全 文 ：收稿日期:2014-09-09
基金项目:南宁市“科技计划项目”(20123113) ;国家中药材扶持资金项目(工信消费简函［2010］138 号)
作者简介:姚绍嫦(1980-) ，女，硕士，高级工程师，研究方向:药用植物组织培养技术;Tel:0771-5610462，E-mail:yaoshaochang@ 163. com。
滇桂艾纳香组培快繁技术体系的研究
姚绍嫦1，谭文明2，蓝祖栽1，利荣欢2，凌征柱1
(1. 广西壮族自治区药用植物园，广西 南宁 530023;2. 广西万寿堂药业有限公司，广西 南宁 530219)
摘要 目的:探索滇桂艾纳香组培快繁技术体系的最佳培养条件。方法:以滇桂艾纳香的嫩茎段为外植体，采
用正交试验设计方法优化增殖培养基，建立组培快繁体系。结果:0. 1% HgCl2 溶液灭菌 10 min 效果最佳;茎段丛
生芽诱导培养基以 MS + 6-BA 2. 0 mg /L + KT 1. 0 mg /L + NAA 0. 5 mg /L最佳，诱导率达 90%;6-BA是影响增殖的
主要因素，达显著水平，NAA与 KT效应不显著;芽增殖的最适培养基为 MS + 6-BA 2. 5 mg /L + KT 1. 5 mg /L + NAA
0. 2 mg /L，增殖系数为 7. 12;生根培养基用 1 /2MS + NAA 0. 5 mg /L 最好，生根率 100%，移栽成活率 93. 33%。结
论:该试验得到的组培快繁技术体系可在短时间内提供大量种苗，并为规模化生产种苗提供技术指导。
关键词 滇桂艾纳香;组培快繁;正交试验设计
中图分类号:Ｒ282. 2 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2015)04-0679-04
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2015. 04. 006
滇桂艾纳香 Blumea riparia (Bl. )DC. 为菊科艾
纳香属植物，又名华艾纳香、管芽(壮语) ，《中国植
物志》称之为假东风草。在我国主要分布于云南西
南至东南部、广西西南部(百色、德保、龙津)及广东
西南部〔1〕。广西万寿堂药业有限公司利用滇桂艾
纳香为主要原料，研制生产出对妇科血症具有良好
药效的中成药“滇桂艾纳香胶囊”和拥有独立自主
知识产权的妇科特效新药“伊血安颗粒”。随着产
品市场需求的持续增长，对原材料滇桂艾纳香的需
求也越来越大，造成大量野生滇桂艾纳香被滥采，野
生资源逐渐萎缩，药材的质量也不断下降，不能满足
不断扩大的市场对原材料的需求。滇桂艾纳香主要
依靠种子进行繁殖，但种子寿命较短，发芽率极低，
在传播过程中很难遇到能够满足其发芽生根的环境
条件〔2〕。因此，对滇桂艾纳香进行人工繁育与栽培
有重要意义。笔者以滇桂艾纳香带芽嫩茎段为外植
体，建立滇桂艾纳香的离体再生体系，采用正交试验
设计方法对滇桂艾纳香丛生芽的诱导、增殖、生根培
养的影响进行探讨，以期为在离体细胞水平上对滇
桂艾纳香进行遗传改良、规模化繁殖和生产次生代
谢产物等研究应用奠定基础。
1 材料与方法
1. 1 试验材料 以种植于广西壮族自治区药用植
物园引种繁育圃的滇桂艾纳香一年生植株的带腋芽
嫩茎段为试验材料。经广西壮族自治区药用植物园
董青松副主任技师鉴定为菊科植物滇桂艾纳香
Blumea riparia (Bl. )DC. 。
1. 2 外植体灭菌与接种 将生长旺盛、无病虫害
的滇桂艾纳香一年生枝条剪下，剪成带一个腋芽的
嫩茎段(约 3 ～ 4 cm) ，并剪掉叶柄与叶片，放入
0. 1%洗洁精溶液中浸泡，并用软毛刷仔细刷洗材料
表面以除去表面污垢，流水冲洗约 15 min，吸干表面
水分。在超净工作台上，用 0. 1% HgCl2溶液分别进
行灭菌 6、8、10、12 min，然后用无菌水浸洗 4 次，每
次 3 min，再用无菌吸水纸将水分吸干。接种时，将
嫩茎段切成带一个腋芽的嫩茎段(约 2 ～ 3 cm) ，斜
插入初代诱导培养基上培养，每种灭菌时间接种 20
瓶，每瓶接种 2 个嫩茎段，比较不同时间的 HgCl2 处
理对滇桂艾纳香嫩茎段的灭菌效果。
1. 3 初代诱导培养 将外植体接种到附加不同浓
度配比的 6-苄氨基嘌呤(6-BA)、激动素(KT)与萘
乙酸(NAA)的诱导培养基中，每个组合接种 15 瓶，
每瓶接种 2 个嫩茎段。培养 30 d，观察比较腋芽诱
导率，通过芽的生长状况确定最佳培养基。
1. 4 继代增殖培养 切取初代诱导培养中萌发的
1. 0 cm左右、生长相对一致的单芽，转接到继代培
养基中进行增殖培养，采用正交试验设计方法(表
1) ，共设计 9 组，每组接种 15 瓶，每瓶 2 个芽，重复
3 次，培养 20 d比较增殖系数与生长情况以确定最
佳的增殖培养基。
表 1 增殖培养基 L9(3
4)正交试验
水平
因素 /(mg /L)
A(6-BA) B(KT) C(NAA)
1 1. 5 0. 5 0. 2
2 2. 0 1. 0 0. 4
3 2. 5 1. 5 0. 8
1. 5 生根培养 选取生长健壮、高度一致的芽苗
·976·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 38 卷第 4 期 2015 年 4 月
转接到生根培养基上进行培养。以 1 /2MS 为基本
培养基，分别添加不同浓度及配比的 NAA、IBA 诱
导生根。每个组合接种培养基 15 瓶，每瓶 2 个芽。
25 d后观察比较不同处理的生根率及生根情况。
1. 6 培养条件 初代诱导培养和继代增殖培养的
基本培养基为 MS，生根培养的基本培养基为 1 /2
MS，附加蔗糖 2. 5%和琼脂 0. 5%，121 ℃灭菌 20
min。培养条件为(26 ± 2)℃、光照强度 2 000 Lx、光
照时间 10 h /d。
1. 7 炼苗移栽 生根培养 30 d 后，把生根的瓶苗
的瓶盖揭开，炼苗 3 d，再取出幼苗，洗去根部的琼
脂，栽植于保水能力较好的粘土中，置于遮光度
65% ～75%的大棚内培养，无直射光，20 d后统计移
栽成活率。
2 结果与分析
2. 1 无菌外植体的获得 从表 2 可见，用 0. 1%
HgCl2溶液灭菌不同时间对滇桂艾纳香嫩茎段污染
率和成活率有较大的影响。随着处理时间的增加，
污染率逐渐降低，成活率呈先上升后下降的趋势，灭
菌 12 min 时污染率最低，但材料的成活率也最低，
分别为 20. 00%与 46. 88%。综合考虑灭菌效果与
材料成活率，滇桂艾纳香嫩茎段的灭菌时间宜采用
10 min，既可以很好地对外植体灭菌，又不造成外植
体的严重伤害。
2. 2 生长调节剂对滇桂艾纳香嫩茎段启动培养的
表 2 不同灭菌时间对滇桂艾纳香嫩茎段的灭菌效果
灭菌时间 /min 嫩茎段 /个 污染率 /% 成活率 /%
6 40 52. 50 52. 38
8 40 45. 00 66. 67
10 40 30. 00 83. 33
12 40 20. 00 46. 88
影响 从表 3 可见，6-BA、KT 与 NAA 三者配合使
用，对嫩茎段腋芽的诱导率有明显的促进作用，当
6-BA浓度为 2. 0 mg /L时，腋芽萌发较早，接种后 7
d开始启动。随着 6-BA浓度的增大，芽萌发率先升
高后降低，在 6-BA 2. 0 mg /L，与 KT 1. 0 mg /L、NAA
0. 5 mg /L配合使用时，腋芽萌发率达到最大值，能
在叶腋同时萌发出 2 ～ 3 个芽，且芽较粗壮、生长迅
速、叶大、绿色(图 1-A)。当 6-BA 浓度为 1. 0 mg /
L，腋芽萌发较晚，且芽诱导率较低。当 6-BA 浓度
增大到 4. 0 mg /L 时芽萌发率反而降低，特别是与
KT 1. 5 mg /L、NAA 0. 2 mg /L 组合时，腋芽萌发最
晚，芽诱导率较低，且芽较细弱、生长缓慢、出现轻微
玻璃化。在 6-BA 2. 0 mg /L 与不同浓度 NAA 组合
时，随着 KT浓度的增大，诱导率先升高后降低，在
1. 0 mg /L 时芽诱导率最高。当 NAA 浓度为 0. 5
mg /L时，配合不同浓度的 6-BA 与 KT，与 NAA 0. 1
mg /L和 0. 2 mg /L相比均获得较高的芽诱导率。在
不同组合的所有培养基上，芽基部切口处会出现少
量愈伤组织，但是未见愈伤组织分化出芽。综合出
表 3 6-BA、KT和 NAA组合对滇桂艾纳香嫩茎段启动培养的影响
处理号
6-BA /
(mg /L)
KT /
(mg /L)
NAA/
(mg /L)
接种数
/个
启动时间
/d
出芽外植
体数 /个
芽诱导
率 /% 生长状况
1 1. 0 0. 5 0. 1 30 9 12 40. 00 芽较细弱、生长缓慢
2 1. 0 1. 0 0. 2 30 9 14 46. 67 芽较细弱、生长缓慢
3 1. 0 1. 5 0. 5 30 9 15 50. 00 芽较细弱、生长缓慢
4 2. 0 0. 5 0. 2 30 7 22 73. 33 芽粗壮、生长迅速
5 2. 0 1. 0 0. 5 30 7 27 90. 00 芽粗壮、生长迅速
6 2. 0 1. 5 0. 1 30 7 25 83. 33 芽粗壮、生长迅速
7 4. 0 0. 5 0. 5 30 7 18 60. 00 芽粗壮、生长迅速
8 4. 0 1. 0 0. 1 30 7 17 56. 67 芽粗壮、生长迅速
9 4. 0 1. 5 0. 2 30 10 14 46. 67 芽较细弱、生长缓慢
图 1 滇桂艾纳香嫩茎段再生植株
A. 嫩茎段启动培养形成的芽 B. 丛生芽增殖 C. 生根苗 D. 移栽成活的试管苗
·086· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 38 卷第 4 期 2015 年 4 月
表 4 滇桂艾纳香增殖培养基的正交试验设计结果
序号 A B C 误差列 增值系数
1 1. 50 0. 50 0. 20 1 2. 38
2 1. 50 1. 00 0. 40 2 2. 53
3 1. 50 1. 50 0. 80 3 2. 67
4 2. 00 0. 50 0. 40 3 4. 62
5 2. 00 1. 00 0. 80 1 5. 18
6 2. 00 1. 50 0. 20 2 5. 72
7 2. 50 0. 50 0. 80 2 6. 17
8 2. 50 1. 00 0. 20 3 6. 48
9 2. 50 1. 50 0. 40 1 5. 83
K1 7. 58 13. 17 14. 58 13. 39
K2 15. 52 14. 19 12. 98 14. 42
K3 18. 48 14. 22 14. 02 13. 77
Ｒ 3. 63 0. 35 0. 53 0. 34
表 5 滇桂艾纳香增殖培养基方差分析表
因素 偏差平方和 自由度 F比 F临界值 显著性
A 21. 18 2. 00 117. 01 19. 00 *
B 0. 24 2. 00 1. 32 19. 00
C 0. 44 2. 00 2. 43 19. 00
Error 0. 18 2. 00
芽的启动时间、芽诱导率及生长状况考虑，认为适宜
滇桂艾纳香丛芽诱导的培养基为 MS + 6-BA 2. 0
mg /L + KT 1. 0 mg /L + NAA 0. 5 mg /L。
2. 3 继代增殖培养 为了进一步研究 6-BA、KT与
NAA三种生长调节剂对丛生芽增殖的效果，采用正
交试验设计的方法，分别计算出各水平之和以及他
们相差的最大值———极差(Ｒ 值) ，得到了各因素影
响的主次顺序(表 4)。根据 Ｒ 值的大小，各因素对
增殖系数的影响程度依次为 A ＞ C ＞ B，即 6-BA ＞
NAA ＞ KT，再综合各水平的均值来分析，可以得出
的结论为:A3B3C1 为本试验获得的较佳增殖培养基
配方，即在 MS 基本培养基中附加 6-BA 2. 5 mg /L、
KT 1. 5 mg /L、NAA 0. 2 mg /L，可以获得最高的增殖
系数。方差分析结果表明(表 5) ，A 达到了显著水
平(P ＜ 0. 05) ，而 B、C的效应均未达到显著水平，说
明 6-BA对丛生芽的增殖作用达到显著水平，KT 和
NAA对丛生芽的增殖作用均不显著。为了使得实
验结果更加准确，采用 6-BA 2. 5 mg /L、KT 1. 5 mg /
L、NAA 0. 2 mg /L 的组合进行了验证，结果表明以
此组合进行继代增殖可获得较高的增殖系数
(7. 12) ，且丛生芽生长迅速、叶大、叶色翠绿、无玻
璃化现象(图 1-B)。
2. 4 生根与移栽 试验结果表明(表 6) ，滇桂艾纳
香生根比较容易，在不同处理中，生根率均达
100%。从移栽成活率来看，不同处理的试管苗移栽
成活率不同，添加 NAA获得更好的成活率。对比发
现，在 1 /2MS + NAA 0. 5 mg /L中，不定根生长最快，
并且发根较多、生根最快、生长健壮(图 1-D)。
表 6 不同培养基诱导试管苗生根的效果
处理号 培养基 生根率 /% 移栽成活率 /% 生长状况
1 1 /2MS + NAA 0. 2 mg /L 100 80. 00 根长、5 ～ 6 条、生长较快
2 1 /2MS + NAA 0. 5 mg /L 100 93. 33 根长、5 ～ 6 条、生长最快
3 1 /2MS + IBA 0. 2 mg /L 100 73. 33 根短、3 ～ 5 条、生长慢
4 1 /2MS + IBA 0. 5 mg /L 100 70. 00 根短、3 ～ 5 条、生长慢
3 讨论
在植物组织培养中，促进植物离体培养物不定
芽形成的常用的植物生长调节剂是 NAA、BA 和
KT，他们配合使用能促进不定芽的形成，而且对所
形成的不定芽素质及移栽成活率也有显著的影
响〔3〕。本试验利用 6-BA、KT与 NAA三种不同生长
调节剂组合成功建立了滇桂艾纳香快繁体系，发现
适当高浓度细胞分裂素(6-BA + KT)与低浓度生长
素(NAA)配合使用时，有利于腋芽丛生芽的诱导与
增殖。6-BA和 KT 虽然对芽分化频率和分化芽的
生长表现出同样的影响，但是从芽诱导率及增殖系
数的正交试验结果来看，6-BA的作用比 KT显著，6-
BA是主导因素，对丛生芽的诱导与增殖起着决定性
的作用，而 KT 则起到促进丛生芽的诱导与增殖效
果的作用，这与曹新祥〔3〕在麝香石竹茎段外植体的
芽分化、莫荣达等〔4〕在苎麻茎叶外植体的芽分化中
的结果类似。同时，笔者还发现生长素对丛生芽诱
导与增殖也起主要作用，NAA 浓度小于 0. 5 mg /L
更有利于诱导率和增殖系数的提高，在同属植物艾
纳香〔5〕与馥芳艾纳香〔6〕的研究报道也证明了这一
点。
韦鹏霄等〔7〕用滇桂艾纳香茎尖、叶片、嫩茎、花
苞、老茎作为外植体，比较了不同灭菌处理与不同培
养基对愈伤组织诱导的效果，结果表明茎尖与嫩茎
的灭菌效果最好，愈伤组织诱导率最高。杨仕冠
等〔8〕用艾纳香茎段为外植体成功建立了其组培快
繁技术。在参考了前人的研究以及综合考虑了各种
因素的基础上，笔者选择用嫩茎段作为外植体，通过
直接诱导丛生芽的方式进行以芽繁芽，以降低组培
过程中种质变异的风险。
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笔者反复验证了正交试验设计结果，不定芽在
MS +6-BA 2. 5 mg /L + KT 1. 5 mg /L + NAA 0. 2 mg /
L中培养 20 d可获得较高的增殖系数(7. 12) ，且丛
生芽生长迅速、叶大、叶色翠绿、无玻璃化，经生根培
养 25 d后移栽成活率达 93. 33%，生根苗移栽成活
后即可移栽大田种植，因此，本试验建立的滇桂艾纳
香组培快繁体系具有周期短、成本低、扩繁系数大、
成活率高等优点，适合在生产上迅速推广应用。
参 考 文 献
［1］林镕 . 中国植物志［M］．第 75 卷 . 北京:科学出版社，
1979:13.
［2］袁媛，庞玉新，王文全，等 . 中国艾纳香属植物资源与民
族药学研究［J］．热带农业科学，2011，31(4) :24-27.
［3］曹新祥 . NAA、BA和 KT对麝香石竹不定芽形成的影响
［J］．绍兴文理学院学报，2001，21(2) :32-36.
［4］莫荣达，黄纪生 . 细胞分裂素对苎麻茎叶外植体芽分化
的影响［J］．植物生理学通讯，1982，3:39-41.
［5］严敏，刘艳，汤洪敏 . 艾纳香的组织培养［J］．江苏农业
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［6］姚绍嫦，潘丽梅，蓝祖栽，等 . 馥芳艾纳香快繁技术体系
的建立［J］．中草药，2012，43(6) :1182-1186.
［7］韦鹏霄，张明珍，岑秀芬，等 . 滇桂艾纳香的灭菌和愈伤
组织诱导［J］．广西热带农业，2007，(2) :25-29.
［8］杨仕冠，杨美纯 . 艾纳香组织培养技术研究［J］． 现代
农业科技，2012，18:151-153.
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