全 文 ：第 27卷第 6期
2 01 0年 6月
精 细 化 工
FINECHEMICALS
Vol.27, No.6
June2 0 1 0
中药现代化技术
收稿日期:2010-01-13;定用日期:2010-02-01
基金项目:河南省教育厅青年骨干教师资助计划(2008A755)
作者简介:曹乃锋(1985-),男 , 河南商城人, 硕士研究生 ,师从康文艺教授 ,主要从事天然活性成分研究 ,电话:15890951912, E-mail:
cnf1985@ 126.com。
联系人:康文艺 ,教授 ,从事中药活性成分及新药研究 ,电话:0378-3880680, E-mail:kangweny@hotmail.com。
山胡椒抑制体内外 α-糖苷酶活性研究
曹乃锋 1, 2 ,武小红 1 ,康文艺1＊
(1.河南大学 中药研究所 ,河南 开封 475004;2.河南大学 研究生院 , 河南 开封 475004)
摘要:对山胡椒抑制酵母 α-葡萄糖苷酶和大鼠小肠 α-葡萄糖苷酶活性进行了研究。利用 96微孔板法检测其 α-
葡萄糖苷酶抑制活性。结果表明 ,抑制酵母 α-葡萄糖苷酶实验中 ,山胡椒石油醚部位(IC50 =229.70 μg/mL)、乙
酸乙酯部位(IC50 =259.10 μg/mL)和正丁醇部位(IC50 =165.80 μg/mL)活性低于阳性对照 Acarbose(IC50 =
1 081.27 μg/mL);抑制大鼠小肠 α-葡萄糖苷酶实验中 , 仅有乙酸乙酯部位(IC50 =418.17 μg/mL)具有活性 , 阳
性对照 Acarbose未检测出其 IC50。实验证明 ,山胡椒各提取部位具有较好抑制酵母 α-葡萄糖苷酶活性 , 但只有
乙酸乙酯部位具有良好的大鼠小肠 α-葡萄糖苷酶抑制活性。
关键词:山胡椒;酵母 α-葡萄糖苷酶;大鼠小肠 α-葡萄糖苷酶;抑制活性;中药现代化技术
中图分类号:R284.1;Q946.91 文献标识码:A 文章编号:1003-5214(2010)06-0546-03
α-GlucosidaseInhibitoryActivityinvitroandvivoof
LinderaGlauca(SiebletZucc)Blume
CAONai-feng1, 2 , WUXiao-hong1 , KANGWen-yi1＊
(1.InstituteofChineseMateriaMedica, HenanUniversity, Kaifeng475004, Henan, China;2.TheGraduateSchoolof
HenanUniversity, Kaifeng475004, Henan, China)
Abstract:Toinvestigatetheyeastandtheratintestinalα-glucosidaseinhibitoryactivityofLindera
glauca(SiebletZucc)Blume, invitroandvivo.Itsα-glucosidaseinhibitoryactivitywasassayedbythe
methodof96-microplates.Theresultsshowedthatyeastα-glucosidaseinhibitoryactivityofpetroleum
etherextracts(IC50 =229.70 μg/mL), ethylacetateextracts(IC50 =259.10 μg/mL)andn-butanol
extractswaslowerthanthatofAcarbose(IC50 =1 081.27 μg/mL)aspositivecontrol, andonlyethyl
acetateextracts(IC50 =418.17 μg/mL)showedtheratintestinalα-glucosidaseinhibitoryactivity.The
IC50valueofAcarbosecouldnotbedetected.TheresultsindicatedthataltheextractsofL.glauca
showedabeteryeastα-glucosidaseinhibitoryactivityandonlyethylacetateextractsshowedabeter
ratintestinalα-glucosidaseinhibitoryactivity.
Keywords:Linderaglauca(SiebletZucc)Blume;yeastα-glucosidase;ratintestinalα-glucosidase;
inhibitoryactivity;modernizationtechnologyoftraditionalChinesemedicines
Foundationitem:SupportedbytheFoundationofBasicProjectofHenanProvincialOficeof
Education(2008A755)
山胡椒 Linderaglauca(SiebletZucc)Blume又
名牛筋条 、牛筋树 、假死柴 、野胡椒等 [ 1] ,是樟科山
胡椒属灌木或小乔木 ,广泛分布在我国黄河以南地
区 [ 2] 。刘立鼎等 [ 3]对其果实精油的 13种成分进行
了鉴定 ,并对山胡椒叶子的化学成分进行了研究 ,鉴
定了叶子中的精油成分[ 4] ,并且还报道了山胡椒叶
子精油对鸡胚外有抗流感病毒作用 ,且对常见 14种
细菌均有不同程度的抗菌作用 [ 4] 。山胡椒的根可
DOI :10.13550/j.jxhg.2010.06.024
用于治疗劳伤脱力 、风湿性关节炎 [ 5] 。山胡椒根水
煎服能散瘀通络 ,治疗跌打损伤 、心腹冷痛;其叶民
间泡茶服用 ,用于预防感冒 、中暑 ,外敷治疗疮痈肿
毒 [ 6] 。赵奇志等 [ 7]报道了其同属植物狭叶山胡椒
中生物碱类具有止痛及自由基清除作用。但鲜未见
山胡椒对酵母 α-葡萄糖苷酶抑制活性及大鼠小肠
α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究报道 。
本文对山胡椒抑制酵母 α-葡萄糖苷酶的抑制活
性及大鼠小肠 α-葡萄糖苷酶的抑制活性进行了研究。
1 实验部分
1.1 材料与试剂
山胡椒全株于 2008年 7月采集于河南商城 ,经
河南大学天然药物研究所生药教研室李昌勤副教授
鉴定为樟科山胡椒属植物山胡椒 Linderaglauca
(SiebletZucc)Blume,标本存于河南大学天然药物
研究所 。
α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase, EC3.2.1.20);4-
硝基苯 -α-D-吡 喃葡萄 糖苷 (4-N-trophenyl-α-D-
glucopyranoside, PNPG, 026K1516);阿 卡 波 糖
(Acarbose, Lot16869)和二甲亚砜 (DMSO)均购自
美国 Sigma公司。
1.2 仪器
MultiskanMK3酶标仪(美国 ThermoElectron公
司);LRH-150恒温培养箱(上海一恒科技有限公
司);DELTA320型 pH计 (美国 Metler-Toledo公
司);电子天平(美国 Metler-Toledo公司);旋转蒸发
仪(德国 Heidolph公司);TisueTearor手持式匀浆
机(Mexico, Model98537-395);Z400K低温离心机
(美国 ThermoElectron公司);UV-2000型紫外可
见分光光度仪(上海尤尼可仪器有限公司)。
1.3 实验动物
正常雄性 SD大鼠 ,体重 180 ～ 220 g,购自河南
省实验动物中心 。
1.4 山胡椒浸膏的提取
山胡椒全株干燥 、粉碎后 ,用甲醇室温下冷浸 3
次 ,每次 3d。合并提取液后浓缩 ,浸膏分散水中 ,依
次用石油醚 、乙酸乙酯 、正丁醇萃取 ,分别得到石油
醚 、乙酸乙酯和正丁醇提取物。
1.5 α-葡萄糖苷酶抑制活性的筛选方法
以张丽等[ 8]建立的 96微孔板筛选方法 , 405nm
处检测其 OD值 。
1.6 大鼠小肠 α-葡萄糖苷酶抑制活性的筛选方法
1.6.1 大鼠小肠 α-葡萄糖苷酶的制备
按照文献 [ 9] ,将 SD大鼠禁食 24 h后脱颈椎处
死 ,剪开腹腔 ,从胃下部 10cm左右开始 ,取出 20 cm
左右长度的小肠 ,纵向剪开 ,用冷的生理盐水洗净内
容物 ,滤纸吸干小肠内表面水分 ,用盖玻片刮取小肠
内壁上皮黏膜合并 ,称重后加入 1.5倍量的冰冷磷酸
盐缓冲液稀释。然后将上述小肠黏膜稀释液在冰浴
中匀浆 ,混悬液置于冷冻离心机中于 4 ℃以 400 r/
min离心 ,弃去沉淀 ,取上清液 , -20℃保存备用。
1.6.2 筛选方法
以张丽等 [ 8]建立的 96微孔板筛选方法 , 405 nm
处检测其 OD值。
2 结果与讨论
2.1 山胡椒酵母 α-葡萄糖苷酶抑制活性
表 1显示 ,山胡椒提取物各部位在相同质量浓
度(1.5g/L)下的抑制率均远高于阳性对照阿卡波
糖(55.63%)。
各提取物的 IC50值大小为:石油醚部位(IC50 =
229.70μg/mL)、乙酸乙酯部位 (IC50 =259.10 μg/
mL)和正丁醇部位(IC50 =165.80 μg/mL),它们都
远低于阳性对照 Acarbose(IC50 =1 081.27μg/mL)。
表明山胡椒各提取部位均具有较好的 α-葡萄糖苷
酶抑制活性。
表 1 山胡椒 α-葡萄糖苷酶抑制活性
Table1 α-GlucosidaseinhibitoryactivityofL.glauca
样品 提取物 初筛终质量浓度/(g/L) 抑制率/%
IC50/(μg/mL)
山胡椒 石油醚 1.5 101.87 229.70
乙酸乙酯 1.5 100.03 259.10
正丁醇 1.5 91.04 165.80
阳性对照 Acorbose 1.5 55.63 1081.27
2.1.1 提取物质量浓度对 α-葡萄糖苷酶抑制活性
的影响
见图 1。
图 1 提取物质量浓度对 α-葡萄糖苷酶活性的影响
Fig.1 Massconcentrationofextractseffectonα-glucosidase
inhibitoryactivity
图 1显示 ,提取物的 α-葡萄糖苷酶抑制活性呈
剂量依赖性 ,而且 ,当抑制率达到一定程度时 ,再增
加提取物质量浓度 ,抑制活性不会提高 。其中 ,正丁
醇在 0.3g/L时 ,达到最大抑制率 ,再增加提取物质
·547· 第 6期 曹乃锋 , 等:山胡椒抑制体内外 α-糖苷酶活性研究
量浓度 ,抑制率不再变化;石油醚和乙酸乙酯 0.8 g/
L时基本达到最大抑制率 ,此后再增加质量浓度 ,对
抑制率的影响不大。
2.2 山胡椒大鼠小肠 α-葡萄糖苷酶抑制活性
表 2显示 ,在相同质量浓度(1.5 g/L)下 ,只有
乙酸乙酯部位的抑制率(99.17%)远高于阳性对照
阿卡波糖的抑制率(42.12%)。因此 ,也只有乙酸
乙酯部位(IC50 =418.17μg/mL)具有活性。
表 2 山胡椒提取部位对大鼠小肠 α-葡萄糖苷酶抑制活性
Table2 Ratintestinalα-glucosidaseinhibitoryactivityofL.
glauca
样品 提取物 初筛终质量浓度/(g/L) 抑制率/%
IC50/(μg/mL)
山胡椒 石油醚 1.5 47.99 NT
乙酸乙酯 1.5 99.17 418.17
正丁醇 1.5 18.01 NT
阳性对照 Acarbose 1.5 42.12 NT
注:NT:无活性。
3 结论
本文对山胡椒提取部位进行体外酵母 α-葡萄
糖苷酶和体内大鼠小肠 α-葡萄糖苷酶抑制活性的
研究 。发现山胡椒乙酸乙酯部位具有抑制体内外
α-葡萄糖苷酶活性作用 ,可对该部位进行活性追踪 ,
分离鉴定活性成分 。
参考文献:
[ 1] 王玉兰 ,高贤明 ,余孝平 ,等.我国山胡椒资源及其开发利用的
研究 [ J] .湖南科学, 1994, 12(4):331-334.
[ 2] 杨得坡 ,王发松 ,任三香 ,等.山胡椒果挥发油的化学成分和抗
真菌活性 [ J] .中药材 , 1999, 22(6):295-298.
[ 3] 刘立鼎 ,陈京达.山胡椒果实化学成分研究及应用试验 [ J] .植
物学报 , 1982, 24(3):252-258.
[ 4] 刘立鼎 ,顾静文 ,陈京达.山胡椒叶子化学成分及其应用 [ J].
江西科学 , 1992, 10(1):38-44.
[ 5] 中国药材公司.中国中药资源志要 [ M] .北京:科学出版社 ,
1994:287.
[ 6] 余德贵.山胡椒的药理作用 [ J].基层中药杂志 , 1996, 10(4):
41.
[ 7] ZhaoQJ, ZhaoYM, WangKJ.Antinociceptiveandfreeradical
scavengingactivitiesofalkaloidsisolatedfromLinderaangustifolia
Chen[ J].JournalofEthnopharmacology, 2006, 106(3):408-
413.
[ 8] 张 丽 ,李晓梅 ,李彩芳 ,等.加拿大蓬α-葡萄糖苷酶抑制作用
研究 [ J] .河南大学学报:医学版 , 2008, 27(4):39-41.
[ 9] 戴 岳 ,夏玉凤 ,林巳茏.地肤子正丁醇部分降糖机制的研究
[ J] .中药药理与临床 , 2003, 19(5):21-24.
(上接第 531页)
3 结论
PPC与 PLA共混均匀 ,共混效果较好 ,两种聚
合物共混是简单的物理共混;复合材料的玻璃化转
变温度和热分解温度都比 PPC提高 , Tg最高的共混
物 PPC/50%PLA比 PPC高 30 ℃;随着 PLA含量的
增加 ,共混材料的降解性能提高 ,经 40 d降解后复
合材料最大失重率为 33.37%,是 PPC的 9倍;PPC-
PLA复合材料有良好的成膜性 ,制备的薄膜透明均
匀 ,复合薄膜材料拉伸强度最高为 58 MPa,杨氏模
量最大为2 943 MPa。复合薄膜材料中有部分可以
达到农用地膜 、保鲜膜 、吹塑薄膜 、食用硬质 PVC的
力学水平[ 9-14] 。综合来看 PPC-PLA复合材料作为
无毒耐热可降解的薄膜材料有望应用于食品包装 、
保鲜 、医用材料等领域 。
参考文献:
[ 1] MaXiaofei, ChangPeterR, YuJiugao, etal.Preparationand
properties of biodegradable poly(propylene carbonate)/
thermoplasticdriedstarchcomposites[ J].CarbohydratePolymers,
2008, 71:229-234.
[ 2] TaoJian, SongCunjiang, CaoMingfeng, etal.Thermalproperties
anddegradability ofpoly(propylenecarbonate)/poly(β-
hydroxybutyrate-co-β-hydroxyvalerate)(PPC/PHBV)blends[ J] .
PolymerDegradationandStability, 2009, 94:575-583.
[ 3] YuTao, ZhouYong, LiuKaipeng, etal.Improvingthermalstability
ofbiodegradablealiphaticpolycarbonatebymetalioncoordination
[ J] .PolymerDegradationandStability, 2009, 94:253-258.
[ 4] 王东贤 ,亢茂青 ,王心葵.二氧化碳合成脂肪族聚碳酸酯 [ J].
化学进展 , 2002, 14(6):462-468.
[ 5] 卢凌彬 ,黄素琴 ,黄可龙 ,等.二氧化碳 /环氧丙烷 /γ-丁内酯的
三元共聚物微球降解性的研究 [ J] .高分子学报 , 2005(4):621
-624.
[ 6] 卢凌彬 ,黄可龙 ,黄 路 ,等.二氧化碳 /环氧丙烷 /γ-丁内酯的
三元共聚合和表征 [ J].高分子学报 , 2005(3):384-388.
[ 7] 史铁钧 ,董智贤.聚乳酸的性能 、合成方法及应用 [ J].化工新
型材料 , 2001, 29(5):13-16.
[ 8] 王淑芳 ,陶 剑 ,郭天瑛 ,等.脂肪族聚碳酸酯(PPC)与聚乳酸
(PLA)共混型生物降解材料的热学性能 、力学性能和生物降
解性研究 [ J] .离子交换与吸附 , 2007, 23(1):1-9.
[ 9] 全国包装标准化技术委员会.GB/T16958— 1997包装用双向
拉伸聚酯薄膜 [ S].北京:中国标准出版社 , 1997.
[ 10] 全国塑料制品标准化技术委员会.GB13735— 1992聚乙烯吹
塑农用地面覆盖薄膜 [ S] .北京:中国标准出版社 , 1992.
[ 11] 全国塑料制品标准化技术委员会.GB10457— 1989聚乙烯自
粘保鲜膜 [ S].北京:中国标准出版社 , 1989.
[ 12] 轻工业部塑料加工应用科学研究所.GB/T12025— 1989高密
度聚乙烯吹塑薄膜 [ S].北京:中国标准出版社 , 1989.
[ 13] 全国塑料制品标准化中心.GB/T12026— 2000热封型双向拉
伸聚丙烯薄膜 [ S].北京:中国标准出版社 , 2000.
[ 14] 轻工业部塑料加工应用科学研究所.GB/T10805— 1989食品
包装用硬质聚氯乙烯薄膜 [ S] .北京:中国标准出版社 , 1989.
·548· 精 细 化 工 FINECHEMICALS 第 27卷