全 文 ：收稿日期：2012-04-10
基金项目：农业部项目（农计发[2010]29 号）
作者简介：宁 伟（1959-）,男,沈阳农业大学教授,博士,从事药用植物种质资源评价与创新研究。 * 通讯作者 Corresponding author:李天来（1955-）,
男,沈阳农业大学教授,博士,从事设施园艺与蔬菜生理研究。
沈阳农业大学学报，2012－10，43(5)：595-598
Journal of Shenyang Agricultural University，2012－10，43(5)：595-598
东北地区 11种蒲公英咖啡酸和绿原酸的含量测定
宁 伟,贾庆飞,朱 丹,李天来 *
（沈阳农业大学 园艺学院/东北野菜种质异位保存圃与鉴定中心/设施园艺省部共建教育部重点实验室，沈阳 110161）
摘要：比较东北地区不同种蒲公英中咖啡酸和绿原酸的含量.采用 Diamonsil ODS-C18 色谱柱(250mm×4.6mm，5m)，以甲醇-水（含
0.5%冰醋酸）系统梯度洗脱，检测波长为 323nm，流速为 1.0mL·min-1，柱温 35℃。绿原酸 Y=11892X+0.0291，r=0.9991，平均回收率
(n=6)为 98.9 %，RSD 为 1.53%。 回归方程：咖啡酸 Y=17993X-4.6433，r=0.9996，平均回收率(n=6)为 99.5%，RSD 为 2.58%；11 种
蒲公英咖啡酸和绿原酸差异较大，丹东蒲公英中咖啡酸和绿原酸含量最高，戟片蒲公英咖啡酸含量低于药典标准，为蒲公英药材
的质量控制和种质资源评价提供基础性理论依据。
关键词：不同种；蒲公英；绿原酸；咖啡酸；高效液相色谱
中图分类号：R284.1 文献标识码： A 文章编号： 1000-1700（2012）05-0595-04
Determination of Chlorogenic Acid and Caffeic Acid in 11 Species of
Taraxacum distributed in northeast China
NING Wei, JIA Qing-fei, ZHU Dan, LI Tian-lai*
(College of Horticulture/The Germplasm Ectopic Preservation and Identification Center of Potherbs in Northeast China/Key Laboratory of Protected
Horticulture ,Ministry of Education, Shenyang Agricultural University, Shenyang 110161, China)
Abstract： To determ ine the content of caffeic acid and chlorogenic acid in Taraxacum of different species, the fingerprints were
obtained from Agilent 1100 series instrument. Chromatographic experiments were performed on a Diamonsil ODS-C18 (250mm×4.6
mm, 5μm) analytical column, eluted with methand and water, containing 0.5％ acetic acid as the mobile phases in gradient
elution at the flow rate of 1.0 mL·min-1. The detection wavelength was 323nm.The temperature of column was 35℃ . Results
showed that chlorogenicacid Y=11892X+0.0291, r=0.9991, the average recovery was (n=6) 98.9%, RSD 为 1.53%. caffeic acid Y=
17993X-4.6433, r=0.9996, the average recovery was (n=6) 为 99.5%, RSD 为 2.58%. There was grate variance in the content of
Chlorogenic Acid and Caffeic Acid among different species of Taraxacum. The content of T.antungense Kitag. is the highest,
while T. asiaticum Dahlst. is the lower than the standard of pharmacopeia which is not suitable for herb. To some extent this
study can be used to control the quality of the different kinds of Taraxacum．
Key words： different species; Taraxacum; caffeic acid; chlorogenic acid; HPLC
蒲公英为菊科植物蒲公英（Taraxacum mon-golicum Hand.Mazz.）、碱地蒲公英（T. sinicum Kitag）或同属数
种植物的干燥全草[1]。 蒲公英具清热解毒，消肿散结，利尿通淋的功效。 近年来药理试验研究表明，蒲公英具广
谱抗菌作用，临床用于各种急慢性感染，其化学成分研究分离出的咖啡酸和绿原酸具有广谱抗菌作用 [2-4]。 《中
华人民共和国药典》（2005版）采用高效液相色谱法测定其咖啡酸的含量，并规定含咖啡酸不得少于 0．02％。 但
药典中未详细说明究竟有哪几种可蒲公英入药 [5]。 目前市场上药用的蒲公英，未考虑种间差别，其质量控制主
要研究不同产地的蒲公英[6-8]，不同种蒲公英的外观形态、组织构造相似，但其活性成分是否存在差异并进行深
入的研究。 为了更好的开发、利用蒲公英资源，本试验利用高效液相色谱法，以咖啡酸、绿原酸为指标，对东北
地区 11种蒲公英有效成分含量进行测定，为蒲公英质量控制、种质资源评价和优良品种筛选提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
仪器为：Agilent 1100 型高效液相色谱仪（在线脱气、四元泵、柱温箱、自动进样器、二极管阵列检测器、HP-
Chem station）；万分之一电子分析天平（上海第二天平仪器厂 MA110型）；超声清洗器；旋转蒸发仪，回流装置等。
第 43卷沈 阳 农 业 大 学 学 报
药品为：蒸馏水，乙醇（分析纯），冰醋酸，甲醇（色谱纯）。 11份不同种蒲公英（表 1）药材均经中科院沈阳应用生
态所李冀云教授鉴定。采收于 2010年 4月份，连根挖出，去掉杂质，洗净，晒干即可。咖啡酸、绿原酸对照品购于
中国药品生物制品检定所，批号分别为 1108852200102， 1107532200212。
表 1 样品来源
Table 1 The source of samples
编号
NO.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
种名
Specific name
丹东蒲公英 T.antungense Kitag.
卷苞蒲公英 T. urbanum Kitag.
光苞蒲公英 T.lamprolepsis Kitag.
兴安蒲公英 T. falcilobum Kitag.
朝鲜蒲公英 T.coreanum Nakai.
蒙古蒲公英 T. mongolicum Hand. -Mazz.
戟片蒲公英 T. asiaticum Dahlst.
东北蒲公英 T.ohwianum Kitam.
辽东蒲公英 T. liaotungense Kitag.
亚洲蒲公英 T.asiaticum Dahlst.
凸尖蒲公英 T. sinomongolicum Kitag.
来源
Source
辽宁沈阳、丹东、本溪 Liaoning Shenyang,Dandong,Benxi
辽宁本溪、丹东、朝阳 Liaoning Benxi,Dandong,Chaoyang
辽宁沈阳、朝阳、本溪 Liaoning Shenyang, Benxi,Chaoyang
内蒙赤峰、辽宁沈阳、本溪 Inner Mongolia.Chifeng, Liaoning Shenyang, Benxi
辽宁沈阳、朝阳、本溪 Liaoning Shenyang, Chaoyang,Benxi
辽宁本溪、丹东、朝阳 Liaoning Benxi,Dandong,Chaoyang
辽宁沈阳、朝阳、本溪 Liaoning Shenyang, Chaoyang,Benxi
辽宁本溪、丹东、朝阳 Liaoning Benxi,Dandong,Chaoyang
辽宁沈阳、朝阳、本溪 Liaoning Shenyang, Benxi,Chaoyang
吉林磐石、辽宁沈阳、朝阳 Jilin Panshi, Liaoning Shenyang, Chaoyang
内蒙赤峰、辽宁沈阳、本溪 Inner Mongolia Chifeng, Liaoning Shenyang, Benxi
1.2 方法
1.2.1 色谱条件 色谱柱为 Diamonsil C18(2.0mm×150mm，5μm)；流动相：甲醇(A)-0.5%冰乙酸水(B)梯度洗
脱，B相浓度梯度：0~25min(90%~80%)，25~40min(80%~70%)；流速 0.5mL·min-1；检测波长 323nm；柱温 35℃；进
样量 5μL[9]。
1.2.2 样品制备
1.2.2.1 对照品溶液制备 取咖啡酸、 绿原酸和木犀草素对照品适量， 分别加甲醇溶解并稀释成质量浓度为
88，36，70μg·mL-1对照品溶液，过 0.45μm 微孔滤膜，即得。
1.2.2.2 供试品溶液制备 取蒲公英药材 5g，精密称定，加 30倍量 70%乙醇，加热回流提取 2次，每次 1.5h，过
滤，蒸干，加入适量甲醇溶解，转移至 50mL容量瓶中定容至刻度，摇匀，过 0.45μm 微孔滤膜， 取续滤液进样。
1.2.3 蒲公英中咖啡酸、绿原酸、木犀草素的对照品、供试品的 HPLC 图谱 按上述色谱条件，精密吸取供试
品溶液、对照品溶液各 5μL，注入高效液相色谱仪中，绘制色谱图（图 1）。 由色谱图提示，在对照品色谱相应的
位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰。
2 结果与分析
2.1 方法学考察结果
2.1.1 线性关系考察 精密吸取 0.2，0.4，0.8，1.6，3.2，6.4mL绿原酸对照品贮备液， 分别置 6个 10mL 量瓶中，
加水稀释至刻度， 摇匀， 分别精确吸取 10μL 进样， 按色谱条件测定峰面积， 以质量浓度（C）为横坐标， 峰
图 1 对照品（A）和供试品（B）色谱图:1.绿原酸； 2.咖啡酸
Figure 1 The HPLC chromatograms of standards （A）and Taraxacum sample（B）:1.Chlorogcnic acid； 2.Caffcic acid
（A） （B）
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第 5期 宁 伟等：东北地区 11种蒲公英咖啡酸和绿原酸的含量测定
面积值(A)为纵坐标绘制标准曲线， 计算得绿原酸回归方程 Y=11892X+0.0291，r=0.9991。 结果表明绿原酸在
1.76~56.32μg·mL-1与峰面积线性关系良好。 精密吸取 0.2，0.4，0.8，1.6，3.2，6.4mL咖啡酸对照品贮备液， 分别
置 6 个 10mL 量瓶中， 加水稀释至刻度， 摇匀， 分别精确吸取 10μL 进样， 按色谱条件测定峰面积， 以质量
浓度(C)为横坐标， 峰面积值(A)为纵坐标绘制标准曲线， 计算得咖啡酸回归方程 Y=17993X-4.6433，r=0.9996。
结果表明咖啡酸在 2~64μg·mL-1与峰面积线性关系良好。
2.1.2 精密度试验 取 1 份供试品溶液， 在上述色谱条件下连续进样 5 次， 记录绿原酸和咖啡酸的峰面积，
RSD（%）值分别为 1.76 %和 2.04 %，表明仪器精密度良好。
2.1.3 稳定性试验 取 1 份供试品溶液，室温放置，分别在 0，2，4，6，8，10，12，24h 进样分析，记录绿原酸和咖
啡酸的峰面积，RSD（%）值分别为 2.37%和 2.15%，结果表明样品在 24h内稳定。
2.1.4 重现性试验 取丹东蒲公英粉末，平行制备 5 份供试液，在上述色谱条件下进行测定，记录绿原酸和咖
啡酸的峰面积，RSD（%）分别为 2.63%和 2.29%，结果表明方法重现性良好。
2.1.5 加样回收率试验 精密称取已知咖啡酸和绿原酸含量的丹东蒲公英粉末 5 份，每份 5g，加入一定量的
对照品， 制备供试品溶液， 每份平行测定 3 次， 绿原酸和咖啡酸样品的平均回收率分别为 98.9%和 99.5%，
RSD%分别为 1.53%和 2.58%（n=6）。
2.2 绿原酸和咖啡酸的测定结果
每批样品进样 3次，根据外标法计算不同蒲公英材料的绿原酸、咖啡酸含量，结果表明（表 2）：不同种蒲公
英全草的咖啡酸和绿原酸含量种间存在差异。 主要表现为：丹东蒲公英全草的绿原酸和咖啡酸含量均高于其
他种蒲公英。 其中绿原酸含量在光苞蒲公英、蒙古蒲公英和东北蒲公英种间差异较小，较其他蒲公英种含量较
高；卷苞蒲公英和兴安蒲公英含量居中；朝鲜蒲公英、亚洲蒲公英和凸尖蒲公英种间差异较小，且含量也较少；
戟片蒲公英和辽东蒲公英含量较接近，且含量最低。 关于咖啡酸含量在蒙古蒲公英和东北蒲公英中含量相近
且较高；卷苞蒲公英、光苞蒲公英、朝鲜蒲公英、亚洲蒲公英和凸尖蒲公英中含量居中，种间差异较小；兴安蒲
公英与辽东蒲公英种间差异较小含量较低；戟片蒲公英极显著低于其余几种蒲公英。
表 2 不同种蒲公英的咖啡酸和绿原酸含量测定结果(n=3)
Table 2 The content of caffcic acid and chlorogcnic acid in the different species of Taraxacum (n=3)
编号
No.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
蒲公英材料
Taraxacum material
丹东蒲公英 T.antungense Kitag.
卷包蒲公英 T. urbanum Kitag.
光苞蒲公英 T.lamprolepsis Kitag.
兴安蒲公英 T. falcilobum Kitag.
朝鲜蒲公英 T.coreanum Nakai.
蒙古蒲公英 T. mongolicum Hand. -Mazz.
戟片蒲公英 T. asiaticum Dahlst.
东北蒲公英 T.ohwianum Kitam.
辽东蒲公英 T. liaotungense Kitag.
亚洲蒲公英 T.asiaticum Dahlst.
凸尖蒲公英 T. sinomongolicum Kitag.
绿原酸含量/mg·g-1
Content of chlorogenic acid
0.802
0.694
0.755
0.524
0.438
0.791
0.338
0.779
0.394
0.406
0.417
咖啡酸含量/mg·g-1
Content of caffeic acid
0.454
0.256
0.286
0.216
0.244
0.394
0.184
0.367
0.205
0.225
0.258
3 讨论
咖啡酸在 323nm处有最大吸收，绿原酸在 327nm处有最大吸收。考虑到咖啡酸含量较低，所以本试验选用
323nm为检测波长，在此波长下绿原酸吸收值也较大。本试验应用 HCLP测定蒲公英有效成分咖啡酸和绿原酸
的含量，峰形良好，与相邻色谱峰均能很好地分离，快速、准确、重现性好，可用于蒲公英及其制剂的质量控制。
本试验对东北地区 11 种蒲公英进行咖啡酸和绿原酸的含量测定结果表明，其含量差异较大，丹东蒲公英咖啡
酸和绿原酸含量最高，蒙古蒲公英、东北蒲公英、光苞蒲公英含量也比较高，戟片蒲公英含量最低。 绿原酸含量
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第 43卷沈 阳 农 业 大 学 学 报
比咖啡酸含量高，大约为咖啡酸的 2~4倍，且与咖啡酸含量呈现正相关关系。 可为临床用药的有效性和合理性
提供参考，同时为蒲公英种质资源评价提供基础性理论依据。试验结果表明，大部分样品均可达到《中华人民共
和国药典》(2010 版)规定咖啡酸含量不低于 0.02％的要求，只有戟片蒲公英的咖啡酸为 0.0184%，低于药典标
准，不适宜作为药用.蒲公英属的所有蒲公英种是否都可以入药，还需要进一步研究。 因此全面系统的蒲公英种
质资源的评价尤为重要。
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[责任编辑 马迎杰]
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