全 文 ：天然产物研究与开发 Nat Prod Res Dev 2012，24: 533-535
文章编号: 1001-6880( 2012) 04-0533-03
收稿日期: 2010-01-15 接受日期: 2010-04-21
基金项目: 河南省教育厅青年骨干教师资助计划( 教高 2008-755)
* 通讯作者 Tel: 86-378-3880680; E-mail: kangweny@ hotmail． com
河南鼠尾草抑制体内外 α-糖苷酶活性研究
闫文义1，2，曹乃峰2，张 倩2，康文艺2*
1河南大学医学院; 2 河南大学中药研究所，开封 475004
摘 要:本文采用 96 微孔板法，首次对河南鼠尾草抑制酵母和大鼠小肠 α-葡萄糖苷酶活性进行研究。河南鼠
尾草乙酸乙酯提取物( IC50 = 28． 73 μg /mL) 和正丁醇提取物( IC50 = 73． 90 μg /mL) 抑制酵母 α-葡萄糖苷酶活性
远高于阳性对照 Acarbose ( IC50 = 1081． 27 μg /mL) ，但只有乙酸乙酯提取物( IC50 = 366． 79 μg /mL) 具有抑制大
鼠小肠 α-葡萄糖苷酶活性，阳性对照 Acarbose未检测出其 IC50。结果表明，河南鼠尾草乙酸乙酯提取物和正丁
醇提取物均具有较好的酵母 α-葡萄糖苷酶抑制活性，但只有乙酸乙酯提取物具有良好的大鼠小肠 α-葡萄糖苷
酶抑制活性。
关键词:河南鼠尾草; 酵母 α-葡萄糖苷酶;大鼠小肠 α-葡萄糖苷酶; 抑制活性
中图分类号: Q946． 81 文献标识码: A
α-Glucosidase Inhibitory Activity of Salvia
honania L． H． Bailey in vivo and vitro
YAN Wen-yi1，2，CAO Nai-feng2，ZHANG Qian2，KANG Wen-yi2*
1Medicinal College of Henan University; 2 Instifute of Chinese Materia Medica，Henan University，Kaifeng，475004，China
Abstract: The yeast and rat intestinal α-glucosidase inhibitory activity of Salvia． honania was assayed by the method of
96-microplates for the first time． Yeast α-glucosidase inhibitory activity of ethyl acetate extracts ( IC50 = 28． 73 μg /mL)
and n-butanol extracts of S． honania ( IC50 = 73． 90 μg /mL) were higher than that of Acarbose ( IC50 = 1081． 27 μg /
mL) as positive control． Only ethyl acetate extracts ( IC50 = 366． 79 μg /mL) showed inhibitory activity on rat intestinal
α-glucosidase，and the IC50 value of Acarbose was not detected． The results indicated that both ethyl acetate extracts and
n-butanol extracts of S． honania showed a better yeast α-glucosidase inhibitory activity，but only ethyl acetate extracts
showed a better rat intestinal α-glucosidase inhibitory activity．
Key words: Salvia honania L． H． Bailey; yeast α-glucosidase; rat intestinal α-glucosidase; inhibitory activity
河南鼠尾草 ( Salvia honania L． H． Bailey) 又名
血丹参，系唇形科鼠尾草属植物，主要分布于湖北和
河南两省，具有活血调经、祛瘀止痛之功效［1］。研
究发现，鼠尾草叶提取物具有清除自由基和抗氧化
作用［2］，还有报道称鼠尾草对老年性痴呆可能有治
疗作用［3］。
随着对鼠尾草属植物研究的深入，发现有 20 多
种鼠尾草属植物被当做丹参入药来治疗冠心病和中
风［4］，还发现鼠尾草属药用植物具有抑制蛋白酪氨
酸磷酸酶 1B活性［5］。该属的化学成分研究主要集
中在萜类，少数为糖昔类、生物碱类和多糖类化合
物［6］。河南鼠尾草的化学成分报道极少，仅发现丹
参酮-IIA、隐丹参酮和 β-谷甾醇［7］，其脂溶性成分主
要含有弥罗汉酚( Ⅰ) 、丹参酮ⅡA( Ⅱ ) 、隐丹参酮
( Ⅲ) 、丹参酮Ⅰ( Ⅳ) 和次甲基丹参酮( Ⅴ) ［8］，其
生物活性的研究未见报道。
本文首次对河南鼠尾草抑制酵母 α-葡萄糖苷
酶的抑制活性及大鼠小肠 α-葡萄糖苷酶的抑制活
性进行了研究。
1 材料与方法
1． 1 材料与试剂
河南鼠尾草于 2008 年 7 月采集于河南商城，经
河南大学中药研究所生药教研室李昌勤副教授鉴定
为唇形科鼠尾草属植物河南鼠尾草 ( S． honania L．
H． Bailey) 全草，标本存于河南大学中药研究所。
α-葡萄糖苷酶( α-glucosidase，EC 3． 2． 1． 20) ; 4-
硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷 ( 4-n-trophenyl-α-D-glu-
DOI:10.16333/j.1001-6880.2012.04.025
copyranoside，PNPG，026K1516 ) ; 阿卡波糖 ( Acar-
bose，Lot 16869 ) 和二甲亚砜 ( DMSO) 均购自美国
Sigma公司。
1． 2 仪器
Multiskan MK3 酶标仪( 美国 Thermo Electron公
司) ; LRH-150 恒温培养箱 ( 上海一恒科技有限公
司) ; DELTA 320 型 PH 计 ( 美国 Mettler-Toledo 公
司) ;电子天平( 美国 Mettler-Toledo公司) ;旋转蒸发
仪( 德国 Heidolph 公司) ; Tissue Tearor 手持式匀浆
机( Mexico，Model 98537-395 ) ; Z400K 低温离心机
( 美国) ; UV-2000 型紫外可见分光光度仪 ( 尤尼可
上海仪器有限公司) 。
1． 3 验动物
正常雄性 SD大鼠，体重 180 ～ 220 g，购自河南
省实验动物中心。
1． 4 山胡椒浸膏的提取
河南鼠尾草全草干燥、粉碎后，用甲醇室温下冷
浸 3 次，每次 2 天。合并提取液后浓缩，浸膏分散水
中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别得到
石油醚、乙酸乙酯和正丁醇部位。
1． 5 α-葡萄糖苷酶抑制活性的筛选方法
1． 5． 1 α-葡萄糖苷酶活力的测定
酶活力测定: 112 μL磷酸钾缓冲液 ( pH 6． 8) ，
加入 0． 2 U /mL 的 α-葡萄糖苷酶 20 μL，DMSO 8
μL，37 ℃恒温 15 min 后加入 2． 5 mmol /L PNPG 20
μL，37 ℃恒温反应 15 min。再加入 0． 2 mol /L 的
Na2CO3 溶液 80 μL，于 405 nm波长下测 OD值。
酶活力单位定义: 37 ℃、pH 6． 8 系统条件下，每
分钟水解底物产生 1 μmol对硝基苯酚的酶量，定义
为一个酶活力单位( U) 。
1． 5． 2 标准曲线制作
根据采用的反应体系，用磷酸缓冲液( pH 6． 8)
配置 1000 μmol /L PNP，稀释成 400、300、200、150、
100、50、25、5 和 0 μmol /L。分别取 7 种不同浓度的
PNP 溶液各 160 μL，加入 0． 2 mol /L Na2CO3 溶液 80
μL，混匀，在 405 nm 下测定 OD 值，测三组取平均
值。以 OD值为纵坐标，对硝基苯酚浓度为横坐标，
做出标准曲线。
1． 5． 2 α-葡萄糖苷酶抑制活性的检测
将得到的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇部位分别
用 DMSO溶解，存储于 4 ℃冰箱中，按文献［9］建立
的 96 微孔板筛选方法，405 nm处检测其 OD值。同
时做相同体系下的样品空白组( 以消除样品色素带
来的影响) ，不加样品、酶与底物的空白对照组、不
加样品的阴性对照组和以阿卡波糖为抑制剂的阳性
对照组，按照以下公式求出酶活性抑制率。
酶活性抑制率( I% ) =
OD样品阴性-OD样品空白
OD阴性-OD空白
× 100%
1． 6 大鼠小肠 α-葡萄糖苷酶抑制活性的筛选方法
1． 6． 1 PBS溶液的配置
分别取磷酸二氢钾 7． 6460 g 和磷酸氢二钾 4．
5590 g，加 500 mL蒸馏水，搅匀之后用 5%盐酸溶液
或者 0． 1 mol /L氢氧化钠溶液将 PH值调为 6． 8，即
可得 PH为 6． 8 的 PBS溶液。
1． 6． 2 大鼠小肠 α-葡萄糖苷酶的制备
按照文献［10］，将 SD大鼠禁食 24 h 后脱颈椎处
死，剪开腹腔，从胃下部 10 cm左右开始，取出 20 cm
左右长度的小肠，纵向剪开，用冷的生理盐水中洗净
内容物，滤纸吸干小肠内表面水分，用盖玻片刮取小
肠内壁上皮粘膜合并，称重后加入 1． 5 倍量的冰冷
PBS缓冲液稀释。然后将上述小肠粘膜稀释液在冰
浴中匀浆，混悬液置于冷冻离心机中 4 ℃下 12000
转离 30 min，弃去沉淀，取上清液，-20 ℃保存备用。
2 结果与讨论
2． 1 河南鼠尾草酵母 α-葡萄糖苷酶抑制活性
表 1 显示，除了石油醚提部位对酵母 α-葡萄糖
苷酶的抑制活性( 34． 67% ) 低于阳性对照药阿卡波
糖( 55． 63% ) 外，乙酸乙酯和正丁醇部位对酵母 α-
葡萄糖苷酶的抑制活性均高于阳性对照药阿卡波糖
( 55． 63% ) 。表明河南鼠尾草乙酸乙酯和正丁醇部
位具有较好的酵母 α-葡萄糖苷酶的抑制活性。
表 1 河南鼠尾草 α-葡萄糖苷酶抑制活性
Table 1 The α-glucosidase inhibitory activity of S． honania
样品
Sample
部位
Fraction
初筛终浓度
Concentration
( mg /mL)
抑制率
Inhibition
rate( % )
IC50
( μg /mL)
河南鼠尾草 石油醚 1． 5 34． 67 NT
乙酸乙酯 1． 5 97． 67 28． 73
正丁醇 1． 5 96． 71 73． 90
阳性对照 Acarbose 1． 5 55． 63 1081． 27
注: NT表示未测定。
2． 1． 1 提取部位浓度对酵母 α-葡萄糖苷酶抑制活
性的影响
图 1 显示，提取部位的 α-葡萄糖苷酶抑制活性
呈剂量依赖性，而且，当抑制率达到一定程度时，再
增加提取物质量浓度，抑制活性不会提高。其中，乙
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酸乙酯和正丁醇部位在 0． 4 mg /mL 时，达到最大抑
制率，再增加提取物浓度，抑制率不再变化。
图 1 提取物浓度对 α-葡萄糖苷酶活性的影响
Fig. 1 Effect of the concentration of extracts on α-glucosi-
dase inhibitory activity
2． 2 河南鼠尾草大鼠小肠 α-葡萄糖苷酶抑制活性
表 2 显示，在相同浓度( 1． 5 mg /mL) 下，只有乙
酸乙酯部位的抑制率 ( 102． 79% ) 远高于阳性对照
阿卡波糖的抑制率( 55． 63% ) 。仅有乙酸乙酯部位
( IC50 = 366． 79 μg /mL) 具有大鼠小肠 α-葡萄糖苷
酶抑制活性。
表 2 山胡椒大鼠小肠 α-葡萄糖苷酶抑制活性
Table 2 The rat intestinal α-glucosidase inhibitory activity of
S． honania
样品
Sample
部位
Fraction
初筛终浓度
Concentration
( mg /mL)
抑制率
Inhibition
rate( % )
IC50
( μg /mL)
河南鼠尾草 石油醚 1． 5 25． 18 NT
乙酸乙酯 1． 5 102． 79 366． 79
正丁醇 1． 5 30． 29 NT
Acarbose 1． 5 55． 63 NT
注: NT表示未测定。
3 结论
本文首次利用体外酵母 α-葡萄糖苷酶和体内
大鼠小肠 α-葡萄糖苷酶对河南鼠尾草进行研究。
发现乙酸乙酯和正丁醇部位具有较好的酵母 α-葡
萄糖苷酶抑制活性，但在大鼠小肠 α-葡萄糖苷酶体
内抑制模型中，只有乙酸乙酯部位具有良好的抑制
活性，提示我们有必要对该部位进行活性成分的追
踪。
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