全 文 ：蒲公英药材 CZE-DAD指纹图谱研究
李喜凤 1 ,邱天宝 1 ,郝　哲 2 ,余云辉 1 ,杜云锋 1
(1.河南中医学院 ,河南 郑州 450008;2.中国人民解放军第一五三中心医院药械科 ,河南 郑州 450042)
　　摘要　目的:研究并建立不同产地蒲公英药材 CZE-DAD指纹图谱。方法:选择毛细管区带电泳分离模式 , 以
20mmol/L硼砂为缓冲溶液(pH=9.18),分离电压为 15kV,检测波长为 244nm,以咖啡酸为参照峰 , 测定各样品指
纹图谱 ,并用聚类分析及不同相似度评价方法对其结果进行分析。结果:建立了不同产地蒲公英药材 CZE-DAD指
纹图谱共有模式 ,标定 15个共有峰 , 10批药材的相似度为 0.926 ～ 0.983。结论:本方法操作简便 , 准确可靠 , 重现
性好 ,可作为蒲公英药材鉴别和质量控制方法。
关键词　蒲公英;CZE-DAD;指纹图谱
中图分类号:R282.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2010)11-1712-03
收稿日期:2010-03-23基金项目:河南省科技厅重点科技攻关资助项目(062306100)作者简介:李喜凤(1952-),女 ,教授 ,主要从事中药新药及质量标准研究;Tel:0371-65575823, E-mail:hzsunshine@ 126.com。
　　蒲公英系菊科植物蒲公英 Taraxacummongoli-
cumHand.-Mazz.、碱地蒲公英 Taraxacumsinicum
Kitag.或同属数种植物的干燥全草 〔1〕。具清热解
毒 、抗菌消炎之功效 ,历代本草均有记载 。现代研究
表明 ,咖啡酸为其主要活性成分 ,故对蒲公英的质量
评价多以咖啡酸含量为指标 ,但单一成分的含量不
能全面反映蒲公英的整体特征 ,有关其指纹图谱的
研究已有报道 ,均采用 HPLC法 〔2, 3〕。关于蒲公英药
材 CZE-DAD指纹图谱的研究未见报道 ,本文运用
CZE-DAD法 ,首次建立河南不同产地蒲公英药材指
纹图谱 ,并进行相似度比较 ,以期为进一步完善蒲公
英药材的质量标准提供科学依据。
1　仪器与材料
　　P/ACETM MDQ毛细管电泳仪 (美国 Beckman
公司), DAD检测器 , Karat32数据处理系统 ,未涂层
弹性石英毛细管柱 75 μmID×50 /57 cm(分离长
度 /总长 ,河北永年锐沣色谱器件有限公司), PHS-
2SB型数字酸度计(上海大谱仪器有限公司), KQ-
100E型超声波仪 (昆山市超声仪器有限公司),
YUEPINGFA2004b型电子天平(上海越平科学仪器
有限公司),水为娃哈哈纯净水 ,所用试剂均为分析
纯。蒲公英药材采于河南省内不同地区 ,经河南中
医学院药学院陈随清教授鉴定均为菊科植物蒲公英
T.mongolicumHand.-Mazz.的干燥全草 ,样品来源
见表 1。咖啡酸 (批号:110885-200102)、绿原酸(批
号:110753-200413)对照品由中国药品生物制品检
定所提供 。
2　方法与结果
2.1　对照品溶液制备　精密称取咖啡酸 、绿原酸
对照品适量加 70%甲醇溶解并制成浓度为 0.0976
mg/mL、0.0848 mg/mL的溶液 ,摇匀 ,即得 。
　　表 1　 10批蒲公英药材来源
编号 产地 采集时间 编号 产地 采集时间
S1 南阳内乡县 2009.5 S6 南阳内乡县报摊村 2009.5
S2 驻马店正阳县 2009.5 S7 漯河市 2009.5
S3 焦作温县 2009.5 S8 周口市 2009.5
S4 商丘市 2009.5 S9 济源市 2009.5
S5 南阳镇平县 2009.5 S10 许昌长葛市 2009.5
2.2　供试品溶液制备　取蒲公英细粉 0.5g,精密
称定 ,加入 10 mL乙醇 ,称定重量 ,水浴回流 1 h,放
至室温 ,用乙醇补足失重 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,用
0.45μm的微孔滤膜滤过 ,即得。
2.3　电泳条件　电压 15 kV;压力进样 0.5 psi;进
样时间 5 s;检测波长 244nm;温度 25 ℃;硼砂浓度
20 mmol/L(pH9.18)。实验前依次用 0.1 mol/L
NaOH溶液 、水 、缓冲液依次冲洗 10、10、20 min,样
品分析间隔依次用 0.1 mol/LNaOH溶液 、水 、缓冲
液依次冲洗 3、2、 3 min, 实验结束后用 0.1 mol/
LNaOH溶液 、水冲洗 10min。所用溶液进样前均用
0.45μm的滤膜滤过 , 超声脱气 3 min。
2.4　方法学考察
2.4.1　精密度试验:取同一批次样品(S1)溶液 ,
连续进样 5次 ,测定指纹图谱 ,用中药指纹图谱相似
度评价系统(2004A)软件计算 ,结果相似度均大于
0.912,表明仪器精密度良好 。
2.4.2　重复性试验:取同一批次样品(S1)粉末 6
份 ,平行操作 ,按 “ 2.2”项下方法制备供试品溶液 ,
测定指纹图谱 ,用中药指纹图谱相似度评价系统
(2004A)软件计算 ,结果相似度均大于 0.931,表明
本方法重现性好 。
·1712· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 33卷第 11期 2010年 11月DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2010.11.030
2.4.3　稳定性试验:取同一批次样品 (S1)溶液 ,
每隔 2 h进样 ,连续 10 h,测定指纹图谱 ,用中药指
纹图谱相似度评价系统(2004A)软件计算 ,结果相
似度均大于 0.968,表明供试品溶液在 10 h内性质
稳定 。
2.5　不同产地蒲公英药材指纹图谱的建立　取 10
批不同产地的蒲公英药材 ,按 “2.2”项下方法制备
供试品溶液 ,然后在 “ 2.3”项电泳条件下 ,测定所有
供试品的 CZE-DAD色谱图 。根据不同批次供试品
测定结果所给出的峰数 、峰面积值和相对迁移时间等
相关参数 ,进行分析比较 ,制定优化的指纹图谱。见
图 1。
图 1　蒲公英的 CZE-DAD对照指纹图谱
10.绿原酸　14.咖啡酸
2.6　指纹图谱分析
2.6.1　共有指纹峰的标定:经对所有供试品 CZE-
DAD色谱图的分析 、比较 ,共标定 15个共有峰作为
指纹图谱的特征峰 ,通过与对照品对照及加标试验 ,
10、14号峰分别鉴定为绿原酸 、咖啡酸 。以 14号峰
咖啡酸峰为参照峰 ,分别求出各共有峰的相对迁移
时间 a值和相对峰面积值 。见表 2。
2.6.2　相似度评价:利用 2004A版中药色谱指纹
图谱相似度评价系统计算软件 ,对上述 10批样品进
行相似度评价 ,以 S1蒲公英药材作为参照图谱 ,利
用中位数法进行多点校正生成对照图谱 R,进行色
谱峰差异性评价和整体相似性评价 ,建立蒲公英药
材指纹图谱共有模式。见图 2。另利用 SPSS16.0
软件中 PearsonCorelation法对不同产地蒲公英药
材相似度进行评价 ,各样品图谱与对照图谱的相似
度结果 。见表 3。
　　表 2　 蒲公英 CZE-DAD指纹图谱中共有峰的相对迁移时间 a值和相对峰面积
编号 a 相对峰面积S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10
1 0.3920 0.8046 0.5809 0.3978 1.0008 0.9295 0.9419 1.0178 1.0785 0.5702 0.7765
2 0.4485 0.9691 0.4454 0.2141 0.2147 0.4529 0.3555 0.1026 0.6943 0.2975 0.2726
3 0.4690 2.3545 0.9814 0.7521 1.7895 1.7856 1.3311 1.1793 1.2957 1.2201 1.1005
4 0.4885 0.2208 0.2952 0.5488 0.4855 0.4001 0.4431 0.5365 0.5344 0.2919 0.5472
5 0.5430 0.5922 0.5284 1.1234 2.0955 0.7817 0.7514 1.0700 1.7741 0.6125 0.6073
6 0.5595 0.2675 0.2342 0.2626 0.2964 0.3863 0.3375 0.3201 0.3018 0.2714 0.3211
7 0.5981 0.8754 0.5242 0.3871 0.7391 0.9841 0.8525 0.7168 1.2699 0.3798 0.7959
8 0.6199 0.7201 0.2623 0.2471 0.5714 0.4985 0.2971 0.2608 0.4833 0.2472 0.3263
9 0.6671 1.0434 0.2483 0.2204 0.2681 0.5243 0.4911 0.3254 0.4530 0.1621 0.3447
10 0.6786 2.5811 1.6743 0.3167 1.2082 1.1672 0.2198 0.4719 3.2413 0.4136 0.6097
11 0.7363 2.5325 1.3714 0.4664 1.0844 2.0645 0.9601 0.5365 3.5689 0.8991 1.0609
12 0.7701 0.4421 0.5771 0.7697 0.1715 0.4590 0.3338 0.5610 0.4421 0.7514 1.3762
13 0.9833 0.9912 0.4657 1.5214 1.5443 0.9373 1.2339 1.0748 1.0219 0.7383 0.8161
14 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000
15 1.1458 21.9892 17.4376 7.9998 19.6707 7.2179 5.8496 5.4915 10.9199 5.0568 4.0331
　　表 3 　10批蒲公英样品的相似度结果
样品号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10
2004A 0.948 0.942 0.981 0.958 0.961 0.983 0.926 0.949 0.955 0.937
SPSS 0.996 0.997 0.984 0.996 0.984 0.981 0.979 0.961 0.986 0.958
·1713·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 33卷第 11期 2010年 11月
图 2　蒲公英样品 CZE-DAD指纹图谱共有模式
　　由以上结果可以看出 ,不同产地蒲公英药材的
相似度均在 0.900以上 ,表明各样品间差异性较小 ,
为对蒲公英各药材进一步评价样品差异 ,进行图谱
模式识别分类 ,以便建立更加真实可靠的蒲公英药
材标准指纹图谱。
2.7　系统聚类分析　选择蒲公英指纹图谱中 15
个比较明显的共有峰 , 根据表 1的数据 ,用 SPSS
16.0软件中的系统聚类分析对 10个蒲公英样品进
行聚类分析 ,所用聚类方法为组间距离法 ,距离测度
方法为欧氏距离平方 ,得不同样品的聚类分析图。
结果见图 3。
图 3　不同产地蒲公英 CZE-DAD指纹图谱聚类分析图
3　讨论
3.1　缓冲体系的选择。实验考察了硼砂 、硼酸 、硼
酸-硼砂 -NaCl等缓冲体系 ,结果显示 ,在硼砂缓冲溶
液中 ,各色谱峰峰形和分离度均较好 ,而其他缓冲体
系中 ,部分峰分离度很差 ,且峰形不好 ,有明显拖尾
现象 ,故选择硼砂缓冲体系。
3.2　硼砂浓度的选择 。实验考察了 10 ～ 50mmol/
L不同浓度的缓冲溶液 ,结果显示 ,随着缓冲溶液浓
度的增加 ,各组分迁移时间和分离度均增大 ,当硼砂
浓度为 20mmol/L时 ,样品各组分分离较好 ,咖啡酸
峰形和分离度均较好 ,故选择 20 mmol/L硼砂溶液 。
3.3　分离电压的选择。实验考察了分离电压在 10
～ 18 kV的条件下对各组分迁移时间的影响 ,随着
分离电压的升高 ,各组分迁移时间缩短 ,但分离效果
较差 ,当分离电压为 15 kV时 ,样品各组分分离效果
较好 ,故选择分离电压为 15 kV。
3.4　检测波长的选择 。采用二极管阵列检测器对
检测波长进行考察 ,比较不同波长下的色谱图 ,结果
在 244nm波长处 ,色谱图中色谱峰较多 ,信息丰富 ,
故选择 244nm为检测波长。
3.5　指纹图谱分析结果表明 ,不同产地蒲公英样
品之间相似度均在 0.9以上 ,差异性较小 ,说明不同
产地药材质量稳定 ,可为蒲公英药材质量标准的制
定提供一定的依据。
参 考 文 献
[ 1] 国家药典委员会 .中华人民共和国药典 [ S] .一部 .北
京:化学工业出版社 , 2005:244-245.
[ 2] 李喜凤 ,师绘敏 , 万焱.河南蒲公英 RP-HPLC指纹图谱
研究 [ J].中药材 , 2008, 30(9):1252-1255.
[ 3] 晏媛 , 许重远 , 刘世霆 , 等 .蒲公英的乙酸乙酯部位
HPLC指纹图谱定性分析和咖啡酸的定量测定 [ J] .华
西药学杂志 , 2004, 19(5):344-347.
·1714· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 33卷第 11期 2010年 11月