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蒲公英有效成分抑菌试验研究



全 文 :·中草药· 北方园艺2013(01):180~181
第一作者简介:刘丽娟(1972-),女,吉林通化人,硕士,副教授,研
究方向为药用植物营养与栽培。
收稿日期:2012-08-22
蒲公英有效成分抑菌试验研究
刘 丽 娟1,徐 鸿 雁1,王 宏 伟2
(1.通化师范学院 生物系,吉林 通化134002;2.通化市园艺研究所,吉林 通化134001)
  摘 要:为研究蒲公英的抑菌作用,采用K-B纸片扩散法,以蒲公英为原料,用浸提法、水提
法和醇提法的3种蒲公英浸出液滤纸片对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌、黑曲霉、宛氏拟
青霉的抑菌作用进行了研究。结果表明:蒲公英对以上细菌和真菌均有抑菌作用,对细菌的抑制
作用强于真菌,对金黄色葡萄球菌抑制效果最强,对黑曲霉最弱;在3种提取方法中浸提物的抑
菌作用最小,醇提物抑菌作用最明显。
关键词:蒲公英;抑菌活性;K-B法
中图分类号:S 647 文献标识码:B 文章编号:1001-0009(2013)01-0180-02
  蒲公英(Taraxacum mongolicumHand.-Mazz.)属菊
科植物,别名黄地花丁、婆婆丁。全草入药,性寒,味苦、
甘,入肝、胃经,具清热解毒、消痛散结的功效,在中草药
里属清热解毒类药物。多用于治疗疮疔、流行性腮腺
炎、乳痛肿、黄疸、蛇虫咬伤、尿路感染等症[1]。蒲公英有
广谱抗菌作用,其主要抗菌成分为咖啡酸和绿原酸,不
同品种不同产地蒲公英其含量差异很大[2]。全国大部
分地区均有分布,我国共有70余种,其中以蒙古蒲公英
(T.mongolicum)分布最广,临床上应用也最多[3-4],适应
性强,遍地皆有,寻常易得,特别是我国北方地区生长较
为普遍。该试验采用3种细菌、2种真菌进行相关的抑
菌试验,以观察中药蒲公英的体外抑菌效果。
1 材料与方法
1.1 试验材料
试验用蒲公英样品采自通化师范学院附近野生品
种。培养基:培养细菌采用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基,
培养真菌采用PDA培养基[5]。菌种:枯草芽孢杆菌
(Bacilus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus
aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)由通化师范学院生
物系微生物学实验室提供。黑曲霉(Aspergilus niger)、
宛氏拟青霉(Paecilomyces varioti)购于广东省微生物研
究所。
1.2 试验方法
1.2.1 菌种活化培养和菌液的制备 将枯草杆菌、大肠
杆菌、金黄色葡萄球菌分别接种到牛肉膏蛋白胨斜面培
养基中,37℃培养24h后,用比浊法将各菌株用无菌水
配制成菌悬液,备用[6]。用接种环刮取适量霉菌孢子,
放入装有无菌水带塞锥形瓶中,并配成菌悬液备用。
1.2.2 蒲公英的浸提法 将阴干蒲公英嫩枝剪碎,称取
100g,置烧杯中加蒸馏水浸泡24h,过滤取其药液备用。
1.2.3 蒲公英的水提法 将阴干蒲公英嫩枝剪碎,称取
50g,置烧杯中加蒸馏水浸泡30min后加热煮沸,再用
文火加热30min,过滤得第1次水提取物,将滤渣用同
样方法得第2次、第3次水提取物,合并3次滤液,置于
烧杯中,在70℃恒温水浴锅中蒸发浓缩至50mL,得到
蒲公英水提物(含生药量1g/mL)[7]。
1.2.4 蒲公英的醇提法 用50%乙醇对蒲公英浸泡
12h,80℃水浴箱中热浸4h,滤液用文火浓缩,制成浓度
为1g/mL的药液备用。
1.2.5 K-B纸片扩散法测定抑菌活性 用打孔器把定
性滤纸打成6mm直径的圆片,放置于洁净干燥的培养
皿中干热灭菌。在盛有直径为6mm的小滤纸片的干燥
培养皿中倒入提取液10mL,浸泡30min后,取出置于
另一干燥培养皿中,60℃烘干备用。在超净工作台上向
牛肉膏蛋白胨琼脂平板中加入0.2mL细菌的菌悬液,
霉菌则接种到PDA平板中,各重复3次,L型涂布器涂
布均匀,将药敏纸片等距放入含菌平板,细菌37℃培养
24h后,霉菌28℃培养48~72h后观察记录结果[8]。另
设蒸馏水做对照。观察生长情况,用卡尺测量每一个抑
制圈的直径。
1.2.6 最低抑菌浓度(MIC)的测定 将上述蒲公英水
提物和醇提物 (浓度100%)用蒸馏水稀释配制成浓度
为1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、40%的试液,
采用滤纸片扩散法测定各种菌的最低抑菌浓度。以滤
纸片周围刚出现抑菌圈的浓度为最低抑菌菌浓度
(MIC)[9],各浓度设3次重复,取平均值。
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北方园艺2013(01):180~181 ·中草药·
2 结果与分析
由表1可知,蒲公英对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、
枯草杆菌、黑曲霉、青霉均有抑菌作用,对金黄色葡萄球
菌抑制效果尤为显著,对黑曲霉抑制效果最不明显。比
较蒲公英3种提取方法所得产物的抑菌效果发现,水提
物抑菌圈直径要小于醇提物,说明醇提法的效果比水提
法明显,而在3种提取方法中浸提物的抑菌作用最弱。
3种提取方法对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等细菌的抑
菌圈直径均大于真菌,说明对细菌的抑制作用要大于黑
曲霉和青霉这2种真菌。
表1  蒲公英不同提取物对
5种菌抑菌圈直径的影响 mm
提取物 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 枯草杆菌 黑曲霉 宛氏拟青霉
浸提物 9.0  8.5  8.2  7.0  7.8
水提物 10.5  10.5  10.0  7.5  9.5
醇提物 12.5  12.0  11.5  8.5  11.0
  由表2可以看出,蒲公英水提物和醇提物对黑曲霉
的抑菌作用不明显,最低抑菌浓度分别为40%和30%,
对其它4种菌均有明显的抑菌作用,最低抑菌浓度均为
6%以下,有显著的抑菌作用。
表2 蒲公英不同提取物对各菌的
最小抑菌浓度(MIC)
提取物 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 黑曲霉 枯草杆菌 宛氏拟青霉
水提物 4  5  40  6  6
醇提物 3  4  30  5  5
3 结论
蒲公英的浸提物、水提物和醇提物对金黄色葡萄球
菌、大肠杆菌、枯草杆菌、黑曲霉、青霉均有抑菌作用,对
金黄色葡萄球菌抑制作用显著,对黑曲霉最弱;在3种
提取方法中浸提物的抑菌作用最小,醇提物抑菌作用最
明显,且对细菌的抑制作用强于真菌。从最低抑菌浓度
讲,蒲公英水提物和醇提物对黑曲霉最低抑菌浓度大于
30%,抑菌作用不明显,对其它4种菌最低抑菌浓度均为
6%以下,抑菌作用显著。
临床资料表明,清热解毒中草药对多种细菌所致的
感染性疾病有良好的治疗效果。现代试验研究显示,清
热解毒类中草药能抑制细菌的糖、蛋白质、核酸代谢,抑
制细菌繁殖,提高巨噬细胞、中性白细胞吞噬功能[10]。
该试验所用蒲公英具有清热解毒作用,其水提物和醇提
物对该试验提供的常见菌种都有相近最低抑菌浓度(黑
曲霉除外)和不同程度的抑菌作用,其中金黄色葡萄球
菌是人类最重要的化脓性球菌,医务人员带菌率高达
70%,是医院内交叉感染的重要传染源[11],研究对这些
菌种的抑菌作用可为临床提供理论依据。
参考文献
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Study on Effective Antimicrobial Ingredients Experimental of
TaraxacummongolicumHand.-Mazz
LIU Li-juan1,XU Hong-yan1,WANG Hong-wei 2
(1.Department of Biology,Tonghua Normal University,Tonghua,Jilin 134002;2.Tonghua Horticulture Institute,Tonghua,Jilin 134001)
Abstract:In order to study the inhibitory efect T.mongolicum Hand.-Mazz,using K-B disk difusion method and T.
mongolicumHand.-Mazz as raw materials,the inhibitory efect of three T.mongolicum Hand.-Mazz leaching of filter
paper tablet using extraction,water and alcohol references on Staphylococcusaureus,Escherichia coli,Bacilus subtilis,
Aspergilus niger,Penicilium varioti were studied.The results showed that T.mongolicum Hand.-Mazz had
antimicrobial efect on those bacteria and fungi,the bacteria more than fungi,it had the strongest inhibitory efect on
Staphylococcus aureus and the weakest efect on the Aspergilus niger;among the three methods,the role of the extracts
was the smalest,the antimicrobial efect of alcohol extract was the most obvious.
Key words:Taraxacum mongolicum;antibacterial activity;K-B method
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