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重金属镉对野生披碱草生长与生理特性的影响



全 文 :* 通讯作者,E-mail:yuanqinghua@hotmail.com
收稿日期:2012-11-30;修回日期:2013-03-05
基金项目:国家“十二五”科技支撑项目(2011BAD17B01);国家
牧草产业体系(岗位专家)项目资助
作者简介:杨丽(1988- ),女,甘肃靖远人,兰州大学在读硕士研
究生,研究方向为牧草遗传资源,E-mail:yangliyg@126.com.
文章编号:1673-5021(2013)04-0025-09
重金属镉对野生披碱草生长与生理特性的影响
杨 丽1,2,袁庆华2,*
(1.兰州大学草地农业科技学院,甘肃 兰州 730000;2.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京 100193)
摘要:采用温室盆栽试验法,对采自国内不同地区的20份野生披碱草(Elymus dahuricus Turcz)种质材料的耐
镉性进行了研究,通过对苗期株高、地上生物量、存活率等指标的测定与分析,并采用隶属函数综合评价法筛选出耐
镉性最强、中等和最弱的3份材料对其进行了SOD(超氧化物酶)、POD(过氧化物酶)、PPO(多酚氧化酶)等指标的
测定,研究镉胁迫下披碱草保护酶活性的响应。结果表明:随着镉浓度的升高,20份野生披碱草种质材料苗期的相
对株高、相对地上生物量、存活率、相对分蘖数和叶组织含水量均呈显著下降趋势,经综合评价筛选出耐镉性最强的
12号、15号和11号等材料,耐镉性最差的7号和16号等材料及耐镉性中等的3号、5号和9号等材料。随着胁迫浓
度的增加,耐镉性强和中等的材料叶片中SOD、POD和PPO活性不断升高,而耐性差的材料叶片中SOD和POD的
活性则呈现下降趋势。镉胁迫对叶片中 MDA和Pro的含量也有显著的影响,不同材料间变化差异明显。
关键词:披碱草;耐镉性;酶活性;综合评价
中图分类号:Q945.78   文献标识码:A
  镉是广泛存在于自然界中的一种重金属微量
元素,长期在人体中积累对人体健康不利。近年
来,关于镉对牧草和草坪的影响已有较多研究和
报道[1~3]。披碱草(Elymus dahuricus Turcz)是禾
本科披碱草属(Elymus spp)最重要的牧草之一,其
分布范围极广,根系发达,分蘖性强,并且具有很
强的抗寒和耐旱能力。该牧草不仅是麦类作物遗
传改良的重要优异基因资源,也是我国北方地区
非常重要的优良牧草。目前,有关重金属镉胁迫
对野生披碱草种质材料的影响还未见报道。本文
采用温室盆栽试验方法,对镉胁迫下披碱草的形
态及生理指标变化进行研究,旨在筛选出耐镉性
强的材料,并探讨披碱草镉污染胁迫的诊断指标,
以期为土壤镉污染的治理及生态环境保护提供科
学依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料及来源
供试20份披碱草材料均由中国农业科学院北
京畜牧兽医研究所牧草资源室提供,试验材料及来
源见表1。
1.2 试验方法
1.2.1 幼苗的培育
试验在中国农业科学院北京畜牧兽医研究所廊
坊牧草试验基地温室进行。播种基质为壤土、草炭
土和营养土的混合物,按1∶1∶1的比例配置而成,
装入无孔的塑料花盆中(高20cm,底径15cm,口径
表1 试验材料编号及来源
Table 1 Germplasm materials and their sources
材料号
Material
number
编号
Accession code
采集时间
Colecting time
采集地点
Colecting site
1 中畜-1011  2007 内蒙古啊荣旗
2 中畜-681  2004 山西立石村
3 中畜-693  2004 山西省左云县
4 中畜-988  2008 北京延庆海陀山
5 中畜-705  2006 山西沁源县城关
6 中畜-689  2004 山西陈家窑
7 中畜-1009  2007 青海湖海北种羊场
8 中畜-703  2006 山西沁源县草场
9 中畜-1008  2007 北京延庆县郊区
10 中畜-1007  2007 内蒙古太卜寺旗
11 中畜-704  2006 山西灵空山
12 中畜-1013  2007 兰州市东堡
13 中畜-501  2004 河北雾灵山
14 中畜-688  2005 山西五路山
15 中畜-434  2003 山西五台山
16 中畜-2859  2005 四川
17 中畜-342  2003 新疆伊犁
18 中畜-613  2006 甘肃古浪县
19 中畜-120  2001 山西沁源
20 中畜-346  2003 北京百望山
—52—
第35卷 第4期
Vol.35 No.4
         
中 国 草 地 学 报
Chinese Journal of Grassland
         
2013年7月
Jul.2013
20cm),每盆装混合土壤1.5kg。将种子于发芽皿里
发芽2d后,点播至花盆土壤中,每盆25~30株,出
苗20d后间苗,每盆留苗20株。
1.2.2 材料的镉胁迫处理
出苗25d后进行镉胁迫处理,以分析纯CdCl2
·2.5H2O为镉源,共设置6个镉胁迫浓度,分别为
0、10mg/kg、20mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、
200mg/kg(风干土重),以0为对照。将不同处理的
镉溶液施入盆中,每处理3次重复。胁迫25d后,对
各材料的株高、地上生物量、存活率、分蘖数进行测
定。根据以上测定指标,筛选出对镉的耐性最好、中
等及最差的3份材料,分别进行SOD(超氧化物歧
化酶)、POD(过氧化物酶)、PPO(多酚氧化酶)等生
理指标的测定。镉胁迫期间进行正常管理,根据土
壤水分蒸发情况进行浇水,以保持土壤含水量为最
大持水量的70%。
1.3 形态指标的测定
1.3.1 株高
用直尺测量各盆中植株的垂直高度,每处理测
定3盆,精确到0.01cm。
1.3.2 地上生物量
用剪刀齐土壤表面剪取植株地上部分,称取鲜
重,然后放入烘箱中烘干(先在105℃杀青30min,
之后70℃烘12h),称取干重(精确到0.001g)。
1.3.3 存活率
记载镉胁迫后每盆中存活的植株数,以百分数
表示,计算公式如下:
存活率(%)=镉处理后存活苗数/原幼苗总数
×100%
1.3.4 分蘖数
测定每盆中各植株的分蘖数,每处理测定3盆。
1.4 生理指标的测定
1.4.1 酶液提取
分别从各盆中称取0.5g披碱草叶片,放入研钵
中,用液氮研磨法研磨成匀浆,取4ml1/15mol磷酸
缓冲液(pH=7.8)倒入研钵内,8000r/min离心
15min,倾出上清液,放入10ml试管内,剩余物加少
量缓冲液冲洗后,再次离心(8000r/min,10min),取
上清液,如此重复3次,直到酶粗提取液补足10ml。
将酶液放入4℃冰箱中保存备用。
以上方法用于SOD、PPO、MDA酶液的提取,
POD、Pro酶液的提取使用0.1mol/L磷酸缓冲液
(pH=7.2),其余方法同上。
1.4.2 SOD活性的测定
SOD活性测定参照Giannopolitis等[4]的方法。
反应液中含有:0.013mol/L甲硫氨酸、6.3×10-6
mol/L氮蓝四唑、1.3×10-6 mol/L核黄素、1×10-4
mol/L乙二胺四乙酸(EDTA)及pH=7.8的0.05
mol/L磷酸缓冲液,4ml的反应体系中包括3ml反
应液、0.85ml pH=7.8的0.05mol/L磷酸缓冲液
及酶粗提液0.15ml,对照以pH=7.8的0.05mol/L
磷酸缓冲液代替酶粗提液。在30℃下用4000Lx
光照射20min,并在560nm波长下测量透光率。以
抑制NBT还原50%为一个酶活单位,每个处理3
次重复。
1.4.3 POD活性测定
采用愈创木酚法[5],4ml反应体系中含有1.9
ml 0.1mol/L磷酸缓冲液(pH=7.2)、1ml 0.1%
愈创木酚、1ml 0.8% H2O2 及0.1ml酶粗体液,对
照以pH=7.2的0.1mol/L磷酸缓冲液代替酶粗
提液。在30℃的水浴锅中保温20min,并在470nm
波长下测定吸光值。在上述反应条件下,以每分钟
每克鲜重OD值变化1.00所需的酶量为一个酶活
单位,每处理3次重复。
1.4.4 PPO活性测定
以邻苯二酚作为底物[5],在小试管中依次加入
2.4ml 1/15mol磷酸缓冲液(pH=6.8)、1.5ml
0.02mol/L邻苯二酚及0.1ml酶粗提液混合均匀
后,放入40℃的水浴锅中保温30min,在398nm波
长下测量光密度,以磷酸缓冲液代替酶液作对照。
在上述反应条件下,以每分钟每克鲜重OD值变化
0.01所需的酶量为一个酶活单位,每处理3次重复。
1.4.5 MDA含量测定
采用硫代巴比妥酸法[6],4ml的反应体系中含
有2ml 0.5%硫代巴比妥酸溶液、1ml 50mmol/L
pH7.8的磷酸缓冲液及1ml酶粗体液,混合后于沸
水浴上反应20min,迅速冷却后离心(5000r/min,
5min),上清液分别于532nm、600nm、450nm 波长
下测定吸光值,以50mmol/L pH7.8的磷酸缓冲液
代替酶液作为对照,每个处理3次重复。
1.4.6 Pro含量测定
采用酸性茚三酮法测定[7],6ml的反应体系中
含有2ml冰醋酸、2ml酸性茚三酮试剂、0.5ml 0.1
mol/L磷酸缓冲液(pH=7.2)及1.5ml酶粗体液,
与沸水浴中加热15min,在520nm波长下测量光密
度,对照用0.1mol/L磷酸缓冲液(pH=7.2)代替
—62—
中国草地学报 2013年 第35卷 第4期
酶液,每处理3次重复。
1.5 数据处理及评价方法
指标相对值=
处理测定值
对照测定值×100
单项指标耐镉系数[8]:
ω=
不同浓度处理下的平均测定值
对照测定值
运用SAS 8.0进行方差分析,综合评价方法采
用标准差系数赋予权重法,计算方法如下:
1.5.1 数据标准化
运用隶属函数对各指标进行标准化处理
μ(Xj)=
Xj-Xmin
Xmax-Xmin  
(1)
μ(Xj)=
Xmax-Xj
Xmax-Xmin  j=1
,2,…n (2)
式中,Xj表示第j个综合指标值;Xmin表示
第j个综合指标的最小值;Xmax表示第j个综合
指标的最大值,指标与耐镉性成正相关用隶属函数
公式(1)计算隶属函数值,指标与耐镉性成负相关
用反隶属函数公式(2)计算隶属函数值。
1.5.2 权重确定
采用标准差系数法(S),用公式(3)计算标准
差系数Vj,公式(4)归一化后得到各指标的权重系
数 Wj。
Vj=


i=1
(Xij-Xj)槡 2
Xj
  (3)
Wj=
Vj


i=1
Vj
      (4)
1.5.3 综合评价值
D=∑

j=1
[μ(xj)·Wj]    j=1,2… (5)
式中,D值为各供试材料的综合评价值。
2 结果与分析
2.1 镉胁迫对披碱草株高、地上生物量的影响
由表2可以看出,在镉胁迫下,同一处理不同材
料间在株高上存在着显著的差异(P<0.05),并且
相同材料不同处理间也存在着显著差异。随着镉浓
度的增加,株高呈明显的下降趋势。从材料间比较
的情况来看,10mg/kg镉浓度胁迫对各材料的相对
株高影响较小,80%的材料相对株高都在90%以
上,相对株高低于70%的只有13号材料,即采自河
表2 镉胁迫对披碱草株高和地上生物量的影响
Table 2 Effect of different concentrations of Cd on plant height and aboveground biomass
材料号
Material
number
不同浓度镉胁迫下植株的相对株高(%)
Relative plant height(%)
0  10  20  50  100  200
不同浓度镉胁迫下植株的相对地上生物量(%)
Relative aboveground biomass(%)
0  10  20  50  100  200
1  100  94.25  91.24  88.03  74.72  53.28  100  98.89  93.93  89.43  84.61  78.35
2  100  97.59  91.67  87.24  82.28  76.94  100  96.52  94.63  92.36  91.1  81.85
3  100  96.64  91.68  87.23  79.63  74.74  100  98.1  88.66  76.98  52.58  49.57
4  100  96.42  87.13  84.29  78.37  75.56  100  92.43  90.59  83.39  80.9  75.81
5  100  93.43  86.28  80.46  71.48  56.71  100  96.12  92.61  88.78  82.53  77.98
6  100  95.94  90.81  83.91  79.36  70.01  100  93.53  87.88  82.86  79.43  75.42
7  100  77.54  64.78  61.85  58.04  51.49  100  63.34  40.18  33.99  27.16  18.28
8  100  92.55  86.65  85.64  75.35  71.89  100  94.41  91.67  87.02  78.75  16.11
9  100  93.3  90.94  82  74.37  64.51  100  90.46  81.17  58.72  46.24  24.65
10  100  93.53  85.99  81.49  77.74  70.35  100  93.69  89.12  83.13  81.95  77.9
11  100  91.73  87.17  83.6  82.63  71.6  100  94.89  93.14  92.03  90.61  88.84
12  100  96.31  90.46  84.1  74.27  65.04  100  69.34  37.87  37.45  31.27  16.34
13  100  65.29  63.43  54.24  50.16  46.16  100  91.44  85.18  83.66  82.55  80.45
14  100  94.82  92.83  88.58  84.29  72.26  100  96.22  93.78  92.06  89.71  83.35
15  100  87.45  79.65  69.38  60.79  57.24  100  96.06  95.2  94.77  94.2  93.34
16  100  96.58  90.51  87.36  74.12  63.15  100  95.51  90.01  85.23  83.09  81.17
17  100  95.9  85.17  77.8  63.61  60.86  100  96.65  93.57  89.29  83.16  79.34
18  100  91.59  87.4  83.35  64.42  57.72  100  96.5  94.1  90.04  83.84  81.82
19  100  93.76  90.48  83.38  72.95  57.92  100  92.79  88.77  87.51  82.96  80.6
20  100  83.82  75.39  70.66  65.19  50.72  100  92.04  86.39  84.81  82.11  67.26
F值 1.61  1.69  2.17  1.66  1.48  2.5  8.99  8.59  10.6  22.1
P  P<0.05
  注:最后一行F值表示材料间差异显著(P<0.05);下同。
Note:The F value show the significant difference(P<0.05);the same as below.
—72—
杨 丽 袁庆华   重金属镉对野生披碱草生长与生理特性的影响
北雾灵山的披碱草;在20mg/kg镉浓度的胁迫下,
材料的相对株高变化范围为63.43%~92.83%,其
中只有2份材料的相对株高低于70%,即采自青海
湖海北种羊场的7号材料和河北雾灵山的13号材
料;当镉浓度达到50mg/kg和100mg/kg时,对披
碱草种质材料的相对株高影响较大,相对株高均在
90%以下,其变化范围分别为54.24%~88.58%和
50.16%~84.29%;在200mg/kg镉浓度下,相对株
高均 在 80% 以 下,其 变 化 范 围 为 46.16% ~
76.94%。总体来看,镉对株高的影响耐性强的材料
为采自山西立石村的2号材料,耐镉性较差的材料
是采自河北雾灵山的13号材料和北京百望山的20
号材料。
镉胁迫对披碱草种质材料地上生物量有显著影
响(P<0.05),随着镉浓度的增加,披碱草种质材料
的地上生物量明显降低。在10mg/kg镉浓度胁迫
下,地上相对生物量大于92%有18份材料,只有2
份材料生物量较低,即采自青海的7号材料和兰州
的12 号材料,相对生物量分别为 63.34% 和
69.34%。在20mg/kg镉浓度胁迫下,地上相对生
物量大于90%有10份材料,相对生物量较低的材
料仍然是7号和12号材料,地上相对生物量分别是
40.18%和37.87%。高浓度镉胁迫对披碱草种质
材料地上相对生物量的影响较大,在镉浓度达到
200mg/kg时,7号、8号和12号材料的相对生物量
低于20%。
2.2 镉胁迫对披碱草存活率、分蘖数的影响
镉胁迫对披碱草种质材料成活率存在显著的影
响(表3),经过25d的重金属镉胁迫后,随着镉浓度
的加大,各材料的存活苗数明显降低。低浓度的镉
对披碱草种质材料的存活率影响较小,镉浓度在
10mg/kg~50mg/kg时,20份种质材料的成活率在
90%以上的有19份材料,只有12号材料的成活率
低于90%。高浓度的镉对种质材料的成活率影响
较大,在100mg/kg镉胁迫下,成活率在90%以上
有12份材料,其它8份材料的成活率均在80%~
90%之间。在200mg/kg镉胁迫下,相对成活率在
90%以上的只有3份材料,成活率在80%~90%之
间的有11份材料,成活率低于80%的有6份材料,
其中成活率最低的18号材料是采自甘肃古浪县的
披碱草。
披碱草种质材料的分蘖数随着镉浓度的升高呈
明显的下降趋势(表3),经方差分析表明,镉浓度对
材料间的分蘖数有显著的影响(P<0.05)。通过平
均数的多重比较(LSD),可以看出在10mg/kg浓度镉
胁迫下,相对分蘖数在80%以上的有14份材料,其他
表3 镉胁迫对披碱草存活率和分蘖数的影响
Table 3 Effect of different concentrations of Cd on survival rate and tiler number
材料号
Material
number
相对存活率(%)
Relative survival rate(%)
0  10  20  50  100  200
相对分蘖数(%)
Relative tiler number(%)
0  10  20  50  100  200
1  100  98.33  98.33  96.67  96.67  88.33  100  87.71  71.89  65.4  51.26  47.56
2  100  98.33  95  95  91.67  88.33  100  92.49  82.42  70.15  65.2  55.13
3  100  96.67  95  90  88.33  81.67  100  86.71  80.83  65.47  51.85  40.41
4  100  100  100  98.33  95  90  100  79.9  65.69  58.17  50.65  45.1
5  100  100  98.33  93.33  88.33  85  100  91.05  85.92  66.47  52.74  38.51
6  100  100  98.33  90  80  71.67  100  75.75  70.04  61.94  52.23  43.96
7  100  98.15  94.63  89.26  81.85  72.78  100  76.67  59.4  47.36  43.43  37.18
8  100  100  100  96.67  93.33  85  100  97.44  72.82  63.59  55.9  50.77
9  100  98.33  96.67  90  81.67  75  100  91.85  83.7  64.07  51.85  35.93
10  100  100  100  98.33  96.67  95  100  89.44  81.36  64.26  55.65  37.48
11  100  100  100  96.67  91.67  86.67  100  86.67  72.96  65.93  58.89  51.85
12  100  98.33  89.45  84.28  82.61  75.39  100  100  96.97  63.3  48.48  46.4
13  100  98.33  96.67  93.33  86.67  81.67  100  84.62  54.76  47.44  40.11  37.55
14  100  100  98.33  96.67  91.67  83.33  100  91.38  80.65  75.52  64.8  59.67
15  100  100  100  100  93.33  80  100  74.08  59.79  59.79  59.79  59.79
16  100  100  100  100  100  100  100  96.97  84.24  72.58  59.02  52.65
17  100  100  100  100  100  100  100  82.22  66.32  58.63  45.3  35.04
18  100  100  100  100  100  61.67  100  72.39  62.87  52.51  42.44  39.88
19  100  97.78  95.56  95.56  93.33  86.67  100  93.64  77.88  71.82  56.06  46.97
20  100  100  100  96.67  83.33  73.33  100  73.33  63.33  50  38.89  38.89
F值 0.66  2.38  3.59  3.04  2.33  1.15  1.68  1.45  1.22  2.96
P  P<0.05
—82—
中国草地学报 2013年 第35卷 第4期
6份材料的分蘖数均在70%~80%之间,其中分蘖数
最低的是来自甘肃的18号和山西五台山的15号材
料。在20mg/kg浓度镉胁迫下,相对分蘖数在80%
以上的有8份材料,其中12号材料的分蘖数最高达
96.97%,相对分蘖数最低的材料有来自河北的13
号、青海的7号和山西的15号材料,其相对分蘖数都
在60%以下。在100mg/kg和200mg/kg高浓度镉的
胁迫下,各材料的相对分蘖数较低,相对分蘖数在
38.89%~64.8%和35.04%~59.79%。总体来看,
镉浓度与相对分蘖数呈显著的负相关,在相对分蘖数
上耐镉性较强的材料为采自兰州市的12号材料,耐
镉性较差的材料为7号和13号材料。
2.3 镉胁迫对披碱草叶组织含水量的影响
由表4可知,随着镉浓度的升高,披碱草材料的
叶组织含水量呈下降趋势。低浓度的镉对植物叶组
表4 镉胁迫对披碱草叶组织含水量的影响
Table 4 Effect of different concentrations of Cd on
leaf organization water content
材料号
Material
number
叶组织相对含水量
Relative leaf organization water content
0  10  20  50  100  200
1  100  95.23 86.07 82.11 72.24  50.27
2  100  94.45 91.19 90.88 87.51  72.05
3  100  96.79 95.9  95.87 95.35  93.13
4  100  98.37 91.51 86.55 84.07  73.71
5  100  97.52 93.7  86.53 71.81  46.82
6  100  95.58 83.81 77.3  65.6  42.68
7  100  98.32 96.1  93.7  92.75  52.39
8  100  64.41 61.49 58.75 54.33  37.23
9  100  98.87 98.17 97.56 96.35  95.93
10  100  95.44 87.5  78.63 74.83  65.75
11  100  89.67 80.32 78.48 72.01  64.25
12  100  94.79 92.03 78.18 57.87  33.91
13  100  89.91 74.54 66.63 63.63  52.03
14  100  94.42 93.21 87.71 75.16  71.85
15  100  67.2  60.55 53.91 41.35  33.15
16  100  87.5  76.65 64.47 51.07  37.6
17  100  98.35 88.2  84.38 61.56  52.39
18  100  89.43 82.49 71.6  47.76  32.57
19  100  85.05 79.8  69.99 55.92  37.8
20  100  76.81 59.83 43.68 34.96  22.02
F值 5.27  4.93  4.36  3.12  2.19
P  P<0.05
织含水量的影响不大,而在高浓度的镉胁迫下对植
物叶组织含水量影响较大。从材料间比较的情况来
看,在10mg/kg镉浓度胁迫下,叶组织含水量在
80%以上的有17份材料,其他3份材料的叶组织含
水量较低,即采自山西沁源县草场的8号、山西五台
山的15号和北京百望山的20号材料。在20mg/kg
和50mg/kg镉浓度胁迫下,叶组织含水量较低的材
料仍然是8号、15号和20号材料。在镉浓度为
100mg/kg时,对披碱草种质材料的叶组织含水量
影响较大,叶组织含水量在60%以下的有7份材
料,当镉浓度达到200mg/kg时,叶组织含水量在
60%以下的有13份材料,其中20号材料的含水量
最低为22.02%。
2.4 镉胁迫下综合评价指标的耐镉系数
从表5可以看出,不同材料在相同指标下的耐
镉系数差异显著(P<0.05),相同材料在不同指标
下的耐镉系数也存在差异,所以,用单项指标难以真
正反映出不同材料的耐镉性,运用多指标进行综合
评价才能使评价结果更具科学合理性。
表5 20份披碱草材料在镉胁迫下综合评价指标的耐镉系数
Table 5 Cd2+-tolerance coefficient of comprehensive
evaluation indexes of twenty materials
材料号
Material
number
耐镉系数Cd2+-tolerance coefficient
株高
Plant
height
地上生物量
Above
ground
biomass
存活率
Survival
rate
分蘖数
Tiler
number
叶组织含水量
Leaf
organization
water content
1  0.8  0.89  0.96  0.65  0.77
2  0.87  0.91  0.94  0.73  0.87
3  0.86  0.73  0.9  0.65  0.95
4  0.84  0.85  0.97  0.6  0.87
5  0.78  0.88  0.93  0.67  0.79
6  0.84  0.84  0.88  0.61  0.73
7  0.63  0.37  0.87  0.53  0.87
8  0.82  0.74  0.95  0.68  0.55
9  0.81  0.6  0.88  0.65  0.97
10  0.82  0.85  0.98  0.66  0.8
11  0.83  0.92  0.95  0.67  0.77
12  0.82  0.38  0.86  0.71  0.71
13  0.56  0.85  0.91  0.53  0.69
14  0.87  0.91  0.94  0.74  0.84
15  0.71  0.95  0.95  0.63  0.51
16  0.82  0.87  1  0.73  0.63
17  0.77  0.88  1  0.58  0.77
18  0.77  0.89  0.92  0.54  0.65
19  0.8  0.87  0.94  0.69  0.66
20  0.69  0.83  0.91  0.53  0.47
F值 1.87  15  3.47  1.56  4.9
P  P<0.05 P<0.05 P<0.05 P<0.05 P<0.05
—92—
杨 丽 袁庆华   重金属镉对野生披碱草生长与生理特性的影响
2.5 披碱草苗期耐镉性综合评价
采用标准差系数赋予权重法,计算20份披碱草
种质材料苗期的综合评价D值(表6),根据各个材
料的D值结果可以看出,综合评价D值的变化范围
是0.347~0.963。材料12、15、11、1、14、19的D值
在0.7以上,在20份披碱草材料中综合评价最优,
其中采自兰州市东堡的12号和山西五台山的15号
材料耐镉性最强,D值分别为0.963和0.841;D值
在0.5~0.7的材料有3、5、9、8、13、10、4、6、17、20、
2,属中等耐镉性材料;D值在0.5以下的有3份材
料,分别是7、16和18,属耐镉性较差的材料,其中
采自甘肃古浪县的18号材料的D值最低,为0.347。
表6 20份披碱草材料苗期耐镉性综合评价
Table 6 Comprehensive evaluation of Cd2+tolerance of twenty materials
材料号
Material
number
隶属函数值Subordinate function
株高
Plant height
地上生物量
Aboveground
biomass
存活率
Survival rate
分蘖数
Tiler number
叶组织含水量
Leaf organization
water content
综合评价D值
Evaluation D
1  0.219  0.098  0.310  0.446  0.404  0.716
2  0.000  0.059  0.453  0.062  0.204  0.524
3  0.037  0.371  0.691  0.433  0.039  0.686
4  0.089  0.174  0.238  0.671  0.211  0.544
5  0.303  0.122  0.500  0.346  0.363  0.684
6  0.100  0.187  0.858  0.631  0.488  0.543
7  0.780  1.000  0.906  1.000  0.215  0.452
8  0.151  0.363  0.357  0.292  0.844  0.625
9  0.196  0.593  0.834  0.413  0.000  0.649
10  0.170  0.164  0.143  0.406  0.339  0.575
11  0.121  0.048  0.357  0.331  0.409  0.773
12  0.163  0.968  1.000  0.156  0.521  0.963
13  1.000  0.173  0.620  0.996  0.562  0.601
14  0.019  0.064  0.429  0.000  0.259  0.712
15  0.519  0.000  0.381  0.544  0.924  0.841
16  0.153  0.133  0.000  0.061  0.679  0.421
17  0.335  0.109  0.000  0.782  0.409  0.542
18  0.328  0.094  0.548  0.944  0.653  0.347
19  0.238  0.141  0.445  0.238  0.634  0.702
20  0.575  0.210  0.667  0.996  1.000  0.539
权重 0.196  0.192  0.165  0.241  0.206
2.6 镉胁迫对披碱草叶片中SOD、POD、PPO活性
的影响
由图1可知,耐镉性强的12号材料和耐镉性
中等的9号材料叶片中SOD的活性均随镉浓度的
增加呈上升趋势,并且这2个材料的上升幅度差
异不太明显,相对来说12号材料的上升幅度略大
于9号材料。而耐镉性差的7号材料当镉浓度>
20mg/kg时,叶片中SOD的活性则呈现明显的下
降趋势,这可能是因为高浓度的镉对耐性差的材
料叶片中SOD的活性有较大的抑制作用。从图2
可以看出,在镉的胁迫下,3个不同耐性材料叶片
中POD活性的变化差异较大,耐镉性强的12号材
料叶片中POD的活性随镉浓度的增加而加大,并且
明显高于耐镉性中等的9号材料,而耐镉性差的7
号材料则随着镉浓度的增加,叶片内POD的活性呈
现明显的下降趋势,这说明不同耐性材料间在POD
的活性上存在明显的差异,因此可以采用POD指标
对材料的耐镉性进行初步的评价。从图3可以看
出,耐镉性不同的3个材料叶片中PPO的活性均随
镉浓度的增加呈上升趋势,耐镉性强的12号材料的
上升幅度明显大于其他两个材料,其中耐镉性差的
7号材料的上升幅度最小。
2.7 镉胁迫对披碱草叶片丙二醛、脯氨酸含量的影响
3个披碱草材料叶片中丙二醛含量、脯氨酸含
量随镉浓度的增加而升高,但不同材料间变化存在
差异。从图4可知,耐镉性差的7号材料在高浓度
镉胁迫下丙二醛含量增加的幅度明显高于9号和
12材料,耐镉性强的12号材料叶片中丙二醛含量
的增加低于耐镉性中等的9号材料。随着镉浓度的
增加,3份披碱草材料的脯氨酸含量随之增加(图5),
—03—
中国草地学报 2013年 第35卷 第4期
图1 镉胁迫对披碱草SOD活性的影响
Fig.1 Effects of different concentrations of Cd2+
on the activities of SOD
图2 镉胁迫对披碱草POD活性的影响
Fig.2 Effects of different concentrations of Cd2+
on the activities of POD
图3 镉胁迫对披碱草PPO活性的影响
Fig.3 Effects of different concentrations of Cd2+
on the activities of PPO
图4 镉胁迫对披碱草 MDA含量的影响
Fig.4 Effects of different concentrations of Cd2+
on contents of MDA
图5 镉胁迫对披碱草脯氨酸含量的影响
Fig.5 Effects of different concentrations of Cd2+
on contents of proline
其中耐镉性最差的7号材料增加的幅度大于9号和
12号材料,耐镉性最强的12号材料增加的幅度最
小。
3 讨论和结论
大量研究表明,当镉浓度超过一定水平时,植物
的株高和生物量的受抑制程度与外源镉浓度呈极显
著的正相关(P<0.01)[9],分蘖数也表现为随镉
处理浓度的增加而呈持续下降的变化趋势[10],余东
等[11]研究表明高浓度的镉对枇杷(Eriobotryaja-
ponica)的茎、叶含水量有显著的抑制作用,且随着
镉浓度的增加,这种抑制作用愈明显,这一研究结论
与本文的研究结果是一致的,重金属镉对披碱草种
质材料的株高、生物量、分蘖数及存活率具有显著的
影响,随着镉处理浓度的增加而降低,在高浓度的镉
胁迫下,披碱草体内的含水量显著下降,各材料耐镉
性存在显著差异。本文运用标准差系数赋予权重法
—13—
杨 丽 袁庆华   重金属镉对野生披碱草生长与生理特性的影响
对上述各指标进行了耐镉性的综合评价,筛选出耐
镉性最强的12号(采自兰州市东堡)和15号披碱草
材料(采自山西五台山),耐镉性中等的材料有采自
山西左云的3号披碱草材料、山西沁原的5号披碱
草材料及北京延庆的9号披碱草材料,耐镉性最差
的材料是采自青海湖种羊场的7号披碱草材料和四
川的16号披碱草材料。
许多研究表明镉胁迫下,随着镉浓度的增高,超
氧物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和多酚氧化
酶(PPO)的活性会明显的增加。吴旭红等[12]在研
究苜蓿(Medicago sativa L.)苗期耐镉性时发现,
镉胁迫对苜蓿幼苗体内SOD和POD具有激活效
应,随着镉浓度升高,处理时间延长,SOD和POD
的活性会明显增加。陈宏等[13]在研究小麦(Tritic-
um aestivumL.)幼苗时得出,在高浓度镉的胁迫下
植株体内SOD和POD的活性呈现下降的趋势。另
外段云青等[14]在研究镉胁迫对小白菜(Brassica
chinensis L.)体内PPO活性的影响时得知,镉胁迫
对植株体内PPO的活性有明显的促进作用,随镉浓
度的增加体内PPO的活性增强,耐性越强的材料酶
活性增加的幅度越大,此结论与本实验的3份材料
所得的结果相一致。本实验筛选出的耐镉性强的
12号材料与耐镉性中等的9号材料的SOD和POD
随着镉浓度的升高而增加,耐镉性差的7号材料则
在高浓度镉的胁迫下植株体内SOD和POD的活性
呈现下降的趋势。
纪秀娥等[15]研究结果显示随着镉处理浓度的
升高,处理时间的延长,小麦幼苗体内脯氨酸含量上
升,表现出了一定的耐镉性。但是也有相关研究结
果与上述结果不一致,如张琼等[16]通过研究镉对绿
豆(Vigna radiata L.)幼苗生长的影响时发现,绿
豆幼苗地上部分脯氨酸含量在低浓度镉的胁迫下,
植株体内脯氨酸的含量有所增加,但在高浓度的镉
胁迫下,即在100mg/L镉浓度胁迫下,脯氨酸含量
反而下降,本研究的结论与纪秀娥等的研究结论相
一致,还未发现高浓度镉胁迫下脯氨酸含量下降的
趋势,有关这方面的结论还需要做进一步的研究。
许多研究者认为镉胁迫对植物体内丙二醛的含
量有显著的影响,如纪秀娥等[15]、陈宏等[13]研究者
在研究水稻和小麦的耐镉性中发现,植株幼苗受镉
胁迫后,随着镉浓度的增高,处理时间的延长,对植
株的生长有明显的抑制作用,叶片的膜脂过氧化产
物丙二醛的含量明显升高。王凯荣等[17]通过研究
镉对花生(Arachis hypogaea)叶片的毒害后发现,
与钝感型品种相比,敏感型品种的丙二醛质量分数
变化速率较高。章秀福等[18]通过对镉胁迫下水稻
MDA含量的变化及其基因型差异进行研究,发现
随着土壤镉浓度的增加,MDA含量先下降后上升。
本实验的研究结果表明,3份不同耐镉性披碱草材
料叶片中丙二醛含量随镉浓度的增加而升高,但不
同材料间丙二醛含量变化存在差异,耐镉性较差的7
号材料丙二醛含量增加幅度明显高于其他2个材料,
耐性最强的12号材料丙二醛含量的增加幅度最小。
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Effects of Heavy Metal Cadmium on Morphological and
Physiological Characteristics in Wild Elymus dahuricus
YANG Li 1,2,YUAN Qing-hua2
(1.School of Pastoral Agriculture Science and Technology,Lanzhou University,Lanzhou730000,
China;2.Institute of Animal Sciences,CAAS,Beijing100193,China)
Abstract:Resistance of the 20kinds of wild Elymus dahuricus germplasm materials colected from dif-
ferent parts of the domestic to Cadmium were studied with greenhouse experiment,and the morphological
indexes,such as plant height,the ground biomass,survival rate,were measured and analyzed by subordi-
nate function and comprehensive evaluation method.Accordingly,1stronger,1medium and 1weaker re-
sistance materials were selected for analysis of SOD,POD,PPO enzyme.The result showed that with the
Cadmium concentration increased,morphological indexes of the 20materials were significantly declined,
the resistance of materials No.12,No.15and No.11to Cadmium were stronger,while No.7and No.16
were poorer and No.3、No.5and No.9were medium;the activities of SOD,POD and PPO were increased
in stronger resistant materials and medium resistant materials,whereas the activities of SOD,POD were
decreased in poorer resistant materials;it also had significant effect on malondialdehyde and proline con-
tent and varied obviously among different materials.
Key words:Elymus dahuricus;Cd-tolerance;Enzyme activity;Comprehensive evaluation
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杨 丽 袁庆华   重金属镉对野生披碱草生长与生理特性的影响