origin[ J] .Theoretical and Applied Genetics , 2002 ,
104:845-851.
[ 8] 　Joshi S P, Gupta V S.Aggarwal R K , et al.Genetic diversity
and phylogenetic relationship as revealed by inter sequence
repeat(ISSR)polymorphism in the genus Oryza[ J] .Theoreti-
cal and Applied Genetics.2000 , 100:1311-1320.
[ 9] 　Nagaoka T , Ogihara Y.Applicability of inter-simple sequence
repeat polymerphisms in wheat for use DNA as markers in-
comparison to RFLP and RAPD markers[ J] .Theoretical and
Applied Genetics , 1997 , 94:597-602.
[ 10] 　Kojima T , Nagaoka T , Noda K , et al.Genetic linkage map of
ISSR and RAPD markers in eikorn wheat in relation to that
of RFLP markers[ J] .Theoretical and Applied Genetics ,
1998 , 96:37-45.
[ 11] 　Charters Y M , Robertson A ,Wilkinson M J , et al .PCR anal-
ysis of oilseed rape cultivars(Brassica napus L.ssp.Oleifer-
a)using 5′-anchored simple sequence repeat(SSR)primers
[ J] .Theoretical and Applied Genetics , 1996 , 92:442-447.
[ 12] 　杭　焱 , 金　燕 ,卢宝荣.濒危植物华山新麦草的遗传
多样性及其保护[ J] .复旦学报:自然科学版 , 2004 , 43:
2:260-265.
[ 13] 　王关林 , 方宏筠.植物基因工程[ M] .北京:科学出版
社 , 2002:744.
[ 14] 　尚海英 , 郑有良 ,魏育明 , 等.应用 ISSR标记研究黑麦
属植物遗传多样性[ J] .西南农业学报 , 2004 , 17(3):
273-277.
[ 15] 　刘　莉 , 邓春婷 ,包满珠.野牛草实生群体多样性的表
型及 ISSR分析[ J] .草业科学 , 2008 , 25(1):100-105.
[ 16] 　杨　艳 , 韩建国 , 孙　彦 , 等.新麦草遗传多样性等位
酶分析[ J] .草业科学 , 2007 , 24(8):59-63.
[ 17] 　范　彦 ,李　芳.扁穗牛鞭草种质遗传多样性的 ISSR
分析[ J] .草业学报 , 2007 , 16(4):76-81.
112　 华　北　农　学　报 24卷