全 文 ：第二军医大学学报 　２０１６年３月第３７卷第３期 　ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｊｓｍｍｕ．ｃｎ
Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｅｃｏｎｄ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｍａｒ．２０１６，Ｖｏｌ．３７，Ｎｏ．３
ＤＯＩ：１０．１６７８１／ｊ．０２５８－８７９ｘ．２０１６．０３．０３２２ ·论　著·
［收稿日期］　２０１５－０８－２５　　　　［接受日期］　２０１５－０９－２９
［基金项目］　南京军区医学创新课题（ＭＳ０４２）．Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ　ｂｙ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ　Ｐｒｏｊｅｃｔ　ｏｆ　ＰＬＡ　Ｎａｎｊｉｎｇ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ａｒｅａ　Ｃｏｍｍａｎｄ（ＭＳ０４２）．
［作者简介］　刘　翔，硕士生．Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｕｘｉａｎｇ２４６８＠１２６．ｃｏｍ
＊通信作者 （Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ）．Ｔｅｌ：０５１６－８３３４９８２０，Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｚｎｋ２００５＠１６３．ｃｏｍ
甘西鼠尾草总酚酸提取物抗嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞氧化应激
损伤
刘　翔１，任红旗１，２＊，杨　阳３，戴德淑１，柳　云１，李向阳４，颜　超４，华　慧４，刘　瀛４，戴　春５，尹忠诚５，汤仁仙４
１．解放军９７医院徐州医学院附属淮海医院肾内科，徐州２２１００４
２．南京军区南京总医院国家肾脏疾病临床医学研究中心，全军肾脏病研究所，南京２１００１６
３．解放军９７医院徐州医学院附属淮海医院药剂科，徐州２２１００４
４．徐州医学院感染与免疫实验室，徐州２２１００４
５．徐州医学院附属医院肾内科，徐州２２１０００
　　［摘要］　目的　研究甘西鼠尾草总酚酸提取物（ＳＰＥ）在体内和体外对嘌呤霉素氨基核苷（ＰＡＮ）肾病大鼠足细胞以及
ＰＡＮ诱导小鼠足细胞氧化应激损伤的作用。方法　（１）建立ＰＡＮ肾病大鼠动物模型，给予ＳＰＥ和他克莫司干预，分别在第
５、１０、１５、２１天留取肾组织标本，ＷＴ１染色计数足细胞数目，免疫荧光观察８－羟基脱氧鸟苷（８－ＯＨｄＧ）荧光强度。（２）体外采用
ＰＡＮ致足细胞损伤模型，ＰＡＮ作用小鼠足细胞２４ｈ，分别加入含ＳＰＥ、丹酚酸Ｂ（ＳａｌＢ）、迷迭香酸（ＲＡ）及他克莫司的培养基
培养６、１２、２４、４８ｈ，观察足细胞骨架相关蛋白Ｆ－ａｃｔｉｎ的表达，流式细胞仪分析细胞内活性氧（ＲＯＳ）荧光强度。结果　（１）肾
小球 ＷＴ１细胞计数结果显示，ＰＡＮ组第５天时足细胞数已开始下降，第１５天达（１４．４±０．７）个／肾小球切面，较正常组（３７．２
±１．５）个／肾小球切面减少（Ｐ＜０．０５），ＳＰＥ组与阳性对照组（他克莫司组）各时间点足细胞数量高于ＰＡＮ组；第１５天时，阳性
对照组肾小球 ＷＴ１细胞计数与ＳＰＥ高剂量组较为接近（Ｐ＞０．０５）。第５天时ＰＡＮ组大鼠肾组织８－ＯＨｄＧ荧光强度较正常
组增强，第１０天上升至高峰，而后开始减弱，第１５天时仍高于正常组；给予药物干预后，大鼠肾组织的８－ＯＨｄＧ荧光强度降
低，其中阳性对照组与ＳＰＥ高剂量组８－ＯＨｄＧ荧光强度较为接近。（２）体外研究发现，ＰＡＮ作用２４ｈ后，Ｆ－ａｃｔｉｎ几乎完全解
聚，少数细胞尚有残存的被切断的丝状结构，给予ＳＰＥ、ＳａｌＢ、ＲＡ及他克莫司治疗后，ＰＡＮ诱导的足细胞损伤明显减弱，细胞
内重新出现极性分布的微丝。与正常组相比，ＰＡＮ作用小鼠足细胞２４ｈ后ＲＯＳ荧光强度增加（Ｐ＜０．０５）。给予药物干预后
足细胞内ＲＯＳ荧光强度降低，２４ｈＳＰＥ低剂量组、ＳａｌＢ高剂量组和ＲＡ高剂量组与阳性对照组足细胞内ＲＯＳ的荧光强度降
低程度相近（Ｐ＞０．０５），２４ｈＳａｌＢ降低足细胞内ＲＯＳ荧光强度效果优于ＲＡ，且与药物剂量呈正相关。结论　本研究从体内
及体外证实，ＳＰＥ对ＰＡＮ所致足细胞氧化应激损伤具有保护作用。
［关键词］　嘌呤霉素氨基核苷；足细胞；甘西鼠尾草；总酚酸提取物；丹酚酸Ｂ；迷迭香酸；８－羟基脱氧鸟苷；活性氧
　　［中图分类号］　Ｒ　６９２　　　［文献标志码］　Ａ　　　［文章编号］　０２５８－８７９Ｘ（２０１６）０３－０３２２－０８
Ｓａｌｖｉａ　ｐｒｚｅｗａｌｓｋｉ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄｓ　ａｇａｉｎｓｔ　ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ　ａｍｉｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｉｎ
ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｖｏ
ＬＩＵ　Ｘｉａｎｇ１，ＲＥＮ　Ｈｏｎｇ－ｑｉ　１，２＊，ＹＡＮＧ　Ｙａｎｇ３，ＤＡＩ　Ｄｅ－ｓｈｕ１，ＬＩＵ　Ｙｕｎ１，ＬＩ　Ｘｉａｎｇ－ｙａｎｇ４，ＹＡＮ　Ｃｈａｏ４，ＨＵＡ　Ｈｕｉ　４，
ＬＩＵ　Ｙｉｎｇ４，ＤＡＩ　Ｃｈｕｎ５，ＹＩＮ　Ｚｈｏｎｇ－ｃｈｅｎｇ５，ＴＡＮＧ　Ｒｅｎ－ｘｉａｎ４
１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ，Ｎｏ．９７ Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　ＰＬＡ，Ｈｕａｉｈａｉ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　ｔｏ　Ｘｕｚｈｏｕ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｘｕｚｈｏｕ
２２１００４，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ
２．Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｋｉｄｎｅｙ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ，ＰＬＡ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｋｉｄｎｅｙ　Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ＰＬＡ　Ｎａｎｊｉｎｇ
Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ａｒｅａ　Ｃｏｍｍａｎｄ，Ｎａｎｊｉｎｇ　２１００１６，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ
３．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｎｏ．９７Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　ＰＬＡ，Ｈｕａｉｈａｉ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　ｔｏ　Ｘｕｚｈｏｕ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｘｕｚｈｏｕ　２２１００４，
Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ
４．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，Ｘｕｚｈｏｕ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｘｕｚｈｏｕ　２２１００４，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ
５．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ，Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｘｕｚｈｏｕ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｘｕｚｈｏｕ　２２１０００，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ
·２２３·
第３期．刘　翔，等．甘西鼠尾草总酚酸提取物抗嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞氧化应激损伤
　　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｓａｌｖｉａ　ｐｒｚｅｗａｌｓｋｉｉ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄｓ（ＳＰＥ）ｏｎ　ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ
ａｍｉｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ（ＰＡＮ）－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｉｎ　ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＳＰＥ　ｏｎ　ＰＡＮ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ
ｓｔｒｅｓｓ　ｉｎ　ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ　ｏｆ　ｍｉｃｅ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄｓ （１）Ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ　ｒａｔ　ｍｏｄｅｌ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｂｙ　ＰＡＮ　ａｎｄ　ｗａｓ　ｇｉｖｅｎ　ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ
ｗｉｔｈ　ＳＰＥ　ａｎｄ　ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｎａｌ　ｔｉｓｓｕｅ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｆｏｒ　ＷＴ１ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｔｏ　ｃａｌｃｕｌａｔｅ　ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ
５ｔｈ，１０ｔｈ，１５ｔｈ　ａｎｄ　２１ｓｔ　ｄａｙ．Ｔｈｅ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｉｅｓ　ｏｆ　８－ｈｙｄｒｏｘｙ－２’－ｄｅｏｘｙｇｕａｎｉｎｅ（８－ＯＨｄＧ）ｗｅｒｅ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ　ｂｙ　ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ．
（２）Ｔｈｅ　ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ　ｏｆ　ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｅｘｐｏｓｅｄ　ｔｏ　ＰＡＮ　ｆｏｒ　２４ｈｉｎ　ｖｉｔｒｏ，ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ＳＰＥ，ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄ　Ｂ（ＳａｌＢ），ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ　ａｃｉｄ
（ＲＡ）ｏｒ　ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ　ｗｅｒｅ　ａｄｄｅｄ　ｆｏｒ　６，１２，２４，ａｎｄ　４８ｈｃｕｌｔｕｒｅ．Ｔｈｅｎ　ｔｈｅ　ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ，ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｂｙ
Ｆ－ａｃｔｉｎ，ｗａｓ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｂｙ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒ　ｒｅａｃｔｉｖｅ　ｏｘｙｇｅｎ　ｓｐｅｃｉｅｓ（ＲＯＳ）ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ
ｂｙ　ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ （１）Ｄｅｃｒｅａｓｅ　ｏｆ　ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ　ｐｅｒ　ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ　ｖｏｌｕｍｅ　ａｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ　ｃｏｕｎｔｉｎｇ　ＷＴ１－ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｅｌｓ　ｗａｓ
ｓｔａｒｔｅｄ　ｏｎ　ｄａｙ　５ｉｎ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ　ｅｘｃｅｐｔ　ｎｏｒｍａｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ（ＮＣ）ｇｒｏｕｐ，ａｎｄ　ｏｎ　ｄａｙ　１５ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ　ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ　ｉｎ　ＰＡＮ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｌｅｓｓ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＮＣ　ｇｒｏｕｐ（［１４．４±０．７］／ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ　ｖｏｌｕｍｅ　ｖｓ［３７．２±１．５］／ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ　ｖｏｌｕｍｅ，Ｐ＜０．０５）．
Ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒｓ　ｏｆ　ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ　ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ　ｉｎ　ＳＰＥ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｇｒｏｕｐ（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ　ｇｒｏｕｐ）ｗｅｒｅ　ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ＰＡＮ　ｇｒｏｕｐ　ａｔ
ａｌ　ｔｉｍｅ　ｐｏｉｎｔｓ．Ｔｈｅ　ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ　ｐｏｄｏｃｙｔｅ　ｃｏｕｎｔ　ｏｆ　ｈｉｇｈ－ｄｏｓｅ　ＳＰＥ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｓｉｍｉｌａｒ　ｔｏ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｇｒｏｕｐ　ｏｎ　ｄａｙ　１５（［２１．７±
１．０］／ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ　ｖｏｌｕｍｅ　ｖｓ［２３．６±１．２］／ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ　ｖｏｌｕｍｅ，Ｐ＞０．０５）．Ａｆｔｅｒ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＰＡＮ，８－ＯＨｄＧ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｉｅｓ　ｗｅｒｅ
ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｉｎ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ　ｅｘｃｅｐｔ　ｎｏｒｍａｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｏｎ　ｄａｙ　５；ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｉｅｓ　ｐｅａｋｅｄ　ｏｎ　ｄａｙ　１０ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｂｅｇａｎ　ｔｏ　ｄｅｃｒｅａｓｅ，
ｂｕｔ　ｓｔｉｌ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｎｏｒｍａｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｏｎ　ｄａｙ　１５．Ｔｈｅ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｉｅｓ　ｏｆ　８－ＯＨｄＧ　ｉｎ　ｒｅｎａｌ　ｔｉｓｓｕｅ　ｗａｓ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ａｆｔｅｒ
ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｔｈｏｓｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ　ａｎｄ　ｈｉｇｈ－ｄｏｓｅ　ＳＰＥ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｓｉｍｉｌａｒ．（２）Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｓｔｕｄｙ　ｆｏｕｎｄ　ｔｈａｔ　Ｆ－ａｃｔｉｎ　ｏｆ
ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ　ｗａｓ　ａｌｍｏｓｔ　ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ　ｄｉｓｒｕｐｔｅｄ　２４ｈａｆｔｅｒ　ＰＡＮ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｗｉｔｈ　ｄｉｓｒｕｐｔｅｄ　ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．Ａｆｔｅｒ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
ｗｉｔｈ　ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ，ＳＰＥ，ＳａｌＢ　ａｎｄ　ＲＡ，ｔｈｅ　ＰＡＮ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｉｎｊｕｒｙ　ｏｆ　ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ　ｗａｓ　ｌｅｓｓｅｎｅｄ，ｗｉｔｈ　ｒｅａｐｐｅａｒｅｄ　ｐｏｌａｒｉｔｙ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ
ｏｆ　ｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒ　ｍｉｃｒｏｆｉｌａｍｅｎｔｓ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ＮＣ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ　ＲＯＳ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｉｎ　ＰＡＮ
ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．Ａｆｔｅｒ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｐｏｄｏｃｙｔｅ　ｗｉｔｈ　ｄｒｕｇｓ，ｔｈｅ　ＲＯＳ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ．Ｔｈｅ　ｃｅｌｕｌａｒ　ＲＯＳ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ
ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｓｉｍｉｌａｒ　ｔｏ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ　ｇｒｏｕｐ，ｌｏｗ－ｄｏｓｅ　ＳＰＥ　ｇｒｏｕｐ，ｈｉｇｈ－ｄｏｓｅ　ＳａｌＢ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ＲＡ　ｇｒｏｕｐ　ａｔ　２４
ｈ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ＲＡ，ＳａｌＢ　ｈａｄ　ａ　ｂｅｔｔｅｒ　ｅｆｆｉｃａｃｙ　ｉｎ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ＲＯＳ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｅｆｆｅｃｔ　ｈａｄ　ａ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｄｒｕｇ
ｄｏｓｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｏｕｒ　ｓｔｕｄｙ　ｓｕｇｇｅｓｔｓ　ｔｈａｔ　ＳＰＥ　ｃａｎ　ｐｒｏｔｅｃｔ　ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ　ｆｒｏｍ　ＰＡＮ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｏｘｉｄａｎｔ　ｓｔｒｅｓｓ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．
［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］　ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ　ａｍｉｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ；ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ；Ｓａｌｖｉａ　ｐｒｚｅｗａｌｓｋｉｉ　Ｍａｘｉｍ．；ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄｓ；
ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄ　Ｂ；ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ　ａｃｉｄ；８－ｈｙｄｒｏｘｙ－２’－ｄｅｏｘｙｇｕａｎｉｎｅ；ｒｅａｃｔｉｖｅ　ｏｘｙｇｅｎ　ｓｐｅｃｉｅｓ
［Ａｃａｄ　Ｊ　Ｓｅｃ　Ｍｉｌ　Ｍｅｄ　Ｕｎｉｖ，２０１６，３７（３）：３２２－３２９］
　　甘西鼠尾草（Ｓａｌｖｉａ　ｐｒｚｅｗａｌｓｋｉｉ　Ｍａｘｉｍ．）为唇
形科（ｌａｍｉａｃｅａｅ）鼠尾草属（ｓａｌｖｉａ）植物，又名大紫丹
参、甘肃丹参等，文献报道其药理活性主要有抑制超
氧自由基及抗氧化［１］、醛糖还原酶抑制活性［２］等。
采用大孔吸附树脂分离纯化制备的甘西鼠尾草总酚
酸提 取 物 （Ｓａｌｖｉａ　ｐｒｚｅｗａｌｓｋｉｉ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ
ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄｓ，ＳＰＥ）主要含有迷迭香酸（ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ
ａｃｉｄ，ＲＡ）和丹酚酸Ｂ（ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄ　Ｂ，ＳａｌＢ）等
水溶性酚酸类成分［３］，能够降低血清病性肾小球肾
炎模型大鼠的蛋白尿和正常大鼠的全血黏度［４－５］。
本课题组前期体内实验发现，ＳＰＥ对嘌呤霉素氨基
核苷（ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ　ａｍｉｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ，ＰＡＮ）肾病大鼠
足细胞损伤有一定的保护作用，并且可以降低ＰＡＮ
肾病大鼠蛋白尿［６］。
至于ＳＰＥ是通过何种单体成分发挥保护足细
胞的作用以及其保护足细胞的具体作用机制，目前
尚不明确。既往研究已证实ＰＡＮ诱导的肾小球足
细胞损伤与活性氧（ｒｅａｃｔｉｖｅ　ｏｘｙｇｅｎ　ｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＯＳ）
产生过多有关［７－１１］，ＲＯＳ与其相关的细胞因子相互
作用，导致细胞毒性作用发生［１２］，最严重的氧化应
激损伤是 ＤＮＡ 损伤，体现在８－羟基脱氧鸟苷（８－
ｈｙｄｒｏｘｙ－２’－ｄｅｏｘｙｇｕａｎｉｎｅ，８－ＯＨｄＧ）的 形 成［１３］。
因而，本课题采用ＰＡＮ肾病大鼠模型和体外ＰＡＮ
损伤足细胞模型，探讨ＳＰＥ及其单体是否抑制ＰＡＮ
所致足细胞氧化应激损伤，从而具有保护足细胞的
作用。
１　材料和方法
１．１　ＳＰＥ及其单体制备　ＳＰＥ由徐州医学院附属
淮海医院药剂科中药化学实验室提供，为甘西鼠尾
草干燥根茎药材按照固定工艺［３］制备得到，批号
２００９０９０１－ｂ１５，采用高效液相色谱法进行含量测定
（面积归一化法），测得该提取物中 ＲＡ 含量为
３１．５８％、ＳａｌＢ含量为５．５２％［５］。使用前加入１％羧
甲基纤维素钠（ＣＭＣ－Ｎａ）水溶液配制成５、１０和２０
ｍｇ／ｍＬ的溶液，现配现用。ＲＡ对照品、ＳａｌＢ对照
·３２３·
第二军医大学学报　２０１６年３月，第３７卷
品由本课题组自制［１４］，经高效液相色谱检查（面积
归一化法）纯度均大于９９％。
１．２　主要试剂　ＰＡＮ（Ｓｉｇｍａ，美国），他克莫司（安
斯泰来），３，３－二氨基联苯胺（ＤＡＢ，北京中杉金桥生
物技术有限公司），８－ＯＨｄＧ（Ｔｒｅｖｉｇｒｎ，美国），蛋白
酶Ｋ（Ｓｉｇｍａ，美国），ＲＮａｓｅ　Ａ（Ｓｉｇｍａ，美国），Ａｌｅｘａ
Ｆｌｕｏｒ　４８８标记山羊抗兔ＩｇＧ（上海碧云天生物技术
有限公司），兔抗 ＷＴ１、羊抗兔（Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ，美国），
胎牛血清（ＥｘＣｅｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ），ＲＰＭＩ１６４０培养基、青
霉素和链霉素溶液、０．０５％Ｔｒｙｐｓｉｎ－ＥＤＴＡ（Ｇｉｂｃｏ，
美国），鬼笔环肽（Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ，美国），ＲＯＳ检测试剂
盒（上海碧云天生物技术有限公司）。
１．３　实验动物　雄性清洁级 ＳＤ 大鼠，体质量
１５０～１８０ｇ［徐州医学院实验动物中心提供，许可证
号ＳＣＸＫ（苏）２０１０－０００３］，饲养温度控制在２４～
２６℃之间，湿度６５％，１２ｈ交替照明。饲养期间给
予大鼠普通标准饲料，自由饮食，保持垫料干燥。
１．４　动物模型建立　大鼠随机分为６组，正常组、
模型对照组、阳性对照（他克莫司）组、ＳＰＥ低、中、高
剂量组，每组各１２只。正常组给予生理盐水 ８０
ｍｇ／ｋｇ一次性尾静脉注射，其余给予同等剂量ＰＡＮ
尾静脉一次性注射。注射１ｄ后，每日固定时间正
常组、模型对照组以１０ｍＬ／ｋｇ剂量灌胃给予１％
ＣＭＣ－Ｎａ溶液，阳性对照组以２ｍｇ／ｋｇ剂量灌胃给
予他克莫司溶液，ＳＰＥ低、中、高剂量组以１０ｍＬ／ｋｇ
剂量分别灌胃给予５、１０、２０ｍｇ／ｍＬ　ＳＰＥ溶液。
１．５　标本留取　各组分别在第５、１０、１５、２１天各处
死大鼠３只。大鼠腹腔内注射水合氯醛（３．５ｍｇ／
ｋｇ）麻醉，取腹正中切口，暴露并切取双侧肾脏，肾脏
冠状面取组织。肾皮质组织以１０％甲醛溶液固定，
石蜡包埋，－２０℃冰箱保存。
１．６　ＷＴ１免疫组化染色　石蜡切片常规脱蜡至
水，柠檬酸盐缓冲液（ｐＨ　６．０）抗原修复，室温自然
冷却，ＰＢＳ洗涤；３％ Ｈ２Ｏ２ 室温孵育１０ｍｉｎ，ＰＢＳ洗
涤；１０％山羊血清封闭１ｈ，滴加兔抗 ＷＴ１（１∶１００）
４℃孵育过夜。次日室温复温３０ｍｉｎ，ＰＢＳ洗涤，滴
加羊抗兔（１∶５００）３７℃孵育３０ｍｉｎ，ＰＢＳ洗涤；
ＤＡＢ染色，苏木精着色２ｍｉｎ，脱水、透明，中性树脂
封片后显微镜（Ｏｌｙｍｐｕｓ，日本）观察，每个标本取１０
个肾小球切面，直接在高倍镜下计数 ＷＴ１阳性细
胞数目，取平均值［１５］。
１．７　８－ＯＨｄＧ免疫荧光染色　２μｍ石蜡切片，脱
蜡水化，蛋白酶Ｋ　３７℃孵育２０ｍｉｎ，ＰＢＳ洗涤；浸泡
于缓冲液中３７℃孵育１ｈ，ＰＢＳ洗涤，ＨＣｌ室温孵育
５ｍｉｎ，然后Ｔｒｉｓ－ｂａｓｅ浸润５ｍｉｎ，ＰＢＳ洗涤；１０％山
羊血清封闭１ｈ，滴加一抗（１∶２５０）４℃孵育过夜，
ＰＢＳ洗涤，滴加二抗（１∶１　０００），避光３７℃孵育３０
ｍｉｎ，ＰＢＳ洗涤；甘油封片，荧光显微镜（Ｏｌｙｍｐｕｓ，日
本）下观察８－ＯＨｄＧ在各组肾小球中的变化，采用
Ｉｍａｇｅ－Ｐｒｏ　Ｐｌｕｓ（ＩＰＰ）６．０图像处理分析软件，比较
各组荧光强度［１６］。
１．８　足细胞培养及分组　小鼠条件永生化足细胞
系 ＭＣＰ－５由南京军区南京总医院刘志红院士惠赠，
本实验室保存。将小鼠足细胞在ＲＰＭＩ　１６４０培养
液［１０％ 胎牛血清、１００Ｕ／ｍＬ青霉素及１００ｍｇ／Ｌ
链霉素、１０Ｕ／ｍＬ干扰素（ＩＦＮ）－γ］，３３℃、５％ＣＯ２
条件下增殖传代。在３７℃、５％ＣＯ２ 条件下用无
ＩＦＮ－γ的培养基培养１４ｄ，足细胞停止增殖，获得分
化表型［１７］。实验分为正常组、模型对照组、阳性对
照（他克莫司）组、ＳＰＥ（高、低剂量）组、ＳａｌＢ（高、低
剂量）组、ＲＡ（高、低剂量）组。实验前各组细胞用含
０．１％胎牛血清的ＲＰＭＩ　１６４０培养液饥饿过夜，除
正常组外各组加入ＰＡＮ（１００μｇ／ｍＬ）作用２４ｈ，模
型对照组给予０．１％ ＤＭＳＯ，阳性对照组给予他克
莫司１μｇ／ｍＬ，ＳＰＥ 高、低剂量组分别给予 ＳＰＥ
３１６、１５８μｇ／ｍＬ，ＳａｌＢ高、低剂量组分别给予ＳａｌＢ
１７、８．５μｇ／ｍＬ，ＲＡ高、低剂量组分别给予ＲＡ　５０、
２５μｇ／ｍＬ，分别取６、１２、２４、４８ｈ作为观察点，收集
细胞待测。
１．９　足细胞骨架染色　取细胞爬片标本，３７℃预热
ＰＢＳ洗涤３次，７５％冰乙醇固定１０ｍｉｎ，ＰＢＳ洗涤；
０．５％ Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００通透５ｍｉｎ，ＰＢＳ洗涤；室温避
光条件下鬼笔环肽孵育３０ｍｉｎ，ＰＢＳ洗涤，甘油封
片，荧光显微镜（Ｏｌｙｍｐｕｓ，日本）观察结果。
１．１０　足细胞ＲＯＳ荧光强度测量　上述各组足细
胞弃去培养液，３７℃预热ＰＢＳ洗涤，加入稀释后的
ＤＣＦＨ－ＤＡ工作液（１０μｍｏｌ／ｍＬ），３７℃避光孵育３０
ｍｉｎ，收集细胞，ＰＢＳ洗涤３次，流式细胞仪（ＢＤ
ＦＡＣＳ　ＣａｎｔｏⅡ）分析各组足细胞内ＲＯＳ荧光强度，
每例样品测定至少１０　０００个细胞［１８］。
１．１１　统计学处理　用ＳＰＳＳ　１６．０软件进行统计学
分析。计量资料均以珔ｘ±ｓ表示，两组间样本均数比
较采用ｔ检验，多组间比较采用单因素方差分析。
检验水准（α）为０．０５。
２　结　果
２．１　大鼠肾小球足细胞数目的改变　第５天时正常
组大鼠平均 ＷＴ１阳性细胞计数为（３７．２±１．５）个／肾
·４２３·
第３期．刘　翔，等．甘西鼠尾草总酚酸提取物抗嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞氧化应激损伤
小球切面，而模型对照组已减少为（２３．５±０．９）个／肾
小球切面，第１５天时模型组达最低值（１４．４±０．７）
个／肾小球切面，与正常组相比差异均具有统计学意
义（Ｐ＜０．０５）。ＳＰＥ组第１５、２１天时 ＷＴ１阳性细胞
数量高于模型对照组，其中第１５天时高剂量组与阳
性对照组保护足细胞效果较为接近［ＳＰＥ高剂量组
（２１．７±１．０）个／肾小球切面ｖｓ阳性对照组（２３．６±
１．２）个／肾小球切面，Ｐ＞０．０５］。见图１。
图１　各组大鼠不同时间点肾小球切面 ＷＴ１阳性细胞计数
Ｆｉｇ　１　Ｃｏｕｎｔ　ｏｆ　ＷＴ１－ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｅｌｓ　ｐｅｒ　ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ　ｓｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｉｎ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ　ａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｍｅ　ｐｏｉｎｔｓ
ＮＣ：Ｎｏｒｍａｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ；ＰＡＮ：Ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ　ａｍｉｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ（８０ｍｇ／ｋｇ）；Ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ＳＰＥ：ＳＰＥ（５ｍｇ／ｍＬ）；Ｍｅｄｉｕｍ　ｄｏｓｅ　ＳＰＥ：ＳＰＥ（１０ｍｇ／ｍＬ）；
Ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ＳＰＥ：ＳＰＥ（２０ｍｇ／ｍＬ）；Ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ：Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ（２ｍｇ／ｋｇ）．ＳＰＥ：Ｓａｌｖｉａ　ｐｒｚｅｗａｌｓｋｉｉ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄｓ．＊Ｐ＜
０．０５ｖｓ　ＮＣ；△Ｐ＜０．０５ｖｓ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ．ｎ＝３，珔ｘ±ｓ
２．２　大鼠肾组织８－ＯＨｄＧ荧光强度的变化　ＰＡＮ
注射后第５天时，模型对照组大鼠肾组织中８－
ＯＨｄＧ荧光强度已较正常组升高（Ｐ＜０．０５），第１０
天时大鼠肾组织中８－ＯＨｄＧ的荧光强度达到最高。
给予 ＳＰＥ 及他克莫司干预后，大鼠肾组织中８－
ＯＨｄＧ的荧光强度低于模型对照组；第１５天时阳性
对照组、ＳＰＥ高剂量组大鼠肾组织中８－ＯＨｄＧ的荧
光强度明显下降，与正常组相比差异无统计学意义
（Ｐ＞０．０５）；至第２１天各组８－ＯＨｄＧ表达水平均接
近正常范围（图２、３）。
图２　各组大鼠肾组织中各时间点８－ＯＨｄＧ免疫荧光染色结果
Ｆｉｇ　２　Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　８－ＯＨｄＧ　ｉｎ　ｒａｔ　ｒｅｎａｌ　ｔｉｓｓｕｅ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ　ａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｍｅ　ｐｏｉｎｔｓ
ＮＣ：Ｎｏｒｍａｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ；ＰＡＮ：Ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ　ａｍｉｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ（８０ｍｇ／ｋｇ）；Ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ＳＰＥ：ＳＰＥ（５ｍｇ／ｍＬ）；Ｍｅｄｉｕｍ　ｄｏｓｅ　ＳＰＥ：ＳＰＥ（１０ｍｇ／ｍＬ）；
Ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ＳＰＥ：ＳＰＥ（２０ｍｇ／ｍＬ）；Ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ：Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ（２ｍｇ／ｋｇ）．ＳＰＥ：Ｓａｌｖｉａ　ｐｒｚｅｗａｌｓｋｉｉ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄｓ．Ｏｒｉｇｉｎａｌ
ｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ：×４００
·５２３·
第二军医大学学报　２０１６年３月，第３７卷
图３　免疫荧光法检测各组大鼠肾组织中各时间点８－ＯＨｄＧ荧光强度的变化
Ｆｉｇ　３　Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｉｅｓ　ｏｆ　８－ＯＨｄＧ　ｉｎ　ｒａｔ　ｒｅｎａｌ　ｔｉｓｓｕｅ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ　ｂｙ　ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｅｎｃｅ　ａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｍｅ　ｐｏｉｎｔｓ
ＮＣ：Ｎｏｒｍａｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ；ＰＡＮ：Ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ　ａｍｉｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ（８０ｍｇ／ｋｇ）；Ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ＳＰＥ：ＳＰＥ（５ｍｇ／ｍＬ）；Ｍｅｄｉｕｍ　ｄｏｓｅ　ＳＰＥ：ＳＰＥ（１０ｍｇ／ｍＬ）；
Ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ＳＰＥ：ＳＰＥ（２０ｍｇ／ｍＬ）；Ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ：Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ（２ｍｇ／ｋｇ）．ＳＰＥ：Ｓａｌｖｉａ　ｐｒｚｅｗａｌｓｋｉｉ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄｓ．＊Ｐ＜
０．０５ｖｓ　ＮＣ；△Ｐ＜０．０５ｖｓ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ．ｎ＝３，珔ｘ±ｓ
２．３　小鼠足细胞骨架蛋白的变化　正常分化的足
细胞Ｆ－ａｃｔｉｎ为红色的长条细丝状，高度有序地贯穿
于细胞，密度大，丝强劲有力，沿细胞呈极性分布。
ＰＡＮ作用２４ｈ后，Ｆ－ａｃｔｉｎ几乎完全解聚，少数细胞
尚有残存的被切断的丝状结构；足细胞失去原有的
细胞张力，胞体回缩，细胞形态变圆。而给予ＳＰＥ、
ＳａｌＢ、ＲＡ及他克莫司干预后，ＰＡＮ诱导的足细胞损
伤明 显 减 弱，细 胞 内 重 新 出 现 极 性 分 布 的 微
丝（图４）。
图４　各组各时间点小鼠足细胞Ｆ－ａｃｔｉｎ骨架蛋白染色
Ｆｉｇ　４　Ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｏｆ　Ｆ－ａｃｔｉｎ　ｏｆ　ｍｏｕｓｅ　ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ　ａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｍｅ　ｐｏｉｎｔｓ
ＮＣ：Ｎｏｒｍａｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ；ＰＡＮ：Ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ　ａｍｉｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ（１００μｇ／ｍＬ）；Ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ＳＰＥ：ＳＰＥ（１５８μｇ／ｍＬ）；Ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ＳＰＥ：ＳＰＥ（３１６μｇ／
ｍＬ）；Ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ＲＡ：ＲＡ（２５μｇ／ｍＬ）；Ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ＲＡ：ＲＡ（５０μｇ／ｍＬ）；Ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ＳａｌＢ：ＳａｌＢ（８．５μｇ／ｍＬ）；Ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ＳａｌＢ：ＳａｌＢ（１７μｇ／
ｍＬ）；Ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ：Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ （１μｇ／ｍＬ）．ＳＰＥ：Ｓａｌｖｉａ　ｐｒｚｅｗａｌｓｋｉｉ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄｓ；ＲＡ：Ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ　ａｃｉｄ；ＳａｌＢ：
Ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄ　Ｂ．Ｏｒｉｇｉｎａｌ　ｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ：×１　０００
２．４　小鼠足细胞ＲＯＳ荧光强度的变化　相比于正
常组，ＰＡＮ作用足细胞２４ｈ后足细胞内ＲＯＳ荧光
强度增加（Ｐ＜０．０５）。各时间点模型对照组和阳性
对照组间差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），其中２４ｈ
ＳＰＥ、ＳａｌＢ及ＲＡ高、低剂量组组间差异有统计学意
义（Ｐ＜０．０５），说明ＳＰＥ及其单体可以有效降低足
·６２３·
第３期．刘　翔，等．甘西鼠尾草总酚酸提取物抗嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞氧化应激损伤
细胞内ＲＯＳ荧光强度，且降低程度与药物剂量相
关。而阳性对照组与ＳＰＥ低剂量组、ＳａｌＢ和ＲＡ高
剂量组间差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），提示ＳＰＥ
低剂量组、ＳａｌＢ和ＲＡ高剂量组与阳性对照组降低
足细胞内ＲＯＳ荧光强度效果较接近。ＳａｌＢ高、低剂
量组分别与ＲＡ高、低剂量组足细胞间ＲＯＳ荧光强度
比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），说明ＳａｌＢ组降低
足细胞内ＲＯＳ荧光强度效果优于ＲＡ组（图５）。
图５　各组小鼠足细胞各时间点ＲＯＳ荧光强度
Ｆｉｇ　５　Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ＲＯＳ　ｏｆ　ｍｏｕｓｅ　ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ　ａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｍｅ　ｐｏｉｎｔｓ
ＮＣ：Ｎｏｒｍａｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ；ＰＡＮ：Ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ　ａｍｉｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ（１００μｇ／ｍＬ）；Ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ＳＰＥ：ＳＰＥ（１５８μｇ／ｍＬ）；Ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ＳＰＥ：ＳＰＥ（３１６μｇ／
ｍＬ）；Ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ＲＡ：ＲＡ（２５μｇ／ｍＬ）；Ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ＲＡ：ＲＡ（５０μｇ／ｍＬ）；Ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ＳａｌＢ：ＳａｌＢ（８．５μｇ／ｍＬ）；Ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ＳａｌＢ：ＳａｌＢ（１７μｇ／
ｍＬ）；Ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ：Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ （１μｇ／ｍＬ）．ＳＰＥ：Ｓａｌｖｉａ　ｐｒｚｅｗａｌｓｋｉｉ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄｓ；ＲＡ：Ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ　ａｃｉｄ；ＳａｌＢ：
Ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄ　Ｂ．＊Ｐ＜０．０５ｖｓ　ＮＣ；△Ｐ＜０．０５ｖｓ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ；▲Ｐ＜０．０５ｖｓ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｇｒｏｕｐ　ｏｆ　ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ；Ｐ＜０．０５ｖｓ　ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ＲＡ；
Ｐ＜０．０５ｖｓ　ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ＲＡ．ｎ＝３，珔ｘ±ｓ
３　讨　论
足细胞是高度分化的细胞，可以防止尿蛋白渗
漏，维持肾小球内毛细血管襻完整性［１９］，在肾小球
滤过屏障中起着至关重要的作用［２０］。既往研究证
实，ＰＡＮ诱导足细胞超微结构发生改变，肾小球基
底膜脱落、细胞骨架解聚［２１］、肾小球基底膜大小及
电荷损伤［２２］。
我们前期体内研究同样发现ＰＡＮ诱导足细胞
损伤后，电镜下观察到足细胞足突在第１０天时融合
消失。此外，我们通过免疫组化、蛋白质免疫印迹和
ＲＴ－ＰＣＲ分别从蛋白和 ｍＲＮＡ水平研究发现ＰＡＮ
肾病 大 鼠 模 型 足 细 胞 裂 孔 膜 蛋 白 ｎｅｐｈｒｉｎ 和
ｐｏｄｏｃｉｎ的表达下调［６］。
肾小球足细胞数常常通过计数足细胞核来完
成，ＷＴ１是一种锌指样转录因子，定位于成熟足细
胞核，是足细胞特异性标志之一［２３－２８］。本研究发现，
ＰＡＮ注射后大鼠 ＷＴ１阳性足细胞数目减少，低于
正常组。给予ＳＰＥ和他克莫司治疗后，治疗组各时
间点足细胞数量高于模型对照组，其中，ＳＰＥ高剂量
组与阳性对照组保护足细胞效果较为接近。此外，
体外研究发现ＰＡＮ几乎能完全破坏足细胞的骨架
结构，使Ｆ－ａｃｔｉｎ的骨架丝状结构消失，进一步证实
ＰＡＮ对足细胞具有损伤作用。在给予ＳＰＥ、ＳａｌＢ、
ＲＡ和他克莫司后，ＰＡＮ诱导的足细胞损伤减弱，细
胞内重新出现极性分布的微丝，在体内和体外进一
步证明ＳＰＥ具有保护足细胞作用。
ＰＡＮ造成足细胞损伤的机制可能是由于足细
胞受到损伤，产生过多的ＲＯＳ所致［２９］。ＲＯＳ可参
与多种信号转导通路，介导细胞分化、凋亡及增
殖［３０］。Ｋａｗａｇｕｃｈｉ等［３１］研究发现ＰＡＮ刺激足细胞
后，细胞扁平变圆，部分脱离培养皿，投射电镜观察
到细胞胞质空泡及破裂的气球样空间，添加抗氧化
酶后细胞扁平及变圆程度减轻，表明抗氧化剂对足
细胞具有保护作用。
文献报道，甘西鼠尾草能够降低脂质过氧化物
丙二醛的含量，抑制羟自由基的产生，抑制脂质过氧
化反应；ＳＰＥ及其单体具有抑制超氧自由基及抗氧
化、抑制心肌缺血再灌注损伤等作用［３２］，因而，我们
推测ＳＰＥ对足细胞的保护作用也可能通过上述的
抗氧化应激通路实现。他克莫司是公认的保护足细
胞药物，Ｙｏｕｓｕｆ等［３３］在大鼠缺氧损伤模型中证实他
克莫司具有抗氧化应激损伤作用。因而，本研究采
用他克莫司作为阳性对照观察ＳＰＥ及其单体对足
·７２３·
第二军医大学学报　２０１６年３月，第３７卷
细胞氧化损伤的保护作用。
８－ＯＨｄＧ是活性氧类物质如羟自由基、单线态氧
等攻击ＤＮＡ分子中的鸟嘌呤碱基第８位碳原子所致
的核苷酸损伤物［３４］。在各种碱基修饰产物中，８－
ＯＨｄＧ被公认为ＤＮＡ氧化损伤的重要标志物［１６］，其
只通过ＤＮＡ氧化损伤途径形成，非细胞更新产物，不
会在系统循环中由鸟嘌呤氧化而成，为代谢终物，在
体内稳定存在［３５］；其在组织细胞核ＤＮＡ中的含量可
以反映体内特定部位ＤＮＡ氧化损伤和机体的正常修
复作用。通过测定大鼠肾脏组织中８－ＯＨｄＧ的荧光
强度，本研究发现模型对照组大鼠足细胞中８－ＯＨｄＧ
荧光强度增强，证实ＰＡＮ诱导足细胞损伤后对ＤＮＡ
造成损伤，产生过多的８－ＯＨｄＧ。ＳＰＥ干预后可以有
效降低大鼠肾组织中８－ＯＨｄＧ的荧光强度，且ＳＰＥ高
剂量组相比中、低剂量组效果较为明显，与阳性对照
组效果相似。此外，体外研究发现ＰＡＮ作用足细胞
２４ｈ后，足细胞内ＲＯＳ荧光强度较正常组增加，给予
ＳＰＥ干预后，发现各时间点模型对照组和药物治疗组
间差异有统计学意义；此外，ＳａｌＢ高、低剂量分别组与
ＲＡ高、低剂量组比较差异也有统计学意义，提示ＳａｌＢ
组效果优于ＲＡ组。结果表明ＳＰＥ及其单体可以有
效抑制ＰＡＮ所致足细胞氧化应激损伤，从而对足细
胞具有保护作用。
本研究从体内及体外证实，ＳＰＥ对ＰＡＮ所致的
足细胞氧化损伤具有保护作用。然而，ＳＰＥ对足细胞
保护作用的具体机制仍需进一步研究和探讨。本课
题组拟下一步研究ＳＰＥ及其单体是否对ＰＡＮ诱导的
小鼠足细胞内线粒体、凋亡机制以及Ｔｏｌ 样受体通路
产生保护作用，以期进一步明确ＳＰＥ保护足细胞的作
用机制，从而为临床治疗足细胞病提供一条新的治疗
途径。
［参 考 文 献］
［１］　姜爱莉，孙丽芹，王　文，翁新楚．四种植物天然抗氧化
剂活性初探［Ｊ］．食品科学，２００２，２３：３５－３８．
［２］　Ｋａｓｉｍｕ　Ｒ，Ｔａｎａｋａ　Ｋ，Ｔｅｚｕｋａ　Ｙ，Ｇｏｎｇ　Ｚ　Ｎ，Ｌｉ　Ｊ　Ｘ，
Ｂａｓｎｅｔ　Ｐ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｓｅｖｅｎｔｅｅｎ　Ｓａｌｖｉａ
ｐｌａｎｔｓ：ａｌｄｏｓｅ　ｒｅｄｕｃｔａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｗａｔｅｒ　ａｎｄ
ＭｅＯＨ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ａｎｄ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｍａｓｓ
ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＬＣ－ＭＳ）ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔｓ［Ｊ］．
Ｃｈｅｍ　Ｐｈａｒｍ　Ｂｕｌ （Ｔｏｋｙｏ），１９９８，４６：５００－５０４．
［３］　李　霞，杨　阳，黄豆豆，黄光辉，孙连娜．甘西鼠尾草
药材和提取物中迷迭香酸、丹酚酸 Ｂ的含量测定［Ｊ］．
中国医院药学杂志，２０１４，３４：１６３４．
［４］　孙连娜，陈万生，杨　阳，张　凤，来　威，曹永兵，等．
甘西鼠尾草提取物在制备治疗肾小球肾炎药物中的应
用：中国，２００７１００４８１３９．３［Ｐ］．２００８－０５－２１．
［５］　杨　阳，朱　斌，吴志军，陈万生，孙连娜．甘西鼠尾草
提取物对正常大鼠全血粘度影响及对水负荷大鼠利尿
作用［Ｊ］．中国医院药学杂志，２０１２，３２：７５１－７５４．
［６］　Ｄａｉ　Ｄ　Ｓ，Ｌｉｕ　Ｘ，Ｙａｎｇ　Ｙ，Ｌｕｏ　Ｘ　Ｍ，Ｔａｎｇ　Ｒ　Ｘ，Ｙｉｎ　Ｚ
Ｃ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｓａｌｖｉａ　ｐｒｚｅｗａｌｓｋｉｉ
ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｎ　ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｐｏｄｏｃｙｔｅ　ｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．Ａｍ
Ｊ　Ｎｅｐｈｒｏｌ，２０１５，４２：２１６－２２７．
［７］　Ｇｗｉｎｎｅｒ　Ｗ，Ｌａｎｄｍｅｓｓｅｒ　Ｕ，Ｂｒａｎｄｅｓ　Ｒ　Ｐ，Ｋｕｂａｔ　Ｂ，
Ｐｌａｓｇｅｒ　Ｊ，Ｅｂｅｒｈａｒｄ　Ｏ，ｅｔ　ａｌ．Ｒｅａｃｔｉｖｅ　ｏｘｙｇｅｎ　ｓｐｅｃｉｅｓ
ａｎｄ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｄｅｆｅｎｓｅ　ｉｎ　ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ　ａｍｉｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ
ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｐａｔｈｙ［Ｊ］．Ｊ　Ａｍ　Ｓｏｃ　Ｎｅｐｈｒｏｌ，１９９７，８：
１７２２－１７３１．
［８］　Ｂｅａｍａｎ　Ｍ，Ｂｉｒｔｗｉｓｔｌｅ　Ｒ，Ｈｏｗｉｅ　Ａ　Ｊ，Ｍｉｃｈａｅｌ　Ｊ，Ａｄｕ
Ｄ．Ｔｈｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ａｎｉｏｎ　ａｎｄ　ｈｙｄｒｏｇｅｎ　ｐｅｒｏｘｉｄｅ
ｉｎ　 ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ　 ｉｎｊｕｒｙ　 ｉｎｄｕｃｅｄ　 ｂｙ　 ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ
ａｍｉｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ　ｉｎ　ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｓｃｉ（Ｌｏｎｄ），１９８７，
７３：３２９－３３２．
［９］　Ｓｈｉｂｏｕｔａ　Ｙ， Ｔｅｒａｓｈｉｔａ　Ｚ，Ｉｍｕｒａ　Ｙ，Ｓｈｉｎｏ　Ａ，
Ｋａｗａｍｕｒａ　Ｍ，Ｏｈｔｓｕｋｉ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ　ｏｆ
ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ　Ａ２，ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅｓ　ａｎｄ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌｓ　ｉｎ
ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ　ｎｅｐｈｒｏｓｉｓ　ｉｎ　ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｋｉｄｎｅｙ　Ｉｎｔ，１９９１，３９：
９２０－９２９．
［１０］Ｒｉｃａｒｄｏ　Ｓ　Ｄ，Ｂｅｒｔｒａｍ　Ｊ　Ｆ，Ｒｙａｎ　Ｇ　Ｂ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ
ｐｒｏｔｅｃｔ　ｐｏｄｏｃｙｔｅ　ｆｏｏｔ　ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ　 ｉｎ　ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ
ａｍｉｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ－ｔｒｅａｔｅｄ　ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｊ　Ａｍ　Ｓｏｃ　Ｎｅｐｈｒｏｌ，
１９９４，４：１９７４－１９８６．
［１１］Ｎａｋａｍｕｒａ　Ｋ，Ｋｏｊｉｍａ　Ｋ，Ａｒａｉ　Ｔ，Ｓｈｉｒａｉ　Ｍ，Ｕｓｕｔａｎｉ　Ｓ，
Ａｋｉｍｏｔｏ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ．Ｄｉｐｙｒｉｄａｍｏｌｅ　ａｎｄ　ｄｉｌａｚｅｐ　ｓｕｐｐｒｅｓｓ
ｏｘｙｇｅｎ　ｒａｄｉｃａｌｓ　ｉｎ　ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ　ａｍｉｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ　ｎｅｐｈｒｏｓｉｓ
ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｉｎｖｅｓｔ，１９９８，２８：８７７－８８３．
［１２］Ｃｏｏｋｅ　Ｍ　Ｓ，Ｅｖａｎｓ　Ｍ　Ｄ，Ｄｉｚｄａｒｏｇｌｕ　Ｍ，Ｌｕｎｅｃ　Ｊ．
Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ＤＮＡ　ｄａｍａｇｅ：ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ｍｕｔａｔｉｏｎ，ａｎｄ
ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．ＦＡＳＥＢ　Ｊ，２００３，７：１１９５－１２１４．
［１３］Ｅｃｅ　Ｈ，Ｃｉｇｄｅｍ　Ｅ，Ｙｕｋｓｅｌ　Ｋ，Ａｈｍｅｔ　Ｄ，Ｈａｋａｎ　Ｅ，
Ｏｋｔａｙ　Ｔ　Ｍ．Ｕｓｅ　ｏｆ　ｏｒａｌ　ａｎｔｉｄｉａｂｅｔｉｃ　ｄｒｕｇｓ（ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ
ａｎｄ　ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）ｉｎ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｂｒｅａｓｔ
ｃａｎｃｅｒ：ｈｏｗ　ｄｏｅｓ　ｉｔ　ｅｆｆｅｃｔ　ｓｅｒｕｍ　Ｈｉｆ－１αａｎｄ　８ＯＨｄＧ
ｌｅｖｅｌｓ［Ｊ］．Ａｓｉａｎ　Ｐａｃ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｐｒｅｖ，２０１２，１３：５１４３－
５１４８．
［１４］Ｙａｎｇ　Ｙ，Ｂｉｎｇ　Ｚ，Ｓｕｎ　Ｌ，Ｗｕ　Ｚ，Ｃｈｅｎ　Ｗ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ
ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｓａｌｖｉａ　ｐｒｚｅｗａｌｓｋｉｉ　Ｍａｘｉｍ．［Ｊ］．Ａｓｉａｎ　Ｊ
·８２３·
第３期．刘　翔，等．甘西鼠尾草总酚酸提取物抗嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞氧化应激损伤
Ｃｈｅｍ，２０１３，２５：１７４７－１７４８．
［１５］Ｋｉｍ　Ｙ　Ｈ，Ｇｏｙａｌ　Ｍ，Ｋｕｒｎｉｔ　Ｄ，Ｗｈａｒｒａｍ　Ｂ，Ｗｉｇｇｉｎｓ
Ｊ， Ｈｏｌｚｍａｎ　Ｌ， ｅｔ　ａｌ．Ｐｏｄｏｃｙｔｅ　ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ　ａｎｄ
ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ　ｈａｖｅ　ａ　ｄｉｒｅｃｔ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｉｎ　ｔｈｅ
ＰＡＮ－ｔｒｅａｔｅｄ　ｒａｔ［Ｊ］．Ｋｉｄｎｅｙ　Ｉｎｔ，２００１，６０：９５７－９６８．
［１６］Ｇｕｏ　Ｋ，Ｌｕ　Ｊ，Ｈｕａｎｇ　Ｙ，Ｗｕ　Ｍ，Ｚｈａｎｇ　Ｌ，Ｙｕ　Ｈ，ｅｔ
ａｌ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ＰＧＣ－１αｉｎ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ　ｉｓ
ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ＲＯＳ　ｔｈｒｏｕｇｈ
ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ　ｄｙｎａｍｉｃ　ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ［Ｊ］．ＰＬｏＳ　Ｏｎｅ，
２０１５，１０：ｅ０１２５１７６．
［１７］Ｍｕｎｄｅｌ　Ｐ，Ｒｅｉｓｅｒ　Ｊ，Ｚúｉｇａ　Ｍｅｊíａ　Ｂｏｒｊａ　Ａ，Ｐａｖｅｎｓｔｄｔ
Ｈ，Ｄａｖｉｄｓｏｎ　Ｇ　Ｒ，Ｋｒｉｚ　Ｗ，ｅｔ　ａｌ．Ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔｓ　ｏｆ
ｔｈｅ　ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ　ａｎｄ　ｃｅｌ　ｃｏｎｔａｃｔｓ　ｉｎｄｕｃｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ
ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｄｕｒｉｎｇ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌｙ
ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚｅｄ　ｍｏｕｓｅ　ｐｏｄｏｃｙｔｅ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅｓ［Ｊ］．Ｅｘｐ　Ｃｅｌ
Ｒｅｓ，１９９７，２３６：２４８－２５８．
［１８］Ｌｉｕ　Ｚ，Ｚｈａｏ　Ｗ，Ｚｈａｎｇ　Ｑ，Ｌａｉ　Ｌ，Ｊｉａｎｇ　Ｓ，Ｚｈａｎｇ　Ｊ，ｅｔ
ａｌ．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｄａｍａｇｅ　ａｎｄ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ＤＮＡ　ｒｅｐａｉｒ
ｅｎｚｙｍｅ　ＸＰＤ　ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ　ｉｎ　ｈｉｇｈ　ｇｌｕｃｏｓｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ
ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｌｅｖｏｂｕｐｉｖａｃａｉｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙ
［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ　Ｒｅｓ，２０１５，４０：１９１９－１９２８．
［１９］Ｋｒｉｚ　Ｗ，Ｈａｃｋｅｎｔｈａｌ　Ｅ，Ｎｏｂｉｌｉｎｇ　Ｒ，Ｓａｋａｉ　Ｔ，Ｅｌｇｅｒ
Ｍ，Ｈｈｎｅｌ　Ｂ．Ａ　ｒｏｌｅ　ｆｏｒ　ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ　ｔｏ　ｃｏｕｎｔｅｒａｃｔ
ｃａｐｉｌａｒｙ　ｗａｌ　ｄｉｓｔｅｎｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｋｉｄｎｅｙ　Ｉｎｔ，１９９４，４５：
３６９－３７６．
［２０］Ｐａｖｅｎｓｔｄｔ　Ｈ．Ｒｏｌｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｏｄｏｃｙｔｅ　ｉｎ　ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ
ｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｐｈｙｓｉｏｌ　Ｒｅｎａｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌ，２０００，２７８：
Ｆ１７３－Ｆ１７９．
［２１］Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅ　Ｃ　Ｉ，Ｃａｍｅｒｏｎ　Ｒ， Ｍｕｎｋ　Ｓ，Ｌｅｖｙ　Ｊ．
Ｐｏｄｏｃｙｔｉｃ　ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ　ｄｉｓａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｂａｓｅｍｅｎｔ－
ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｄｅｔａｃｈｍｅｎｔ　ｉｎ　ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ　ａｍｉｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ
ｎｅｐｈｒｏｓｉｓ［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｐａｔｈｏｌ，１９９３，１４２：１６４１－１６５３．
［２２］Ｇａｒｉｎ　Ｅ　Ｈ，Ｓｈｉｒｅｙ　Ａ　Ｊ． Ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ　ｂａｓｅｍｅｎｔ
ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｈｅｐａｒａｎ　ｓｕｌｆａｔｅ　ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ　ｉｎ
ａｍｉｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ　ｏｆ　ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ　ｎｅｐｈｒｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｈｉｌｄ
Ｎｅｐｈｒｏｌ　Ｕｒｏｌ，１９８８，９：１２１－１２６．
［２３］Ｍｏｒｒｉｓｏｎ　Ａ　Ａ，Ｖｉｎｅｙ　Ｒ　Ｌ，Ｓａｌｅｅｍ　Ｍ　Ａ，Ｌａｄｏｍｅｒｙ　Ｍ
Ｒ．Ｎｅｗ　ｉｎｓｉｇｈｔｓ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｗｉｌｍｓ　ｔｕｍｏｒ
ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　ｇｅｎｅ　ＷＴ１ｉｎ　ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｐｈｙｓｉｏｌ
Ｒｅｎａｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００８，２９５：Ｆ１２－Ｆ１７．
［２４］Ｗａｇｎｅｒ　Ｋ　Ｄ，Ｗａｇｎｅｒ　Ｎ，Ｓｃｈｅｄｌ　Ａ．Ｔｈｅ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｌｉｆｅ
ｏｆ　ＷＴ１［Ｊ］．Ｊ　Ｃｅｌ　Ｓｃｉ，２００３，１１６（Ｐｔ　９）：１６５３－１６５８．
［２５］Ｐａｌｍｅｒ　Ｒ　Ｅ，Ｋｏｔｓｉａｎｔｉ　Ａ，Ｃａｄｍａｎ　Ｂ，Ｂｏｙｄ　Ｔ，Ｇｅｒａｌｄ
Ｗ，Ｈａｂｅｒ　Ｄ　Ａ．ＷＴ１ｒｅｇｕｌａｔｅｓ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｍａｊｏｒ　 ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ　 ｐｏｄｏｃｙｔｅ　 ｍｅｍｂｒａｎｅ　 ｐｒｏｔｅｉｎ
ｐｏｄｏｃａｌｙｘｉｎ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ　Ｂｉｏｌ，２００１，１１：１８０５－１８０９．
［２６］Ｇｕｏ　Ｊ　Ｋ，Ｍｅｎｋｅ　Ａ　Ｌ，Ｇｕｂｌｅｒ　Ｍ　Ｃ，Ｃｌａｒｋｅ　Ａ　Ｒ，
Ｈａｒｒｉｓｏｎ　Ｄ，Ｈａｍｍｅｓ　Ａ，ｅｔ　ａｌ．ＷＴ１ｉｓ　ａ　ｋｅｙ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒ
ｏｆ　ｐｏｄｏｃｙｔｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ：ｒｅｄｕｃｅｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｃａｕｓｅ
ｃｒｅｓｃｅｎｔｉｃ　ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ　ａｎｄ　ｍｅｓａｎｇｉａｌ　ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ
［Ｊ］．Ｈｕｍ　Ｍｏｌ　Ｇｅｎｅｔ，２００２，１１：６５１－６５９．
［２７］Ｇｕｏ　Ｇ，Ｍｏｒｒｉｓｏｎ　Ｄ　Ｊ，Ｌｉｃｈｔ　Ｊ　Ｄ，Ｑｕａｇｇｉｎ　Ｓ　Ｅ．ＷＴ１
ａｃｔｉｖａｔｅｓ　ａ　ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｅｎｈａｎｃｅｒ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｆｒｏｍ
ｔｈｅ　ｈｕｍａｎ　ｎｅｐｈｒｉｎ　ｇｅｎｅ［Ｊ］．Ｊ　Ａｍ　Ｓｏｃ　Ｎｅｐｈｒｏｌ，２００４，
１５：２８５１－２８５６．
［２８］Ｗａｇｎｅｒ　Ｎ，Ｗａｇｎｅｒ　Ｋ　Ｄ，Ｘｉｎｇ　Ｙ，Ｓｃｈｏｌｚ　Ｈ，Ｓｃｈｅｄｌ
Ａ． Ｔｈｅ　 ｍａｊｏｒ　 ｐｏｄｏｃｙｔｅ　 ｐｒｏｔｅｉｎ　 ｎｅｐｈｒｉｎ　 ｉｓ
ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｙ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　Ｗｉｌｍｓ’ｔｕｍｏｒ
ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　ＷＴ１［Ｊ］．Ｊ　Ａｍ　Ｓｏｃ　Ｎｅｐｈｒｏｌ，２００４，１５：
３０４４－３０５１．
［２９］Ｍａｒｓｈａｌ　Ｃ　Ｂ，Ｐｉｐｐｉｎ　Ｊ　Ｗ，Ｋｒｏｆｆｔ　Ｒ　Ｄ，Ｓｈａｎｋｌａｎｄ　Ｓ　Ｊ．
Ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ　ａｍｉｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ｏｘｉｄａｎｔ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ
ＤＮＡ　ｄａｍａｇｅ　ｉｎ　ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｖｏ［Ｊ］．
Ｋｉｄｎｅｙ　Ｉｎｔ，２００６，７０：１９６２－１９７３．
［３０］Ｒｏｊａｓ　Ｆ， Ｇｏｎｚａｌｅｚ　Ｄ， Ｃｏｒｔｅｓ　Ｎ， Ａｍｐｕｅｒｏ　Ｅ，
Ｈｅｒｎáｎｄｅｚ　Ｄ　Ｅ，Ｆｒｉｔｚ　Ｅ，ｅｔ　ａｌ．Ｒｅａｃｔｉｖｅ　ｏｘｙｇｅｎ
ｓｐｅｃｉｅｓ　ｔｒｉｇｇｅｒ　 ｍｏｔｏｎｅｕｒｏｎ　ｄｅａｔｈ　 ｉｎ　 ｎｏｎ－ｃｅｌ－
ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ＡＬＳ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃ－Ａｂｌ
ｓｉｇｎａｌｉｎｇ［Ｊ］．Ｆｒｏｎｔ　Ｃｅｌ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２０１５，９：２０３．
［３１］Ｋａｗａｇｕｃｈｉ　Ｍ，Ｙａｍａｄａ　Ｍ，Ｗａｄａ　Ｈ，Ｏｋｉｇａｋｉ　Ｔ．
Ｒｏｌｅｓ　ｏｆ　ａｃｔｉｖｅ　ｏｘｙｇｅｎ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｉｎ　ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ　ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ
ｃｅｌ　 ｉｎｊｕｒｙ　 ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　 ｃａｕｓｅｄ　 ｂｙ　 ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ
ａｍｉｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，１９９２，７２：３２９－３４０．
［３２］杨　阳，张　凤，蔡　飞，孙连娜，陈万生．甘西鼠尾草
化学成分及药理作用研究进展［Ｊ］．中药材，２００８，３１：
７８７－７９０．
［３３］Ｙｏｕｓｕｆ　Ｓ，Ａｔｉｆ　Ｆ，Ｋｅｓｈｅｒｗａｎｉ　Ｖ，Ａｇｒａｗａｌ　Ｓ　Ｋ．
Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ （ＦＫ－５０６）ａｎｄ
ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ（ＣｓＡ）ｉｎ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．Ｂｒａｉｎ　Ｂｅｈａｖ，
２０１１，１：８７－９４．
［３４］Ｃｏｏｋｅ　Ｍ　Ｓ，Ｅｖａｎｓ　Ｍ　Ｄ，Ｄｏｖｅ　Ｒ，Ｒｏｚａｌｓｋｉ　Ｒ，
Ｇａｃｋｏｗｓｋｉ　Ｄ，Ｓｉｏｍｅｋ　Ａ，ｅｔ　ａｌ．ＤＮＡ　ｒｅｐａｉｒ　ｉｓ
ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｃｅ　ｏｆ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅｌｙ　ｄａｍａｇｅｄ
ＤＮＡ　ｌｅｓｉｏｎｓ　ｉｎ　ｕｒｉｎｅ［Ｊ］．Ｍｕｔａｔ　Ｒｅｓ，２００５，５７４：５８－
６６．
［３５］Ｗｕ　Ｌ　Ｌ，Ｃｈｉｏｕ　Ｃ　Ｃ，Ｃｈａｎｇ　Ｐ　Ｙ，Ｗｕ　Ｊ　Ｔ．Ｕｒｉｎａｒｙ　８－
ＯＨｄＧ：ａ　ｍａｒｋｅｒ　ｏｆ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｔｏ　ＤＮＡ　ａｎｄ　ａ　ｒｉｓｋ
ｆａｃｔｏｒ　ｆｏｒ　ｃａｎｃｅｒ，ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｄｉａｂｅｔｉｃｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ
Ｃｈｉｍ　Ａｃｔａ，２００４，３３９：１－９．
［本文编辑］　吴　兰，尹　茶
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