全 文 ：蒲公英对 Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织 IFN-γ表达的影响

罗江秀 1 ，钟超 1，夏承来 2 （1.深圳市光明新区人民医院药剂科，广东 深圳 518106，2.广州医科大
学附属第三医院药学部，广东 广州 510150）

[摘要] 目的：为了研究蒲公英对 Lewis 肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织 IFN-γ 表达的影响。方法：建立肺癌荷瘤
小鼠动物模型，处死小鼠，采用 Wester blot和 RT-PCR研究不同浓度（0，31.3，62.5，125，250，500 mg
﹒ml-1）的蒲公英以及 500 mg﹒ml-1蒲公英在不同时间（0，12，24，48 h）对肺癌组织 IFN-γ 表达的影响。
结果：随着蒲公英浓度和作用时间的增加，肺癌组织 IFN-γ 表达降低。结论：蒲公英对 Lewis肺癌荷瘤小
鼠肿瘤组织 IFN-γ 表达呈现明显的时效-量效关系，提示蒲公英对 Lewis 肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织的抑制作
用和 IFN-γ 有关。
[关键词] 蒲公英；干扰素-γ ；Lewis肺癌荷瘤小鼠；肺癌
[中图分类号]R966 [文献标识码] A [文章编号] 1001-5213

Influence of dandelion extracts on the expression of IFN-γ in the
Lewis cancer cells of mice

LUO Jiang-xiu
1，ZHONG Chao1, XIA Cheng-lai 2 (1.Department of Pharmacy of Guangming New
District People’s Hospital, Guangdong Shenzhen 518106, China；2.Department of Pharmacy, The
Third affiliated Hospital, Guangzhou Medical University, Guangdong Guangzhou510150, China)

ABSTRACT:OBJECTIVE To identify the influence of dandelion extracts on the expression
of IFN-γ in the Lewis cancer cells of mice. METHODS By using RT-PCR and Western blot
methods, the effects of different concentration of dandelion extracts (31.3, 62.5, 125, 250, 500 mg
﹒mL-1) and different acting times of dandelion extracts (24, 36, 48h) on the expression of IFN-γ
in Lewis cancer cells of mice were observed. RESULTS Along with the increase of dandelion
extract concentration, the dandelion extracts could decrease the expression of IFN-γ in Lewis
cancer cells of mice in a concentration-dependent manner.. CONCLUSION The extracts from
dandelion could inhibit the growth of Lewis cancer cells of mice, which related its effect on the
expression of IFN-γ.
KEY WORDS: dandelion extracts; IFN-γ; Lewis mice; cancer

恶性肿瘤严重危害着人类的健康，尤其是肺癌，位列致死病因的第 2位，仅次于心血
管疾病。世界卫生组织（WHO）的调查数据显示，全球新发恶性肿瘤患者男性 530 万，女性
470 万，现患人数超过 2 200 万，死于这一疾病的 620 万，占总死亡人数的 12.6%，预计到
2020 年每年新发生的病人将达 1 570万，死亡 1 000万，在发展中国家癌症总数将增加 73%，
发达国家为 29%。我国的调查结果显示，1970—1990 年 20 年间癌症调整死亡率上升 12%，
2000 年癌症发病人数 180～200 万，占世界总数的 1/5；死亡人数 140～150万，占世界总数
的 1/4。在城市居民中，癌症已占死因的首位。
近来的大量研究表明，蒲公英可以抑制体外培养的肿瘤细胞生长[1-2]，蒲公英根提取物，
蒲公英多糖等均具有一定的防癌、抑癌作用以及抑制肿瘤引起的炎症反应[3-4]。但是其抗肿
瘤的机制并不明确。在本研究中，我们以 Lewis 肺癌荷瘤小鼠为模型，观察其对肿瘤组织
IFN-γ 表达的影响，为开发本方药新用途提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验药物 药用蒲公英（产地新疆）购自老百姓大药房，由深圳市光明新区人民医院
药剂科钟超副主任药师鉴定。本文所选用的药用蒲公英是蒲公英全草经热水提取，减压浓缩
后喷雾干燥过 80 目筛而制成粉末，得率为 90%。
1.2 实验动物 SPF级近交 es7BL/6 纯系小鼠 60只，6～8周龄，雄性，体质量 16～20 g，
购于中山大学实验动物部，合格证号:粤实动证字 2009139 号，饲养于中山大学实验动物学
部 SPF 级动物实验室内。实验动物动物采用随机数字表的方法，随机分成正常对照组、模型
对照组、药物处理组。
1.3 细胞培养 Lewis 肺癌细胞为本研究室保留所得。将 Lewis肺癌细胞置于含 10%小牛血
网络出版时间：2014-02-24 10:09
网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/doi/10.13286/j.cnki.chinhosppharmacyj.2014.0088.html
清，100 U﹒ml-1青霉素，100 U﹒ml-1链霉素的 DMEM培养基中，置于含 5% CO2，饱和湿度、
37 ℃恒温培养箱中培养，每日观察细胞情况，及时更换培养液。细胞状态和总数达到要求
后，台盼蓝拒染法测定活细胞数大于 95%，用无血清培养基调节细胞浓度为 lxl07个﹒ml-1，
制成细胞悬液备用。
1.4 试剂 DMEM 培养基购自 Gibco 公司；小牛血清和胰蛋白酶购自杭州四季青生物技术公
司； MTT(四甲基偶氮唑蓝)、DMSO(二甲基亚砜)和Con-A购自美国AMRESCO公司；anti-IFN-γ
抗体购自美国 RD 公司。
1.5 Lewis 肺癌小鼠模型的建立 无菌条件下，给小鼠体内接种细胞悬液。皮下接种后，
待瘤体形成，可以触及皮下直径约 3～6 mm 肿块后，开始给药，腹腔注射，分为荷瘤对照组
及不同浓度蒲公英提取物处理组，每组 10 只。荷瘤组为灭菌水，不同浓度蒲公英提取物
（31.3，62.5，125，250，500 mg﹒ml-1），连续 14 d。每天密切观察小鼠生活状态(精神、
进食、毛发色泽、活动、聚集现象)，体质量变化，并用游标卡尺测量肿瘤最长径(a)和最短
径(b)，做详细记录。处死小鼠，分离肿瘤组织备用。正常对照组不接种细胞悬液。
1.6 RT-PCR 按常规方法提取组织总 RNA，严格按照逆转录试剂盒说明书将总 RNA 反转录
为 cDNA，-20 ℃备用。根据 GenBank 中公布的基因序列，通过 Premier5.0软件设计 PCR 特
异性引物，聚合酶链反应引物由上海生物工程有限公司合成。扩增条件为: 94 ℃预变性 5
min，94 ℃变性 30 s，退火 30 s，72 ℃ 45 s，共 30个循环，72 ℃延伸 7 min。PCR 产物
分析及半定量计算。PCR 扩增产物通过 1.5%琼脂糖凝胶电泳，计算 TNF-α 和 GAPDH 条带密
度比值(TNF-α /GAPDH)，作为各基因相对表达强度。引物序列如下：IFN-γ (514bp)
Sense-primer:5’-CACTCGACCTTAATCTA-3’;anti-senseprimer:5’-CTCTTGATTCAATGCTTCA
-3’.. GAPDH (302bp): sense primer: 5’-TGTCGCTGTTGAAGTCAGAG-3’；anti-sense primer:
5’-TCACCA TCTTCCA GGAGCG AG-3’。
1.7 Westernblot 按常规方法提取组织蛋白， BCA 法进行蛋白质定量，取 30 µg 蛋白质
加入 1xSDS凝胶加样缓冲液中，在 100 ℃加热 10 min以使蛋白质变性，聚丙烯酰胺凝胶进
行电泳分离，转 PDVF 膜，丽春红染色观察转移效果，并确定蛋白质分子质量标准位置。封
闭液封闭 2 h，按 1：1 000 加入一抗，4Y 孵育过夜，TBST 洗 3 次，按 1：1 000 的稀释倍
数加入辣根过氧化物酶标记二抗，室温孵育 1 h，TBST 洗 3次，用蛋白质印迹荧光检测试剂
盒显示于 X 光片。结果用 Geniu 凝胶图像分析系统对胶片扫描，以对照组的面积灰度值为
100％与实验组进行比较和半定量分析。
1.8 统计学分析 所有数据采用 SPSS 13.0 统计软件进行分析。计量资料以 sx  表示，
两组间比较采用 t检验，以 P < 0. 05 为差异有统计学意义。两变量的相关程度采用 Spearman
秩相关分析法。
2 结果
2.1 蒲公英提取物对体重的影响 由表 1 可见，小鼠初始体质量及终末体质量在各组间无
明显差异，蒲公英提取物不影响小鼠的体重增长，见表 1。
表 1蒲公英提取物对 Lewis肺癌荷瘤小鼠体质量的影响（ sx  ）
Tab 1 Influence of dandelion extracts on the body weight of mice bearing Lewis cancer
组别 药物剂量/mg﹒ml-1 n 初体质量/g n 终体质量/g
正常对照组 0 10 18.22±0.16 10 33.12±0.21
荷瘤对照组 0 10 18.62±0.46 9 32.62±1.46
蒲公英 31.3 10 18.59±0.45 8 32.59±1.53
提取物 62.5 10 18.58±0.39 9 31.64±0.96
125 10 18.53±0.46 8 33.57±1.37
250 10 18.61±0.31 9 31.51±0.72
500 10 18.53±0.36 8 30.82±2.48
2.2 蒲公英提取物对小鼠瘤重及抑瘤率的影响 由表 2 可见，与对照组相比，各剂量组瘤
重减轻，抑瘤率增加，见表 2。
表 2 蒲公英提取物对小鼠瘤重及抑瘤率的影响（ sx  ）
Tab 2 Influence of dandelion extracts on the tumor weight and tumor inhibition ratio in mice
组别 药物剂量/mg﹒ml-1 n 瘤重/g 抑瘤率/%
正常对照组 0 10 / /
荷瘤对照组 0 10 1.26±0.39 /
蒲公英 31.3 10 1.06±0.22* 15.8
提取物 62.5 10 0.96±0.18* 23.8
125 10 0.83±0.25* 34.1
250 10 0.76±0.15* 39.7
500 10 0.67±0.12* 46.8
注：P<0.01，药物组 vs 荷瘤对照组
2.3 不同浓度的蒲公英提取物对荷瘤小鼠肿瘤组织 IFN-γ mRNA 表达的影响 分别用不同
浓度（0，31.3，62.5，125，250，500 mg﹒ml-1）的蒲公英提取物处理小鼠后，分离瘤体，
提取组织总 RNA，与对照组(0 ng﹒ml-1)比较，随着蒲公英提取物浓度的增加，IFN-γ 的表
达明显下降。说明蒲公英提取物抑制 IFN-γ 的表达，并且呈浓度依耐性，见图 1。
Compound concentration(mg/ml)
R
e
la
ti
v
e
D
e
n
s
it
y
0.0
.2
.4
.6
.8
1.0
1.2
1.4
IFN-
0 62.5 125 250 50031.3

图 1不同浓度的蒲公英提取物对荷瘤小鼠肿瘤组织 IFN-γ mRNA表达的影响
Fig 1 Effects of different concentration of dandelion extracts on the expression of IFN-γ mRNA
in the Lewis cancer mice
2.4 不同浓度的蒲公英提取物对荷瘤小鼠肿瘤组织 IFN-γ 表达的影响 分别用不同浓度
（0，31.3，62.5，125，250，500 mg﹒ml-1）的蒲公英提取物处理小鼠后，分离瘤体，提取
组织总蛋白，与对照组(0 ng﹒ml-1)比较，随着蒲公英提取物浓度的增加，IFN-γ 的表达明
显下降。说明蒲公英提取物抑制 IFN-γ 的表达，并且呈浓度依耐性，见图 2。

Compound concentration(mg/ml)
R
e
la
ti
v
e
D
e
n
s
it
y
0.0
.2
.4
.6
.8
1.0
1.2
1.4
IFN-
0 62.5 125 250 50031.3

图 2 不同浓度的蒲公英提取物对荷瘤小鼠肿瘤组织 IFN-γ 表达的影响
Fig 2 Effects of different concentration of dandelion extracts on the expression of IFN-γ in the
Lewis cancer mice

2.5 500 mg﹒ml-1 的蒲公英提取物处理荷瘤小鼠肿瘤组织不同时间后，IFN-γ 的表达情况
小鼠肿瘤形成后，分别于不同时间（0，12，2，48 h）用 500 mg﹒ml-1的蒲公英提取物处理
荷瘤小鼠，与对照组(0 h)比较，随着蒲公英提取物处理时间的延长，IFN-γ 的表达明显下
降。说明蒲公英提取物抑制 IFN-γ 的表达，并且呈时间依耐性，见图 3。
Compound concentration(g/ml)
R
e
la
ti
v
e
D
e
n
s
it
y
0.0
.2
.4
.6
.8
1.0
1.2
1.4
IFN-
0 24 48 72

M 1 2 3 4 5 6
IFN-γ
IFN-γ
β-actin
β-actin
图 3 蒲公英提取物在不同时间下对荷瘤小鼠肿瘤 IFN-γ 的表达的影响)
Fig 3 Effects of different acting times of dandelion extracts on the expression of IFN-γ in the
Lewis cancer mice

3 讨论
在全球工业化发展的今天，恶性肿瘤的发病率，尤其是肺癌也呈现不断上升的趋势[5-6]。
虽然外科技术和放、化疗技术的迅猛发展，为治愈肿瘤提供了可能。但是外科手术的局限性
和化疗药物对患者产生了巨大副作用，对患者的恢复极其不利。生物治疗肿瘤方案也因价格
昂贵，使之发展遭遇到了瓶颈。我国幅员辽阔，中医治疗肿瘤具有许多宝贵的经验。近年来，
中医在防治肿瘤方面的逐步体现了它的优势。中西医结合，开发我国独特的抗肿瘤药物，改
善患者生活质量，延长患者的生存期。
由于现在医疗模式的转变，开发特异性强、高效、副作用小的抗肿瘤药物已经迫在眉睫。
与其他的抗肿瘤药物相比，天然植物的化学成分对肿瘤细胞的多靶点效应成为其抗肿瘤作用
的重要特点和优势。我们具有丰富的天然药物资源，很多植物药都具有抗肿瘤、抗突变和调
节免疫功能的作用，有广泛的开发前景和应用价值。
研究表明，蒲公英提取物对人黑色素瘤细胞的生长具有一定的抑制作用[7-8]。同时，蒲
公英的倍半萜内酯糖苷水解产物吉玛酸可诱导人急性早幼粒白血病 HL-60 细胞向单核细胞
系/巨噬细胞系分化[9-10]，提示蒲公英可能在人急性早幼粒白血病治疗方面很有研究前景。
并且我们的研究也发现，蒲公英提取物可以抑制小鼠体内肺肿瘤的生长。但是其治疗机制目
前仍不清楚。IFN -γ 是机体防御系统的重要组成部分，其可与多种免疫细胞包括白细胞和
血小板、免疫分子相互协同，相互制约，促成了机体最佳的抗肿瘤免疫状态。本研究通过将
不同浓度的蒲公英提取物处理 Lewis荷瘤小鼠肿瘤组织后，发现该组织的 IFN-γ 表达下调，
并且呈现浓度和时间依赖性，提示该药物抗肿瘤的机制可能和抑制 IFN-γ 表达有关。作为
一种无毒且具有多种活性的抗肿瘤成分，蒲公英极具开发潜力，其分子结构可以作为抗肿瘤
新药设计的结构基础。但其是否能作为治疗肿瘤的临床药物，还需进一步研究以及在大规模、
严密的试验中得到证实。
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[基金项目] 广东省自然科学基金项目（编号：S2012040006869）；广东省医学科研基金项目（广东省卫生厅 A2012273）：广州市
科技计划项目（穗科信字[2013]166 号，2013J4100102）
[作者简介] 罗江秀，主管药师，Email: luojiangxiu1975@163.com
[通讯作者] 夏承来，副教授，博士，硕士研究生导师，研究方向：抗炎免疫药理学，电话: 020-81292709，Email:
xiachenglai@126.com
[收稿日期]2013-06-03