免费文献传递   相关文献

竹节参总皂苷对局灶性脑缺血大鼠模型的保护作用



全 文 :2005年3月第12卷第3期 中国中医药信息杂志 ·43·

竹节参总皂苷对局灶性脑缺血大鼠模型的保护作用
赵 晖,张秋霞,穆 阳
(首都医科大学中医药学院,北京 100013)
摘要:目的 研究竹节参总皂苷对局灶性脑缺血大鼠模型的保护作用。方法 采用大鼠大脑中动脉栓塞模型,
观察竹节参总皂苷对局灶性脑缺血大鼠存活率、神经症状及血清乳酸脱氢酶(LDH)含量的影响。结果 竹节参总皂
苷(200、100、50 mg/kg)能显著改善局灶性脑缺血大鼠的神经症状(P<0.01),提高动物的存活率(P<0.01),降低动
物血清LDH的含量(P<0.01)。结论 竹节参总皂苷对局灶性脑缺血有明显的保护作用。
关键词:竹节参总皂苷;脑缺血;乳酸脱氢酶;大鼠
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1005-5304(2005)03-0043-02
Study on Pr tective Effets of Pmanxsaponin on Rats with Occlusion of the Middle Cerebral Artery
ZHAO Hui, ZHANG Qiu-Xia, MU Yang (College of TCM, Capital University of Medical Sciences, Beijing 100013,
China)
Abstract:Objective To study the protective effects of pmanxsaponin on rats with focal cerebral
ischemia injury. Methods Focal cerebral ischemia in rats was produced by occlusion of the middle
cerebralartery (MCAO). Observe the influence of pmanxsaponin on neurological deficiency,
mortality rate and determine the LDH activity during the focal cerebral ischemia. Result Pmanxsaponin
can oberviously improve neurologicol symptom, raise mortality rate and descend the LDH activity.
Concluslon Pmanxsaponin has significantly protective effects againstfocal cerebral ischemic injury.
Key words:pmanxsaponin;cerebral ischemia;LDH;rat
竹节参总皂苷(pmanxsaponin)是从五加科植物竹节参
Panax Japonicus C.A Meyer根茎中提取的主要有效活性部
位,其主要成分包括竹节人参皂苷(Chikusetsu- apnin)Ⅲ、
Ⅳ、Ⅴ,人参皂苷(ginsenoside)Rd、Re、Rg1、 g2,三七皂苷
R2(notoginsenoside R2)。笔者前期的药理实验证明,竹节参
总皂苷能显著提高小鼠急性脑缺血、缺氧的存活时间。本研
究拟采用脑动脉栓塞模型(MCAO),观察大鼠在病灶性脑缺血
24、48 h两个时段的存活率、所产生的神经症状、血清LDH
的变化及竹节参总皂苷的保护作用。
1 实验材料
1.1 动物
SD雄性大鼠,清洁级,体重190~210 g,首都医科大学动
物中心提供,合格证号:SCXkC(京)72000-0012。
1.2 药物与试剂
竹节人参总皂苷,首都医科大学中医药学院植化室提供;
LDH测定试剂盒,南京建成生物工程研究所生产。
1.3 仪器和设备
752N型分光光度计,上海精密科学仪器有限公司生产;
TGL-16G型高速台式离心机,上海医用分析仪器厂生产;
AEG-220电子分析天平,日本Shimadzu公司。
2 实验方法
2.1 分组及给药
造模成功后,将实验动物随机分为 5组,即假手术对照
组、MCAO模型组、竹节参总皂苷组(200、100、50 mg/kg,ip)。
用药组先给药2 d,第3天给药后40 min施行手术,术后每12
h给药1次。其中假手术对照组、模型组ip等量的生理盐水。
2.2 大鼠局灶性脑缺血模型的制作
MCAO模型按文献[1]方法制备,稍加改进。大鼠给水合氯
醛350 mg/kg,ip麻醉,仰卧固定,颈正中切口,依次暴露右侧颈
总、颈外和颈内动脉,结扎颈总动脉、颈外动脉,于颈总动脉分
叉下方剪一切口,将预先用酒精灯烧成圆头的尼龙线(长4 cm,
直径0.20~ .25 mm)置于颈内动脉17~18 mm,到有轻微阻力
感为止,扎紧动脉残端,缝合皮肤。假手术组大鼠麻醉后,仅暴
露颈内外动脉分支,不闭塞大脑中动脉。术中、术后室

引起心肌缺血、坏死及纤维化。据此,本实验采用垂体后叶素
复制心肌缺血模型,以心电图为观察指标,了解本药能否改善
垂体后叶素性心肌缺血。结果显示,该药能明显改善垂体后叶
素性心肌缺血,且作用与复方丹参片相当,其机制可能与舒张
冠脉有关,改善心肌供血供氧,可避免由此引发的心律失常和
心功能减退。
参考文献:
[1] 李仪奎,王钦茂,周金黄,等.中药药理实验方法学[M].第2版.上海:
上海科学技术出版社,1991.304-305.
[2] Miyamoto T, Matsumori A, Hwang MW, et al. Th rapeutic effects of
FTY720, anew immunosuppressive agent, in murine model of acute
viral myocarditis[J]. AM JColl Cardiol, 2001,37(6):1713-1718.
[3] 关于成人急性 VMC诊断参考标准和采纳世界卫生组织及国际心脏病
学会联合会关于心肌病定义和分类的意见[J].中华心血管病杂
志,1999,27(6):405-407.
(收稿日期:2004-05-11)
·44· Chinese Journal of Information on TCM Mar.2005 Vol.12 No.3

温严格控制在24~25 ℃,大鼠体温维持在36.5~37.5 ℃。
2.3 神经症状评分方法
将麻醉苏醒后的动物放入鼠笼。分别于脑缺血24、48 h
后由同一观察者双百法评估记录神经功能损害评分,参照文
献[2]方法稍加改进(总分为10分):①提起鼠尾,观察前肢有
无异常表现。凡有左前肢内收、内旋者,视其轻重评为 1~3
分。如果大鼠表现为躯体向右侧旋转,评为4分。②将大鼠置
于金属网上,向后轻拉鼠尾,观察大鼠两前肢张力。根据其左
前肢肌力下降程度评为0~2分。③将大鼠置于光滑平面上,
观察侧向推挡阻力。根据向左侧推挡阻力下降程度评为0~2
分。④大鼠出现左眼上睑下垂、左眼分泌物增多者评为2分。
2.4 MCAO模型大鼠存活率的观察
统计各组大鼠24、48 h的存活率。
2.5 大鼠血清生化指标的测定
大鼠眼眶后静脉丛取血,分离血清,按LDH活性测定试剂
盒说明书测定各组大鼠24、48 h的LDH活性。
2.6 统计学方法
本研究中所有资料均采用Spss for window 10.0统计软
件进行分析。存活率用c2检验。神经功能评分和血清LDH用
方差分析。
3 结果(见表1~表3)
表1 竹节参总皂苷对MCAO模型大鼠存活率的影响
存活率(%)
组 别 剂量(mg/kg)
24 h 48 h
MCAO模型组 50 33.3
竹节参总皂苷组 50 92** 91**
100 92** 91**
200 100** 100**
注:与MCAO模型组比较,**P<0.01(下同)
表2 竹节参总皂苷对MCAO模型大鼠神经功能缺损评
分的影响(—x±s,n=15)
神经功能评分
组 别 剂量(mg/kg)
24 h 48 h
MCAO模型组 8.33±1.12 8.00±1.12
竹节参总皂苷组 50 4.11± .27** 4.03±2.06**
100 3.22±1.99** 3.09±1.10**
200 3.00±0.93** 2.89±0.78**
表3 竹节参总皂苷对MCAO模型大鼠血清LDH含量的
影响(—x±s,n=15)
LDH(u/100mL)
组 别 剂量(mg/kg)
24 h 48 h
MCAO模型组 830.51±146.58# 734.00±138.29#
假手术组 379.75±52.27 358.29±68.27
竹节参总皂苷组 50 609.49±37.17** 511.16±31.00**
100 510.53±24.39** 493.44±32.67**
200 447.93±4 .43** 64.36±42.56**
注:与假手术组比较,#P<0.01
4 讨论
大脑中动脉(MCA)是临床上脑缺血及脑梗死的易患部位,
在脑梗死患者中,大脑中动脉主干分布区梗死占 82.2%,其中
70%有明显的栓子,所以对大脑中动脉主干闭塞(MCAO)的研究
在脑血管病的研究中占有极其重要的地位[3]。我们采用线栓
法制作病灶性脑缺血模型,较好地模拟了临床缺血性脑血管
病的病理过程,能较好地评价药物的抗脑缺血作用。
竹节参主产于云南、四川、陕西等地,仅在当地民间作为
药用治疗心脑血管疾病。但早在清代《本草纲目拾遗》中即
载有昭参,谓:“浙产台温山中。出一种竹节三七,色白如僵蚕,
每条上有凹痕如,云此种血症良药”。本实验在MCAO模型上观
察到,竹节参总皂苷200、100、50 mg/kg组的神经功能缺损
评分均显著低于同时段模型组(P<0.01);模型组动物在脑缺
血48 h内大部分死亡,而竹节参总皂苷200、100、50 mg/kg
组死亡率均明显降低(P<0.01)。
脑组织内含有丰富的酶,脑组织缺血缺氧时,各种氧依赖
酶的活性也随之发生变化。LDH大量存在于神经细胞的胞浆
和线粒体中,当脑缺血引起细胞损伤后,这些酶即可释放到细
胞间隙,再扩散入脑脊液,通过受损的血脑屏障进入血液,使
脑脊液和血清中酶活性迅速升高[4]。因此,可通过动态测定血
清 LDH含量的变化了解神经细胞损伤程度,判定是否存在梗
死灶的不断扩大,梗死是否进行性加重,并可通过检测LDH的
变化来判断药物疗效。实验结果显示,在缺血24、48 h两个
时段,模型组LDH的活性均显著高于假手术组(P<0.01),竹节
参总皂苷200、100、50 mg/kg组明显降低MCAO模型组大鼠
同时段血清LDH含量(P<0.01)。
上述研究表明,竹节参总皂苷对脑缺血损伤可产生很好
的保护作用。此作用可能与其保护自由基清除系统的能力,
减轻脂质过氧化反应及有害代谢产物对脑细胞膜的损害有
关。一般认为,缺血性脑损伤的重要病理生理机制包括能量衰
竭、酸中毒、细胞离子失衡、细胞内钙增加、兴奋性毒性以
及自由基损伤等多个损伤机制。竹节参总皂苷对脑缺血的保
护作用及可能的作用环节尚有待于进一步研究。
参考文献:
[1] Longa EZ, Weistein PR, Carlson S, et a . Reversible middle
cerebral artery occlusion w thout craniectomy in rats[J].
Stroke,1989,20:84.
[2] Bederson JB, Pitts LH, Tsuji M, et al. Rat middle cerebral
artery occlusion:Evaluation of the model and development of
neurologic examination[J]. Stroke,1986,17:472-476.
[3] Tsuchidate R. Regional cerebral blood flow during and after
2 hour middle cerebral artery occlusion in the rat[J]. cere
Blood Flow Metab,1997,17:1066-1073.
[4] Bell RD, Alexander GM, Nguyen T, et al. Quantification of
cerebral infarct size by creatine kinase BB isoenzyme[J].
Stroke,1986,17:259.
(收稿日期:2004-07-05)