全 文 ：China Pharmacy 2013 Vol. 24 No. 27 中国药房 2013年第24卷第27期
火绒草 Leontopodium leontopodioides（Willd.）Beauv.又名
雪绒花、薄雪草，为菊科火绒草属的多年生草本高山植物，原
产于西欧，在我国东北、华北也有广泛分布，是北方民间常用
中草药之一。其性寒，味微苦，入肾、膀胱二经，具有清热凉
血、益肾利水的功效，临床常用于治疗急慢性肾炎、蛋白尿、血
尿、糖尿病等[1-2]。现代药学研究发现，火绒草含有多种药理学
活性物质，包括挥发油类、黄酮类、萜类、甾体化合物以及微量
元素等。其中，黄酮类化合物木犀草苷和槲皮素具有多方面
的生物活性，如抗脂质过氧化、抗衰老、清除自由基、降低血脂
及血胆固醇、抗菌消炎、抗病毒、增强免疫功能等；有机酸如阿
魏酸和咖啡酸则具有增加冠脉血流量、保护缺血心肌、抗氧
化、抗炎等作用[3-5]。尽管火绒草的活性成分已经比较明确，但
其含量测定方法鲜见报道。因此，笔者建立了以高效液相色
谱（HPLC）法同时测定火绒草中 4种有效成分——咖啡酸、阿
魏酸、木犀草苷和槲皮素含量的方法，为有效控制该药材质量
及合理利用该植物资源提供参考依据。
1 材料
1.1 仪器
1100型HPLC仪，包括G1379A型真空脱气机、G1311A型
四元梯度泵、G1313A型自动进样器、G1315A型柱恒温箱、
G1315B型二极管阵列检测器、B04.03化学工作站（美国
Agilent公司）；BP211D型电子天平（德国 Sartorius公司）；
HN101-3A型电热鼓风干燥箱（南通沪南科学仪器有限公司）；
DK-98-1型电热恒温水浴箱（天津市泰斯特仪器有限公司）；
KQ-3200型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；SHB-
ⅢA型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；
RE-52AA型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）。
1.2 试剂
木犀草苷、咖啡酸、阿魏酸、槲皮素对照品（中国食品药品
检定研究院，批号分别为 111720-200603、110885-200102、
111581-200302、100081-200406）；乙腈为色谱纯，水为纯净水，
其余试剂均为分析纯。
1.3 药材
火绒草药材为沈阳、鞍山、本溪、丹东等地市售品，均经成
都中医药大学魏德荣教授鉴定为菊科火绒草属火绒草。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：
乙腈（A）-0.1％磷酸水溶液（B），梯度洗脱（洗脱程序见表 1）；
流速：1.0 ml/min；检测波长：355 nm；柱温：25℃。色谱见图1。
2.2 对照品贮备液的制备
分别精密称取适量咖啡酸、阿魏酸、木犀草苷、槲皮素对
照品，置于50 ml棕色量瓶中，加一定量的甲醇超声（功率：200
＊副主任药师。研究方向：中药研制与开发、药学管理。电话：
0936-8215023。E-mail：zhaozhizhen1212@163.com
HPLC法同时测定火绒草中4种有效成分的含量
赵致臻＊（张掖市人民医院，甘肃张掖 734000）
中图分类号 R284.1；R927.2 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2013）27-2554-03
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2013.27.21
摘 要 目的：建立同时测定火绒草中4种有效成分咖啡酸、阿魏酸、木犀草苷和槲皮素含量的方法。方法：采用高效液相色谱
法。色谱柱为Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液（梯度洗脱），流速为1.0 ml/min，检测波长
为355 nm，柱温为25℃。结果：咖啡酸、阿魏酸、木犀草苷和槲皮素的质量浓度分别在0. 015 2～0. 176 0、0.011 0～0.177 0、0.029 6～
0.148 0、0.004 0～0.106 0 mg/ml范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系（r分别为0.999 7、0.999 7、0.999 6、0.999 9）；精密
度、重复性、稳定性试验的RSD均＜3％；平均加样回收率分别为99.47％、100.77％、99.75％、99.92％，RSD分别为1.04％、1.65％、
1.61％、1.02％（n均为6）。结论：该方法简便、灵敏、准确，可为火绒草药材的质量控制提供参考依据。
关键词 高效液相色谱法；火绒草；咖啡酸；阿魏酸；木犀草苷；槲皮素；含量测定
Simultaneous Determination of 4 Effective Components in Leontopodium leontopodioides by HPLC
ZHAO Zhi-zhen（People’s Hospital of Zhangye，Gansu Zhangye 734000，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To develop a method for content determination of 4 effective components（caffeic acid，ferulic acid，
luteoloside and quercetin）in Leontopodium leontopodioides. METHODS：HPLC method was adopted. The determination was per-
formed on Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）column with mobile phase consisted of acetonitrile-0.1％ phosphoric acid（gradi-
ent elution）at the flow rate of 1.0 ml/min. The detection wavelength was set at 355 nm and the column temperature was maintained
at 25 ℃ . RESULTS：The linear ranges of caffeic acid，ferulic acid，luteoloside and quercetin were 0.015 2-0.176 0 mg/ml（r＝
0.999 7），0.011 0-0.177 0 mg/ml（r＝0.999 7），0.029 6-0.148 0 mg/ml（r＝0.999 6），0.004 0-0.106 0 mg/ml（r＝0.999 9），respective-
ly. RSDs of precision，reproducibility and stability tests were all lower than 3％ . The average recoveries were 99.47％（RSD＝
1.04％），100.77％（RSD＝1.65％），99.75％（RSD＝1.61％）and 99.92％（RSD＝1.02％），respectively（n＝6）. CONCLUSIONS：
The method is simple，sensitive and accurate，and it provides reference for quality control of L. leontopodioides.
KEY WORDS HPLC；Leontopodium leontopodioides；Caffeic acid；Ferulic acid；Luteoloside；Quercetin；Content determination
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W，频率：40 kHz）溶解，冷却至室温，再用甲醇稀释至刻度，
摇匀，即得 4个待测组分的对照品贮备液，质量浓度依次为
0.201 7、0.194 8、0.183 4、0.200 3 mg/ml。
2.3 供试品溶液的制备
将药材样品粉碎成细粉后过四号筛，精密称取10.0 g，以8
倍量的 95％乙醇回流提取 1 h，放冷，滤过，滤液挥干，用甲醇
溶解并定容于 25 ml量瓶中，过 0.45 µm微孔滤膜，取续滤液，
即得。
2.4 线性关系考察
精密吸取上述咖啡酸、阿魏酸、木犀草苷、槲皮素对照品
贮备液适量，稀释成梯度质量浓度的混合对照品溶液，精密吸
取10 μl注入HPLC仪，照上述色谱条件测定，记录峰面积。以
对照品质量浓度（x）为横坐标，峰面积积分值（y）为纵坐标，绘制
标准曲线，得咖啡酸的回归方程为 y＝5 230.132x+112.57（r＝
0.999 7，n＝5），线性范围为 0.015 2～0.176 0 mg/ml；阿魏酸的
回归方程为y＝8 334.175x+206.281（r＝0.999 7，n＝5），线性范围为
0.011 0～0.177 0 mg/ml；木犀草苷的回归方程为y＝2 070.541x+
219.04（r＝0.999 6，n＝5），线性范围为0.029 6～0.148 0 mg/ml；
槲皮素的回归方程为 y＝8 421.545x－36.188（r＝0.999 9，n＝
5），线性范围为0.004 0～0.106 0 mg/ml。
2.5 精密度试验
分别精密吸取4种待测组分的对照品贮备液各10 μl，照上
述色谱条件重复6次进样测定，记录峰面积。结果，咖啡酸、阿
魏酸、木犀草苷、槲皮素的RSD分别为1.88％、0.27％、0.52％、
0.08％（n均为6），表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验
取同一供试品溶液于室温条件放置，分别于 0、2、4、6、8、
12、24 h精密吸取10 μl进样测定，记录峰面积。结果，咖啡酸、
阿魏酸、木犀草苷、槲皮素的 RSD分别为 1.67％、0.35％、
1.03％、0.07％（n均为7），表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.7 重复性试验
取同一份药材样品粉末适量，按“2.3”项下方法平行制备6
份供试品溶液，照上述色谱条件进样测定，记录峰面积，计算
样品含量。结果，咖啡酸、阿魏酸、木犀草苷、槲皮素的RSD分
别为1.91％、2.28％、1.38％、0.88％，表明本方法重复性良好。
2.8 加样回收率试验
取同一批已知含量的样品适量，共6份，精密称定，分别精
密加入适量咖啡酸、阿魏酸、木犀草苷、槲皮素对照品，按“2.3”
项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件进样测定，记录峰
面积，计算加样回收率，结果分别见表2～表5。
表2 咖啡酸的加样回收率试验结果（n＝6）
Tab 2 Results of recovery test of caffeic acid（n＝6）
样品含量，mg
1.275 1
1.272 6
1.265 4
1.278 9
1.276 4
1.263 5
加入量，mg
1.226 8
1.226 8
1.226 8
1.226 8
1.226 8
1.226 8
测得量，mg
2.4966
2.5061
2.4815
2.4767
2.4988
2.4940
回收率，％
99.57
100.55
99.13
97.64
99.64
100.30
x，％
99.47
RSD，％
1.04
表3 阿魏酸的加样回收率试验结果（n＝6）
Tab 3 Results of recovery test of ferulic acid（n＝6）
样品含量，mg
0.857 7
0.865 8
0.860 2
0.863 6
0.858 9
0.860 6
加入量，mg
0.690 0
0.690 0
0.690 0
0.690 0
0.690 0
0.690 0
测得量，mg
1.554 4
1.545 2
1.570 3
1.566 0
1.562 5
1.569 8
回收率，％
100.97
98.46
102.91
101.80
101.97
101.48
x，％
100.77
RSD，％
1.65
表4 木犀草苷的加样回收率试验结果（n＝6）
Tab 4 Results of recovery test of luteoloside（n＝6）
样品含量，mg
1.767 7
1.784 4
1.772 9
1.779 8
1.770 1
1.773 6
加入量，mg
1.440 0
1.440 0
1.440 0
1.440 0
1.440 0
1.440 0
测得量，mg
3.194 2
3.182 5
3.240 0
3.214 5
3.217 2
3.218 9
回收率，％
99.06
97.09
101.88
99.63
100.49
100.37
x，％
99.75
RSD，％
1.61
表5 槲皮素的加样回收率试验结果（n＝6）
Tab 5 Results of recovery test of quercetin（n＝6）
样品含量，mg
1.425 7
1.422 9
1.414 8
1.429 9
1.427 2
1.412 7
加入量，mg
1.378 6
1.378 6
1.378 6
1.378 6
1.378 6
1.378 6
测得量，mg
2.806 9
2.816 9
2.798 4
2.815 7
2.787 5
2.773 1
回收率，％
100.19
101.12
100.36
100.52
98.67
98.68
x，％
99.92
RSD，％
1.02
2.9 样品含量测定
取不同来源的火绒草样品适量，分别按“2.3”项下方法制
备供试品溶液，照上述色谱条件进样测定，记录峰面积，按拟
定方法计算样品中咖啡酸、阿魏酸、木犀草苷、槲皮素的含量，
结果见表6。
100
80
60
40
20
0
电压
，mV
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
时间，min
A
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
时间，min
B
100
80
60
40
20
0
1
2
3
4
100
80
60
40
20
0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
时间，min
C
图1 高效液相色谱图
A.混合对照品；B.供试品；C.阴性对照；1.咖啡酸；2.阿魏酸；3.木犀草
苷；4.槲皮素
Fig 1 HPLC chromatograms
A. mixed control；B. test sample；C. negative control；1. caffeic acid；2.
ferulic acid；3. luteoloside；4. quercetin
电压
，mV
电压
，mV
1
2
3
4
表1 流动相梯度洗脱程序
Tab 1 Gradient elution process of mobile phase
时间，min
0～20
＞20～30
＞30～35
＞35～41
＞41～43
流动相A，％
12→15
15→25
25→40
40
40→12
流动相B，％
88→85
85→75
75→60
60
60→88
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表6 样品含量测定结果（mg/g）
Tab 6 Results of content determination of samples（mg/g）
样品产地
沈阳
鞍山
本溪
丹东
咖啡酸
0.36
0.24
0.44
0.27
阿魏酸
0.02
0.09
0.03
0.01
木犀草苷
0.41
0.55
0.85
0.64
槲皮素
0.12
0.03
0.15
0.09
3 讨论
在样品提取方法筛选中，笔者比较了超声提取法、回流提
取法和索氏提取法。结果发现，回流提取法较超声提取法的
提取率高，操作比索氏提取法简便，故最终选定回流提取法提
取样品。此外，笔者分别进行了回流 1、2、4 h的比较试验，结
果差别不大，为了节约能源、提高效率，以回流1 h制备供试品
溶液。
笔者分别考察了以甲醇-乙腈、乙腈-水、乙腈-0.1％磷酸水
溶液等系统作为流动相的试验结果，发现以甲醇-乙腈为流动
相时，分离度差且保留时间过长；以乙腈-水作流动相时，色谱
峰拖尾较严重；以乙腈-0.1％磷酸水溶液作流动相能将 4种组
分完全分离，且峰形好、保留时间较短，故选其作为流动相并
进行梯度洗脱。
笔者采用二极管阵列检测器对 4种组分在 200～600 nm
波长范围内进行了全波长扫描，发现咖啡酸的特征吸收波长
为255、368 nm，阿魏酸的特征吸收波长为220、225、334 nm，木
犀草苷的特征吸收波长为 255、350 nm，槲皮素的特征吸收波
长为 255、369 nm。综合考虑，选择 355 nm作为本试验检测波
长。
本试验首次采用HPLC法同时测定火绒草中咖啡酸、阿魏
酸、木犀草苷、槲皮素的含量，对进一步确定火绒草的最佳产
地、扩大其药用资源具有一定的参考意义。本方法简便、灵
敏、准确，可为火绒草药材的质量控制提供参考依据。
参考文献
[ 1 ] 《全国中草药汇编》编写组.全国中草药汇编：上册[M].2
版.北京：人民卫生出版社，1996：14.
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辽宁中医药大学学报，2009，11（8）：217.
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年版.北京：中国医药科技出版社，2010：997.
（收稿日期：2013-04-10 修回日期：2013-05-29）＊讲师，硕士。研究方向：中药质量标准。电话：0378-3880680。
E-mail：zhangyun@henu.edu.cn
明丹颗粒的质量标准研究Δ
张 昀＊，刘 路，李 钦（河南大学药学院，河南开封 475001）
中图分类号 R283.627；R917 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2013）27-2556-04
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2013.27.22
摘 要 目的：建立明丹颗粒的质量标准。方法：采用薄层色谱（TLC）法对制剂中的柴胡、苍术、地黄、丹参、甘草进行定性鉴别；
用高效液相色谱法测定丹酚酸B和丹参酮ⅡA的含量。结果：柴胡、苍术、地黄、丹参、甘草的TLC鉴别特征专属性强，阴性对照无
干扰。丹酚酸B、丹参酮ⅡA的进样量分别在0.288 0～2.880 0、0.035 2～0.352 0 μg范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系
（r均为0.999 9）；二者精密度、稳定性、重复性试验的RSD均＜2％；平均加样回收率分别为94.44％、94.85％，RSD分别为1.87％、
1.37％（n均为6）。结论：所建标准可用于明丹颗粒的质量控制。
关键词 明丹颗粒；薄层色谱法；高效液相色谱法；质量标准；柴胡；苍术；地黄；丹参；甘草；丹酚酸B；丹参酮ⅡA
Study on Quality Standard of Mingdan Granule
ZHANG Yun，LIU Lu，LI Qin（Pharmacy College of Henan University，Henan Kaifeng 475001，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish the quality standards of Mingdan granule. METHODS：The identification of Bupleuri Ra-
dix，Atractylodis Rhizoma，Rehmannia glutinosa，Salvia miltiorrhiza and Glycyrrhizae Radix et Rhizoma were carried out by TLC.
The content of salvianolic acid B and tanshinone ⅡA were determined by HPLC. RESULTS：TLC spots of Bupleuri Radix，Atracty-
lodis Rhizoma，R. glutinosa，S. miltiorrhiza and Glycyrrhizae Radix et Rhizoma were specific without interference from negative con-
trol. The linear range of salvianolic acid B and tanshinone ⅡA were 0.288 0-2.880 0 μg and 0.035 2-0.352 0 μg（both r＝0.999 9）.
RSDs of precision，stability and reproducibility were all lower than 2％；average recovery rates were 94.44％（RSD＝1.87％，n＝
6）and 94.85％（RSD＝1.37％，n＝6）. CONCLUSIONS：Established standard can be used for the quality control of Mingdan gran-
ule.
KEY WORDS Mingdan granule；TLC；HPLC；Quality standard；Bupleuri Radix；Atractylodis Rhizoma；Rehmannia glutinosa；
Salvia miltiorrhiza；Glycyrrhizae Radix et Rhizoma；Salvianolic acid B；Tanshinone ⅡA
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