全 文 ：收稿日期:2007-04-25;　修订日期:2007-08-30
作者简介:廖　莉(1965-),女(汉族),广西北海人 ,现任北海广播电视大
学讲师 , 学士学位 ,主要从事药物化学 、药物分析化学教学工作及天然产
物有效成分提取研究工作.
一点红总黄酮的提取及对羟自由基的清除作用研究
廖　莉 1 ,罗建华2 ,蒙春越 2 ,张丽丹2 ,冯　玲 2 ,潘隆吉2 , 黄锁义 2
(1.北海广播电视大学 ,广西 北海　536000;
2.右江民族医学院 ,广西 百色　533000)
摘要:目的 探讨一点红总黄酮的提取 、鉴别及对羟自由基清除作用 , 以充分利用一点红植物资源 , 避免资源的浪费。方
法 采用超声波乙醇浸提法从一点红中提取黄酮类物质 , 对所提取的黄酮类物质进行验证 , 并用分光光度法测定含量 , 用
一点红总黄酮对羟自由基清除作用进行试验。结果 测得样品中总黄酮的含量 C=0.816 8mg/ml, 回收率为 100%, 其纯
度和产率均较高。结论 该方法采用全物理过程 , 无任何污染 , 是提取一点红黄酮类物质的有效途径。一点红总黄酮提
取液对 Fenton体系产生的· OH自由基有很好的清除作用。
关键词:超声波提取;　一点红;　总黄酮;　鉴别;　自由基;　清除
中图分类号:O624.42+1;O6-332　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)02-0415-02
ExtractionoftheTotalFlavanonefromEmiliasonchifoliaDC.andItsEffectonHydroxyl
Radical
LIAOLi1 ,LUOJian-hua2 ,MENGChun-yue2 , ZHANGLi-dan2 ,FENGLing2 ,PANLong-ji2 , HUANGSuo-yi2
(1.BeihaiRadioandTelevisionUniversity, Beihai, Guangxi536000, China;2.DepartmentofChemistry,
YoujiangMedicalColegeforNationalities, Baise, Guangxi533000, China)
Abstract:ObjectiveTostudytheextractionmethodofthetotalflavanonefromEmiliasonchifoliaDCanditsefectonofhydroxyl
radical.MethodsTheflavonoidswereextractedwithethanolasthesolventfromEmiliasonchifoliaDCbyultrasonicwave.Spectro-
photometrywasusedtodeterminesthecontentoftheflavanoneofEmiliasonchifoliaDC.TheefectofextractofEmiliasonchifolia
DConhydroxylradicalwasstudied.ResultsBythismethodthecontentofthetotalflavanonefromEmiliasonchifoliaDCwasC=
0.8168 mg/mlandtherateofrecoverywas100%.ConclusionThistextprovidestheextractionandpurificationmethodstogetthe
outcomeandthepurityoftheflavanoneishigh.Thismethodisapurelyphysicalprocessandhasnopolution.Itisanidealwayto
extracttheflavanonefromEmiliasonchifoliaDC.EmiliasonchifoliaDChasascavengingactiononhydroxylradical.
Keywords:Ultrasonicwavetreatment;　EmiliasonchifoliaDC;　Totalflavanone;　Identification;　Hydroxylradical;
　Scavenging
　　一点红 EmiliasonchifoliaDC.,又名羊蹄草 、红背叶 、叶下红 、
红背果等 , 菊科一点红属一年生或多年生草本 , 分布于我国华南 、
华中和西南等地。一点红性味凉 ,具清热解毒 、活血散淤之功效。
可治菌痢 、急性肠炎 、泌尿系感染 、咽喉炎 、跌打肿痛 、毒疮等。一
点红采摘嫩梢供食 , 沸水焯后 , 加蒜蓉炒食 , 作汤。食味柔滑 ,清
香可口 [ 1] 。临床上常用于治疗上呼吸道感染 、口腔溃疡 、肺炎 、
乳腺炎 、疖肿疮疡 、皮肤湿疹等 [ 2] 。一点红是印度喀拉拉邦用来
治疗炎症 、蚊虫叮咬 、结膜炎 、风湿病及创伤等的一种植物药 ,已
报道该植物地上部分含有吡咯双烷类生物碱和黄酮类化合物 ,并
且首次发现一点红的抗氧化和抗炎作用 ,黄酮类为其作用的活性
成分 [ 3] 。
目前国内外对一点红总黄酮的研究还相当的缺乏。黄酮类
有效成分对治疗冠心病 、老年性痴呆 、脑血栓 、神经系统疾病和消
除自由基 、抑菌 、抗癌等方面有显著效果 , 无副作用 , 并以此开发
出多种药品和保健食品 [ 4] 。近年来 , 超声技术应用于提取植物
中的生物碱 、苷类 、生物活性物质 、动物组织浆的毒质等研究已有
报道 [ 5, 6] , 表明其具有能耗低 、效率高 、不破坏有效成分的特点。
很多研究表明 , 利用超声波产生的强烈振动 、高的加速度 、强烈的
空化效应 、搅拌作用等 ,可加速植物材料中的有效成分进入溶剂 ,
从而增加有效成分的提取率 , 缩短提取时间 , 并且还可避免高温
对提取成分的影响 [ 6] 。但超声技术应用于提取一点红中黄酮类
物质的研究尚未见报道。为此 , 本实验用超声波乙醇浸提法提取
一点红总黄酮 、鉴别及提取物总黄酮对羟自由基的清除作用 。现
报道如下。
1　仪器与试剂
1.1　仪器 KQ5200DB型数控超声波清洗器(江苏省昆山市超声
仪器有限公司);UV-755B紫外可见分光光度计(上海分析仪器
总厂);ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂);SHB-
III循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)。
1.2　试剂 95%乙醇 AR;亚硝酸钠 AR;硝酸铝 AR;氢氧化钠
AR;三氯化铝 AR;盐酸 AR;氨水 AR;冰醋酸 AR;醋酸乙酯 AR;
乙酸镁 AR;甲醇 AR;镁粉 AR;正丁醇 AR;芦丁标准品(中国药
品生物制品检定所);双氧水 AR;硫酸亚铁 AR;水杨酸 AR;新鲜
一点红(采自广西百色市)。
2　方法与结果
2.1　总黄酮成分提取 取新鲜一点红 ,烘干 ,粉碎。称取一点红
粉末约 6 g, 加 80 ml95%乙醇 , 超声波提取 2.5 h, 抽滤。滤渣再
加 80 ml95%乙醇 ,超声波提取 2.5h,抽滤 ,合并两次滤液 , 减压
回收乙醇至滤液仅剩 5～ 7 ml左右为止 , 放置 100 ml容量瓶中 ,
用 60%乙醇稀释至刻度 ,得样品液。
2.2　测定方法依据 以芦丁为对照品测定一点红中总黄酮的含
量 , 加入铝离子试剂 , 同时控制适宜 pH值 ,使黄酮化合物与铝盐
形成络合物 ,在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。
2.3　定量实验 -总黄酮的含量测定
2.3.1　波长的选择 取样品液适量 , 在 0.30ml5%亚硝酸钠溶
液存在的碱性条件下 ,经硝酸铝显色后 , 以试剂为空白参比液在
420 ～ 700nm波长范围测定络合物的吸光度 ,络合物于 510 nm波
长处有最大吸收 ,故测定时选用此波长。
2.3.2　标准曲线的绘制 分别精密吸取芦丁对照液(0.10 mg/
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ml)0.00, 0.50, 1.00, 2.00, 3.00, 4.00, 5.00 ml于 10.00 ml容量
瓶中 , 分别加入 5%亚硝酸钠溶液 0.30ml,摇匀 , 静置 6 min;再加
10%硝酸铝溶液 0.30 ml, 摇匀 ,静置 6 min;再加 4%氢氧化钠溶
液 4.00ml, 用 60%乙醇稀释至刻度 ,摇匀 , 静置 12 min,以试剂作
空白参比液 , 于 510nm处测吸光度。吸光度测定结果见表 1。
表 1　紫外可见分光光度计测定芦丁对照液吸光度结果
C/mg· ml-1 吸光度
0.000 0.000
0.005 0.041
0.010 0.102
0.020 0.238
0.030 0.371
0.040 0.509
0.050 0.648
根据上表得回归方程:A= -0.031 1 +13.518 4C, r
=0.999 9。
2.3.3　提取物含量的测定 精密吸取样品液 0.50 ml, 置 10 ml
容量瓶 , 按标准曲线的制备方法测定吸光度 A=0.521, 根据回归
方程:A=-0.031 1+13.518 4C, 计算样品中总黄酮的含量 C=
0.816 8 mg/ml。
2.3.4　回收实验 精密量取样品液 1.00 ml, 加入标准芦丁对照
品 1.00 ml(0.10mg/ml), 同前样品测定方法操作测定吸光度 ,求
出回收率为 100%。
2.4　定性实验 -总黄酮的鉴别
2.4.1　颜色反应
紫外光下呈色反应:取该样品溶液点在滤纸上 , 在可见光下
呈灰黄色 , 在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。
浓氨水反应:取该样品溶液点在滤纸上 , 将滤纸在氨水上方
熏 30s,立即在紫外光下观察 ,呈极明显的黄褐色荧光斑点。
三氯化铝反应:取样品溶液点在滤纸上 , 滴加 1%三氯化铝
乙醇溶液 , 吹干。在可见光下呈灰黄色 ,在紫外光下呈黄色荧光
斑点。
乙酸镁反应:取样品溶液点在滤纸上 , 滴加 1%乙酸镁甲醇
溶液 , 吹干 ,紫外光下呈黄色斑点。
盐酸 -镁粉反应:取乙醇提取液 1ml于试管中加镁粉 , 再加
入浓盐酸数滴(1次加入),在泡沫处呈紫红色。
2.4.2　纸层析 取样品溶液 10μl点在滤纸上。用正丁醇∶醋酸
∶水 =4∶1∶5(体积比)为展开剂 , 上行展开 5 h,取出晾干。喷
1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下 ,可见荧光斑点。
2.5　总黄酮提取物对· OH清除作用 参照 Fenton反应的方法
建立反应体系模型 [ 7] , 利用 H2 02与 Fe2+混合产生· OH, 但由于· OH具有很高的反应活性 , 存活时间短 , 若在反应体系中加入
水杨酸 , 就能有效地捕捉 · OH, 并产生有色产物。反应式如下:
H2 02 +Fe2+※Fe3++· OH+OH-。
该产物在 510 nm处有强吸收 , 若在此反应体系中加入具有
清除· OH功能的被测物 , 便会与水杨酸竞争· OH,从而使有色
产物生成量减少 , 采用固定反应时间法 , 在相同体积的反应体系
(8.8 mmol/LH2O2 1 ml, 9 mmol/LFe2+lml, 9 mmol/L1 ml水杨
酸 -乙醇溶液)加入一系列不同浓度的一点红总黄酮提取液 ,并
以蒸馏水为参比 , 与试剂空白液比较 , 在 510 nm处测量各浓度下
的吸光度 , 便能测定被测物(总黄酮)对 · OH的清除作用 , 其清
除率计算公式:
清除率(%)=AO-AχA0 ×100%
以实验的提取液总黄酮作为样品 ,分别取不同体积的样品定
容到 50ml分别测其对· OH的清除作用。从图 1中可看出 , 一
点红总黄酮提取液对由 Fenton体系产生的 · OH有一定的清除
作用 , 随着一点红总黄酮提取液浓度的增加 , 对· OH自由基的
清除能力也增强 ,说明当黄酮类物质的浓度增加时 ,其清除率也
增大。
图 1　一点红总黄酮提取液浓度与自由基清除率的关系
3　讨论
实验结果表明 , 本实验方法工艺简单 , 回收率为 100%。 利
用本文所提供的超声波提取 、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯
度较高。超声波可以强化乙醇浸提法 ,达到省时 、高效 、节能的目
的 , 此方法采用全物理过程 , 无任何污染 ,是一条理想的提取黄酮
类物质的途径 ,具有广阔的应用前景。
黄酮类化合物是一大类天然产物 , 广泛存在于植物界 , 是许
多中草药的有效成分 ,具有很高的药用价值。在自然界中最常见
的是黄酮和黄酮醇 ,其它包括双氢黄(醇)、异黄酮 、双黄酮 、黄烷
醇 、查尔酮 、橙酮 、花色苷及新黄酮类等 [ 4] 。天然来源的生物黄
酮分子量小 ,能被人体迅速吸收 , 能通过血脑屏障 ,能进入脂肪组
织 , 进而体现出如下功能:消除疲劳 、保护血管 、防动脉硬化 、扩张
毛细血管 、疏通微循环 、抗脂肪氧化 、抗衰老 、活化大脑及其他脏
器细胞的功能。黄酮类化合物具有抗癌 、抗肿瘤 、抗心脑血管疾
病 、抗炎镇痛 、免疫调节 、降血糖 、治疗骨质疏松 、抑菌抗病毒 、抗
氧化 、抗衰老 、抗辐射等作用 [ 8, 9] 。近年来 , 世界上掀起了植物药
开发的热潮 , 植物药以其天然低毒的特点倍受青睐 ,而黄酮类化
合物以其广谱的药理作用引人瞩目。一点红分布广泛 ,本文实验
结果表明 , 一点红中含有较为丰富的黄酮 , 其提取物总黄酮对羟
自由基具有很好的清除作用。因此 ,一点红具有广泛的开发和利
用价值 ,值得综合利用 , 加强资源开发。
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