全 文 ：蒲公英提取物黄酮类物质成分及其抗氧化活性的初步研究
陈景耀1　龚祝南2　宰学明1　刘　华1　常　俊1
(1.南京师范大学生命科学学院 210097;2.南京大学生命科学学院 210093)
　　摘　要　蒲公英全草干粉经乙醇回流提取 , 聚酰胺柱层析(polyamide pole)得到的黄酮类提取物(total flavonoid)
的纯度为 67.4%,用高效液相色谱法(HPLC)测定其中的芦丁(Rutin)占 5.49%, 槲皮素占 1.22%, 另外还有其他黄
酮类物质。经NBT法测定的结果表明 , 蒲公英黄酮类提取物和其中的芦丁均有较强的体外清除超氧阴离子(O·-2)
的能力。
关键词　蒲公英;提取分离;黄酮类物质;抗氧化
Determination of Antioxidative Activation and Distillation of Total Flavonoid , Rutin and Quercetin in Taraxacum mon-
golicum Hand.-Mazz
Abstract A result of 5.49% of Rutin and 1.22% of Quercetin in distillation of Taraxacum mongolicum Hand-Mazz.with alco-
hol and polyamide pole was detemined by means of HPLC and a result of 67.4% of total flavonid in the distillation of Taraxacum
mongolicum Hand.-Mazz by uv-754.It is indicated that total flavonoid of Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz and Rutin
have definite domino effect of antioxidation by NBT , but it was not found in Quercetin.
Key words Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz;Distillation , Rutin , Quercetin , Total flavonoid , Antioxidation
　　蒲公英为常用清热解毒中药。除了有效成分绿
原酸之外 ,其中的黄酮也引起了人们的关注。据报
道类黄酮具有很多生物活性[ 1] :杀虫 、抑菌或杀菌 ,
扩张血管 ,利胆或护肝 ,多数具有维生素 P 样作用 ,
有的还能祛痰止咳 ,还有的具有抗癌活性 ,尤其是芦
丁和槲皮素均有显著的抑制胆碱酯酶作用 ,槲皮素
还具有扩张心血管的作用 。近来自由基生物学研究
成果表明 ,其许多生物学效应均与清除活性氧的作
用密切相关。本文旨在分析蒲公英中的黄酮类物质
及其清除超氧阴离子的效应。
1.　材料与方法
1.1　材料　蒲公英全草由南京野生植物研究院提
供 ,经鉴定为 Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz ,磨
成粉末并于鼓风恒温干燥箱中干燥至恒重备用。芦
丁和槲皮素标准品由南京野生植物研究院提供。
1.2　实验方法
1.2.1　总黄酮的提取分离　参照《中草药化学》的
方法[ 2] ,精密称取50g 蒲公英粉末 ,用 75%的酒精每
次350ml加热回流提取三次 ,每次 2h ,合并提取液 ,
于高速离心机上离心两次(3000r/m),每次 20min ,合
并上清液 ,并浓缩至 50ml ,加蒸馏水稀释后上聚酰
胺柱。聚酰胺柱(R=1.5cm , L=44cm),事先经处理
并用蒸馏水洗脱至中性 。上柱充分吸附后 ,先用蒸
馏水洗至无色(约 1200ml), 然后加 95%的酒精洗
脱 ,洗脱速度为 1.5ml/min ,洗脱至无色为止 ,收集洗
脱液约 1000ml。旋转蒸发仪浓缩至 30ml ,在水浴上
蒸干得粉状结晶 ,精密称量 ,计算得率 。实验重复三
次 ,得到一致的结果。
1.2.2 　总黄酮含量测定 　参照周铜水等人的方
法[ 3] [ 4]
精密称取芦丁(纯度 98%)配成的标准溶液
(1mg/ml)3ml于 10ml容量瓶中 ,加1%AlCl3甲醇液 ,
摇匀 , 定容。稳定后 ,测定 300 —460nm 之间每隔
10nm光吸收值。绘制波长 —吸收度曲线 ,找出最大
吸收波长为 410nm ,以此作为测定波长 。
样品测定 　精密称取 0.0200g 粗总黄酮溶于
20ml的甲醇中。分别取上述样品液 2ml置于 3个容
量瓶中 ,各加 1ml 1%AlCl3甲醇溶液并定容至 10ml ,
摇匀 ,待稳定后测 410nm处的吸收度 ,并根据标准曲
线计算总黄酮的含量。
1.2.3　HPLC测定芦丁 、槲皮素含量　参考代雪平
等的方法[ 5]
1.2.3.1　HPLC 色谱条件
色谱柱:Shim-paclc、CLC -ODS 、Υ6＊150MM ,
柱温为 45℃,
流动相:甲醇:1%冰醋酸水溶液=50:50(v/v),
流速:1.0ml/min
检测波长:280nm ,衰减:0.01.
22　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　中国野生植物资源　　　　　　　　　　　　　　　第 20卷第 3 期
1.2.3.2　样品溶液及对结照品溶液的制备
样品溶液　精密称取 27.4mg样品 ,于具塞锥形
瓶中 ,加甲醇 10ml ,摇匀 ,超声提取 20分钟 ,静置至
室温 ,过滤后 ,滤液用流动相稀释 3倍供分析用 。
对照品溶液　精密称量芦丁 3.8mg 、槲皮素 3.
825mg分置于具塞锥形瓶中处理同上 ,最后分置于
50ml的容量瓶中 ,用流动相定容 ,使终浓度分别达
到0.076mg/ml和0.0765mg/ml。
1.2.4　总黄酮和芦丁 、槲皮素的体外去除超氧阴离
子实验
参照王爱国等方法[ 6] 。分别取 1mg/ml的黄酮
粗提液 、芦丁和槲皮素 10μ1 、20μ1 、30μ1 、40μ1 、50μ1 、
60μ1 、70μ1 、80μ1 、与 3mlNBT 反应液混合 ,4000Lex 光
强下照光 15min , 560nm 处测其吸光值 , 采用抑制
NBT光化学还原作用50%的样品量作为一个类SOD
活性单位 。
1.3　仪器和试剂
LC-10AD型高效液相色谱仪 HPLC(日本岛津
公司),SPD-10A多波长紫外检测器。TGLL-18G
高速离心机 ,旋转蒸发仪 ,756-UV分光光度计 ,722
光栅分光光度计 。实验试剂都为国产分析纯 。
2　结果与分析
2.1　黄酮类提取物的测定
50g蒲公英全草经 75%的乙醇回流提取 ,聚酰
胺柱分级洗脱 ,真空干燥后得总黄酮提取物。经测
定其以芦丁为标样的纯度达 67.42%。表明由上述
方法提取的蒲公英中黄酮类物质较高的效益 。
2.2　HPLC测定芦丁 、槲皮素含量
待仪器稳定后 ,对照品和样品均进样 20μ1 ,分
离结果如下(图 1.图 2):
芦丁:tR=4.58min ,峰高 H=52mm ,
槲皮素:tR=9.58min ,峰高H=47mm ,
调节因子:f芦丁 =98%＊0.76 ＊20/52 =0.
02865 ,
调节因子:f槲皮素 =98%＊0.0765＊20/47 =0.
03190 ,
样品中芦丁的含量 X芦丁=0.02865＊35＊100＊
3/20＊2.74=5.49%,
槲皮素的含量 X槲皮素=0.03190＊7＊100＊3/20
＊2.74=1.22%。
　　从 HPLC 分离图谱看 ,在芦丁峰的附近还有五
个峰 ,因无标样 ,暂时不能确定是何种物质 。
2.3　体外去除超氧阴离子的作用
上述三个样品用 NBT 方法得到的抑制率曲线
分别为:粗黄酮类物质为 Y=0.0113X-0.0277 , R2
=0.9643 ,芦丁为 Y=0.0059X +0.0753 , R2 =0.
9849 ,以抑制率达 50%的 mg 数作为一个类 SOD活
力单位。计算得 lmg 黄酮类物质提取物相当于 21.
41个类 SOD活力单位 , lmg 芦丁相当于 13.89个类
SOD活力单位 ,1mg 芦丁相当于 13.89个类 SOO活
力单位 ,表明蒲公英黄酮类物质及其中的芦丁均具
有体外直接去除超氧阴离子(O·-2)的作用 ,槲皮素没
有发现类似作用。
3　结论
3.1　黄酮类粗提物的纯度约为 67.%,其中芦丁含
量 5.49%,槲皮素的含量 1.22%。表明经乙醇回流
提取聚酰胺柱层析提取分离效果较好 ,纯度较高 ,适
用于蒲公英黄酮类成份的提取。
3.2　另外 ,从蒲公英黄酮类物质提取物的 HPLC色
谱图中可以看出除了芦丁和槲皮的含量较高之外 ,
还有五个明显的峰表明还有一些含量较高的成分 ,
有待进一步研究。
3.3　蒲公英黄酮类物质提取物的体外去除超氧阴
离子实验结果表明蒲公英总黄酮具有类 SOD的作
用 ,单独芦丁的抗氧化作用弱于蒲公英黄酮类提取
物 ,提示类黄酮提取物中有些成分具有更高的抗氧
化活性 。类黄酮物质分子量小 ,性质稳定 ,易于吸
收 ,蒲公英黄酮类物质用来研究开发具有抗氧化功
能的化妆品 、保健品和药物具有广阔的应用前景 。
参 考 文 献
[ 1] 　林启寿主编.中草药成分化学.北京:科学出版社　1977;343～ 344
[ 2] 　中草药化学.江苏科技出版社 , 1979:107
[ 3] 　周铜水等.植物资源与环境 , 1997, 6(1):54
[ 4] 　林启寿主编.中草药成分化学.北京:科学出版社　1977:311
[ 5] 　代雪平等.植物资源与环境 , 1996, 5(3):57～ 58
[ 6] 　邵从本 、罗广华 、王爱国、郭俊彦等.植物生理学通讯 ,1983(5):46～ 49
23蒲公英提取物黄酮类物质成分及其抗氧化活性的初步研究