全 文 ：世纪 80年代开始 ,有不少药学工作者对沙苑子进行了较为集中
的研究 , 并发现其对循环系统 、肝 、肾 、免疫系统等有一定的药理
作用 [ 9 , 10] 。 沙苑总黄酮 (FlavonoidsofAstragalusComplanatus,
FAC)是沙苑子的乙醇提取物 , 主要成分是黄酮。先前的药理研
究表明:沙苑子黄酮具有改善血液流变学指标 、抗肝纤维化 、诱导
白血病细胞凋亡 、调节免疫功能等作用 [ 2, 3] 。 根据中医理论认
为:乳腺癌的发病与肾虚有一定关系 , 而沙苑子黄酮具有益肾的
作用。因此 , 本文推测沙苑子黄酮具有抗乳腺癌的作用 , 以人乳
腺癌细胞株 MCF-7作为研究对象 ,探讨沙苑子黄酮对人乳腺癌
的作用及其机制。
近年来研究表明 [ 11 ～ 13] ,核转录因子 кB(nuclearfactor-кB,
NF-кB)是一种重要的转录因子蛋白 , 对多种基因表达上调起
关键作用 ,在肿瘤的发病机制中发挥重要作用。 NF-кB有抑制
细胞发生凋亡的作用 , 而许多抗肿瘤药的作用机理正是诱导了
肿瘤细胞凋亡。沙苑子黄酮作用之前 , MCF-7细胞中 NF-кB
表达呈阳性 , 主要定位于癌细胞的细胞核中;沙苑子黄酮作用之
后 , NF-кB阳性的表达显著降低 ,主要定位于 MCF-7细胞的胞
质。因此沙苑子黄酮具有抑制 NF-кB在 MCF-7种表达的作
用 , 因此可以诱导细胞凋亡。
本文首先通过 SRB法筛选法 , 确定对 MCF-7增殖抑制作用
最佳浓度梯度以及最佳时间点。再用最佳浓度梯度和作用时间
点处理 MCF-7细胞 ,检测细胞凋亡 、凋亡相关基因以及蛋白表
达。结果显示 , 沙苑子黄酮对 MCF-7具有明显的增殖抑制作
用 , 最高增殖抑制率达到 87.73%。 沙苑子黄酮具有显著的诱导
MCF-7凋亡的作用 , 早期凋亡率达 71.46%, 晚期凋亡率为
4.16%。通过最佳作用浓度沙苑子总黄酮作用有效时间后 , NF
-κB表达与浓度梯度及作用时间呈负相关。令人感兴趣的是这
种基因表达结果正好与流式细胞分析结果相吻合 , 提示沙苑子黄
酮作为治疗乳腺的药物之一 , 值得进一步研究。
参考文献:
[ 1 ] 　初里楠 ,李　竹 , 张　燕 , 等.2003～ 2007年北京市西城区居民疾
病死因分析 [ J] .中国卫生统计 , 2009, 26(2):193.
[ 2 ] 　石　鹏 ,孟海英 , 韩晓燕 ,等.北京朝阳区居民 2006年主要死因及
寿命损失分析[ J] .中国预防医学杂志 , 2009, 10(1):19.
[ 3 ] 　张　熠 ,韦翠萍 ,顾振纶 ,等.沙苑子黄酮对 S180小鼠的抑瘤作用及
对其免疫功能的影响 [ J] .中草药 , 2006, 37(8):1221.
[ 4 ] 　韦翠萍 ,张　熠 , 梁中琴 ,等.中药提取物 FAC的抗肿瘤作用及其
机制初步研究[ J] .中国野生植物资源 , 2005, 24(6):55.
[ 5 ] 　周思朗 ,屈艳妮 , 张　健 ,等.一种新的细胞计数方法———磺基罗丹
明 B染色法 [ J] .细胞与分子免疫学杂志 , 2005, 21(5):663.
[ 6 ] 　周思朗 ,屈艳妮 ,张　健 , 等.SRB法与 MTT法细胞计数应用比较
[ J].中国现代医药杂志 , 2005, 15(17):2615.
[ 7 ] 　刘　佳 ,沈　群 ,朱光荣 ,等.葛根提取物诱导 K562细胞凋亡 [ J] .
江苏医药 , 2009, 35(2):129.
[ 8 ] 　FrederickM.Ausubel.精编分子生物学实验指南 [ M] .科学出版
社 , 1998:223.
[ 9 ] 　谢梅林 ,朱路佳 ,刘春宇 ,等.沙苑子黄酮提取物调脂和保肝作用的
实验研究 [ J] .中国实验方剂学杂志 , 2003, 9(6):27.
[ 10] 　张卫民 ,钱学社 ,顾龚平.沙苑子的保健功效与药膳 [ J].中国野生
植物资源 , 2004, 23(5):6.
[ 11] 　胡　敏 ,李世拥.NF-κB与乳腺癌关系研究进展 [ J] .国外医学·
外科学分册 , 2001, 28(2):88.
[ 12] 　李宪孟 ,李　丽.NF-κB及其在肿瘤的作用 [ J] .广西医学 , 2003,
25(11):1266.
[ 13] 　张尔玺 ,丁国富 , 陈　丽 , 等.NF-κB与肿瘤的关系 [ J].农垦医
学 , 2003, 25(4):278.
收稿日期:2009-08-17;　修订日期:2009-12-08
基金项目:河南省科技厅重点科技攻关项目(No.062306100)
作者简介:李喜凤(1952-),女(汉族),河南郑州人 ,现任河南中医学院教
授 ,硕士研究生导师 ,主要从事中药新药及质量标准的研究工作.
蒲公英中阿魏酸的含量测定
李喜凤 ,余云辉 ,郝　哲 ,邱天宝 ,杜云锋
(河南中医学院 ,河南 郑州　450008)
摘要:目的 建立蒲公英中阿魏酸含量的测定方法。方法 色谱柱为 HypersilODS2 C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm),流动相
为甲醇 -冰乙酸 -水(30∶2∶ 68), 流速为 1.0 ml/min, 柱温为 30℃, 检测波长为 322 nm。结果 阿魏酸在 0.019 24 ～
0.240 5 μg范围内峰面积与进样量呈良好线性关系(r=0.999 9), 平均加样回收率为 98.60%。 结论 该方法简便 、准
确 、专属性强 、重复性好 , 可作为蒲公英的质量控制标准。
关键词:蒲公英;　阿魏酸
中图分类号:R284.2　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)05-1169-02
　　蒲公英为菊科植物蒲公英 TaraxacummongolicumHand.-
Mazz.碱地蒲公英 TaraxacumsinicumKitag.或同属数种植物的干
燥全草 , 具有清热解毒 、消肿散结 、利尿通淋之功效。临床用于乳
痈 、瘰疬 、目赤 、咽痛 、肺痈 、肠痈 、热淋涩痛等症 [ 1] 。 蒲公英中含
有多种成分 , 主要有倍半萜烯内酯 、三萜类 、酚酸类 、黄酮类 、类固
醇等 , 而其中以咖啡酸 、绿原酸 、阿魏酸为主的酚酸类化合物含量
最丰富。药理研究表明阿魏酸具有抗菌消炎 、抗肿瘤 、抗突变 、抗
血小板凝集和血栓 、增加免疫功能等作用 [ 2] 。但有关蒲公英中
阿魏酸的含量测定 , 研究报道较少。本实验采用 RP-HPLC法
对蒲公英中阿魏酸进行含量测定 ,以期为蒲公英药材及中成药制
剂的质量控制提供依据。
1　仪器与试药
DIONEX高效液相色谱仪包括 DIONEXP-680泵 、ASI-100
自动进样器 、PDA-100检测器 、CHROMELON工作站(美国 DI-
ONEX公司);YUPINGFA2004b型电子天平(上海越平科学仪器
有限公司);LDZA-0.8型低速自动平衡微型离心机(北京医用
离心机厂)。
阿魏酸对照品(批号:0773-9809)中国药品生物制品检定
所提供 。蒲公英药材为 2009-04采集于河南省内不同地区 , 经
河南中医学院生药学科陈随清教授鉴定为菊科植物蒲公英 Ta-
raxacummongolicumHand.-Mazz.的干燥全草。甲醇为色谱纯
·1169·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.5 时珍国医国药 2010年第 21卷第 5期
(天津四友), 水为娃哈哈纯净水 ,其余试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 色谱柱为 HypersilODS2 C18分析柱(4.6 mm×
250mm, 5 μm), (大连依利特科学仪器有限公司);流动相为甲
醇 -冰乙酸 -水(30∶2∶ 68);流速 1.0 ml/min;检测波长 322
nm;柱温 30 ℃;进样量:10μl。
2.2　对照品溶液的制备 精密称取阿魏酸对照品 1.202 5 mg于
5 ml容量瓶中 ,用 70%甲醇溶解并定容至刻度 ,摇匀 , 精密量取 1
ml, 置 25ml量瓶中 ,加 70%的甲醇至刻度 ,摇匀 , 即得(每毫升中
含阿魏酸 9.62 μg)。对照品色谱图见图 1。
图 1　对照品色谱图
2.3　供试品溶液的制备 取本品粗粉 1 g, 精密称定 ,置 50 ml具
塞锥形瓶中 , 加 1% NaOH溶液 20 ml, 密塞 , 摇匀 , 避光 , 放置 48
h。离心 ,取上清液 ,用 1 mol/L的盐酸调 pH 3 ～ 5, 有沉淀生成。
离心 , 取上清液 ,用乙醚萃取 3次 , 每次 10 ml。干燥沉淀 ,加乙醚
振摇 3次 ,每次 10ml, 滤过 ,合并滤液 , 避光 ,低温干燥 , 用 70%甲
醇定容至 10ml, 过 0.45 μm的滤膜 , 即得。供试品色谱图见图
2。
1.阿魏酸
图 2　供试品色谱图
2.4　线性关系考察 取上述对照品溶液 , 分别进样 2, 5, 10, 15,
20, 25μl测定阿魏酸的峰面积 , 以阿魏酸的进样量为横坐标 ,峰
面积为纵坐标 , 进行线性回归 , 得回归方程:Y=121.68X-0.68,
r=0.999 9,阿魏酸在 0.019 24 ～ 0.240 5 μg范围内具有良好的
线性关系。
2.5　精密度实验 精密吸取对照品溶液 10μl,重复进样 6次 ,记
录峰面积。结果阿魏酸峰面积的 RSD为 1.35%, 表明精密度良
好。
2.6　重复性实验 称取同一产地的蒲公英药材粉末 6份 , 每份 1
g, 精密称定 ,按 “ 2.3”项下的方法制备 6份供试品溶液 , 按上述
色谱条件测定 , 测得样品中阿魏酸峰面积的 RSD为 1.60%。
2.7　稳定性实验 按供试品溶液制备方法制备供试品溶液 , 于
0, 2, 4, 6, 8, 12 h分别进样 10 μl, 依照上述选择的色谱条件测定 ,
结果阿魏酸峰面积的 RSD为 1.30%,表明样品在室温下 12 h内
稳定。
2.8　加样回收率实验 精密称取样品 1 g, 共 6份 , 各精密加入阿
魏酸对照品溶液适量 ,按 “ 2.3”项下的方法制备供试品溶液 , 按
上述色谱条件测定。结果见表 1。
表 1　蒲公英中阿魏酸的加样回收率测定结果
样品
m/g
样品含量
m/μg
加入量
m/μg
实测值
m/μg
回收率
(%)
平均回收率
(%) RSD(%)
1.003 3 63.81 51.11 114.19 98.57
1.004 1 63.86 51.09 114.05 98.24
1.000 8 63.65 64.23 127.30 99.10 98.60 2.84
0.999 7 63.58 64.19 127.56 99.67
1.003 7 63.84 76.08 138.07 97.57
0.996 2 63.36 76.30 138.49 98.47
2.9　样品的含量测定 精密称取河南省内不同产地的蒲公英药
材粉末(过 24目筛)1 g, 按 “ 2.3”项下的方法分别制备供试品溶
液 , 进样 10 μl, 按上述色谱条件测定 , 记录色谱图 ,用外标法进行
计算样品中阿魏酸的含量。结果见表 2。
表 2　蒲公英中阿魏酸的含量测定结果
编号 产地 样品量 m/g 阿魏酸含量 C/mg· g-1
1 焦作博爱 1.000 7 0.068 5
2 焦作温县 1.003 8 0.065 4
3 南阳 0.996 3 0.064 2
4 驻马店 1.009 7 0.059 6
5 周口 0.998 1 0.060 9
6 信阳 1.002 9 0.056 1
3　讨论
3.1　提取溶剂的选择 有文献报道 [ 3]用 5%的甲酸甲醇作溶剂
超声提取阿魏酸。但由于蒲公英中阿魏酸含量较低 ,采用上述溶
剂阿魏酸含量迅速降低且杂质较多 , 易污染色谱柱 ,难以获得准
确的测定结果。该实验分别用水 、5%的甲酸甲醇溶液 、1%氢氧
化钠溶液对药材提取 , 考察不同溶剂对阿魏酸含量的影响。 结
果:用水作溶剂提取 , 阿魏酸含量较低 , 用 5%的甲酸甲醇溶液作
溶剂提取 ,杂质含量较大 , 而采用 1%氢氧化钠溶液作溶剂提取 ,
杂质较少 ,阿魏酸的含量最高。故本实验选用 1%氢氧化钠溶液
作为该样品的提取溶剂。
3.2　流动相的选择 实验中曾采用甲醇 -冰乙酸 -水(30∶3∶
67),甲醇 -冰乙酸 -水(30∶2∶68), 甲醇 -冰乙酸 -水(30∶1
∶69)流动相进行色谱分析 , 结果甲醇 -冰乙酸 -水(30∶2∶
68)分离效果好 , 峰形理想。故本实验采用甲醇 -冰乙酸 -水
(30∶2∶68)为流动相。
参考文献:
[ 1 ] 　国家药典委员会.中国药典 [ S] .北京:化学工业出版社 , 2005:
244.
[ 2 ] 　胡益勇 , 徐晓玉.阿魏酸的化学和药理研究进展 [ J] .中成药 ,
2006, 28(2):253.
[ 3 ] 　乔　明 ,向纯明.HPLC法对当归不同药用部位中阿魏酸含量测定
[ J] .中医药学刊 , 2005, 23(10):1892.
·1170·
时珍国医国药 2010年第 21卷第 5期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.5