全 文 ：天山花楸总氰苷的提取工艺研究＊
郭　静＊＊, 常军民＊＊＊, 张晓玲
(新疆医科大学药学院 ,新疆　乌鲁木齐　830011)
摘要:目的:研究天山花楸总氰苷的提取工艺。方法:采用正交设计法 , 选取总氰苷的提取率为考察指标 , 对
提取方法 、乙醇浓度 、提取时间及料液比 4 个因素选用 L9(34)正交进行考察。结果:乙醇浓度 、提取时间 、料液比
对天山花楸有效部位的提取均有影响 ,确定最佳提取工艺为回流提取 ,乙醇浓度 50%、提取时间为 1 h、料液比为 1
∶10。结论:该提取工艺简单 、合理 、可行 ,为研究天山花楸的氰苷类成分提供基础。
关键词:天山花楸;总氰苷;正交设计
中图分类号:R93;R965.2　　文献标识码:A　　文章编号:1009-5551(2009)04-0389-02
Study on the extraction of the total cyanogen glucoside of
Sorbus tianschanica Rupr
GUO Jing , CHANGJun-Min , ZHANGXiao-Ling
(College of Pharmacy , X inj iang Med ical University , Urumqi 830011 , China)
Abstract:Objective:To study on the ex t raction of the to tal cyanogen g lucoside of Sorbus tianschanica Ru-
per.Methods:The o rthogonal design was used to select the total cyanogen g lucoside ex t ract ion rate fo r the
inspection target.Four factors w ere studied in this experiment , including the method of ex t raction , the
concentration o f e thano l , the ex traction time and the ration of liquid to solid material.Results:The opti-
mum ex traction technolog y w as as follow s:circumfiuence , the concentration of ethanol w as at 50%, the
time of ex t raction was 1 h and the ration of solid material to liquid w as 1∶10.Conclusion:The ext raction
method is appropriate , simple , feasible and it pro vides the foundation of studying the cyanogen gluco side
compounds of Sorbus t ianschanica Ruper.
Key words:Sorbus tianschanica Rupe r;the total cy anogen gluco side;the o rthogonal design
　　蔷薇科(Rosacea)植物天山花楸 (Sorbus
t ianschanica Rupr),落叶灌木或小乔木 , 主要分布
在新疆 、青海 、甘肃等地 ,为维吾尔和哈萨克族民间
常用药物。1980 年载入新疆药品标准 。民间常以
果实 、嫩枝叶及茎皮入药 。具有清肺止咳 、补脾生津
的功效[ 1] 。天山花楸内含黄酮类化合物 、绿原酸 、花
青素 、双联苯酚 、类山梨酸 、生氰苷等[ 2] 。药理试验
显示 ,天山花楸枝叶兼有止咳 、平喘 、强心等多种药
理功效 ,并且毒性很低 。陈坚等[ 3] 研究发现天山花
楸中有效成分主要为黄酮类及氰苷类化合物 ,开丽
曼等[ 4] 已从天山花楸中分离并鉴定出苦杏仁苷。但
目前对其氰苷类化合物提取工艺的报道较少 。为提
高氰苷类化合物的利用率 ,本文采用正交设计法 ,选
取总氰苷的提取率为考察指标 ,对提取方法 、乙醇浓
度 、提取时间及料液比 4个因素选用 L9(34)正交进
行考察[ 5] 。通过实验对天山花楸叶中的有效成分氰
苷类化合物提取工艺进行优选 ,以期对天山花楸的
开发利用提供参考 。
1　材料与方法
1.1　实验原料　天山花楸:于 2007 年 8 月采自新
疆呼图壁林场 ,经新疆医科大学药学院生药学教研
室帕丽达教授鉴定为 Sorbus t ianschanica Ruper.
的嫩枝叶。
1.2　主要试剂及仪器 　乙醇 、氰化钠 、硼砂 、硫酸
铜 、钙黄绿素 ,其规格均为分析纯;水为蒸馏水。
UV-2550型紫外分光光度计(日本岛津), RF-5301
型荧光分光光度计(日本岛津),恒温水浴锅 ,旋转蒸
发仪 ,循环水式多用真空泵 。
1.3　实验方法
1.3.1　供试品溶液的制备　精密称取天山花楸干
枝叶5.0 g ,置圆底烧瓶中 ,选取以下 4个因素:提取
方法 、提取溶剂 、提取时间 、料液比 ,每个因素取 3个
水平 ,按照正交实验 L9(34)设计提取方法 ,提取 2
次 ,合并提取液 ,浓缩 ,此为供试品溶液(表 1)。
389新疆医科大学学报　JOURNAL OF XINJIANG MEDICAL UNIVERSITY　2009 Apr., 32(4)
＊
＊＊
＊＊＊
基金项目:新疆维吾尔自治区高校科研计划项目(编号:XJEDU2005I19)
作者简介:郭　静(1979-),女 ,硕士研究生 ,研究方向:天然药物分析。
通讯作者:常军民 ,男 ,副教授 ,研究方向:天然药物研究 , E-mai l:cjm cjn2471@yahoo.com.cn。
1.3.2　检测波长的选择　通过扫描钙黄绿素溶液
(2.0×10-6 mo l/L)的荧光光谱 , 确定激发波长为
489 nm ,发射波长为 508 nm 。
表 1　因素水平表
水平 因素
A 提取方法 B乙醇浓度(%) C时间(h) D料液比(W/ V)
1 超声提取 50 0.5 1∶8
2 回流提取 60 1.0 1∶10
3 索氏提取 70 1.5 1∶12
　　注:索氏提取在 1、2、3水平时间分别为1.5 、2.0 、2.5 h
1.3.3 　线性关系和精密度考察 　分别精密量取
2.12×10-5 mol/ L CN-标准溶液 0.1 、0.2 、0.3 、0.4
和 0.5 m l ,置于 25 m l量瓶中 ,加硼砂标准缓冲液
(pH 9.18)2.5 m l ,钙黄绿素标准液(2.0 ×10-6
mol/L)1.0 ml及 Cu2+(1.0×10-6mol/L)溶液 2.5
ml ,用水稀释到刻度 ,振荡 25 min ,在λ激发=489
nm ,λ检测=508 nm 处测定荧光强度[ 6] 。以荧光强
为纵坐标 ,浓度为横坐标 ,计算回归方程为:F -F 0
=2.091 5 lnt+6.105 5 , r =0.999 8(n =5)。CN-
浓度在 4.24 ～ 21.2 ng/ml范围呈良好的线性关系 。
平行取 5 份样品进行精密度试验 ,同法测定 F 值 ,
其 RSD值为 2.3%,符合精密度试验要求。
1.3.4　稳定性及加样回收率实验　取 CN-标准溶
液 ,按 1.3.3 操作 ,每隔 0.5 h 测定其荧光强度 ,
RSD值为 1.8%,在 2 h 内样品稳定.精密量取已知
总氰苷含量的天山花楸供试品溶液 3份 ,分别精密
加入 CN-标准溶液适量 ,按 1.3.3项下操作 ,平均回
收率为 99.0%, RSD值为 2.0%。
1.3.5　正交实验测定天山花楸叶中总氰苷的提取
率　精密称取花楸干枝叶 5.0 g 和量取按照正交试
验表设计试验所制备的供试品溶液 ,分别置凯氏烧
瓶中 ,加水 50 ml ,立即密闭 ,静置 2 h ,用水蒸气蒸
馏法收集馏液 ,导入 10 m l水和 2 m l氨试液配成的
吸收液中 ,在冰浴收集馏出液 75 ～ 80 m l ,加水定容
到 100 ml ,取 1 ml按 1.3.3 项下操作 ,测得叶子及
供试品溶液总氰苷的含量 ,计算得总氰苷的提取率 ,
结果见表 2 ,方差分析结果见表 3。
表 2　正交实验设计及结果
实验号 A B C D 总氰苷提取(%)
1 1 1 1 1 60.7
2 1 2 2 2 90.1
3 1 3 3 3 39.9
4 2 1 2 3 93.7
5 2 2 3 1 70.8
6 2 3 1 2 42.1
7 3 1 3 2 84.6
8 3 2 1 3 59.3
9 3 3 2 1 40.8
均值 1 63.567 79.667 54.033 57.433
均值 2 68.867 73.400 74.867 72.267
均值 3 61.567 40.933 65.100 64.300
极差 7.300 38.734 20.834 14.834
表 3　方差分析表
因素 偏差平方和 ν MS F P
A 85.380 2 42.690 1.000
B 2 593.627 2 1 296.814 30.377 P<0.05
C 651.887 2 325.944 7.635 P>0.05
D 330.647 2 165.324 3.873 P>0.05
　　注:SS误 =SSA , F0.01(2 ,2)=99.0 , F0.05(2 ,2)=19.0
1.3.6　验证实验　为进一步考察优选工艺的可靠
性及稳定性 ,取 3份药材 ,每份5 g ,按上述最佳提取
工艺进行验证试验 ,操作方法同前述 ,进行测定 。
2　结果与分析
通过方差分析表可以得到以下结果:(1)天山花
楸枝叶中总氰苷提取的 4 个因素中 , B因素有显著
影响 , C 和 D因素有一定影响 ,A 因素对其影响不
大 。由方差分析可知各因素对于提取效率的影响依
次为 B>C>D>A ,即乙醇浓度>提取时间>料液
比>提取方法。(2)各因素各水平影响中 ,最佳提取
工艺为 A 2B1C2D 2 ,即枝叶总氰苷的最佳提取工艺
是乙醇浓度为 50%,回流提取 1 h ,料液体积比为
1∶10。验证实验结果:总氰苷的平均提取率为
94.2%,RSD为 1.53%,验证结果与正交实验结果
相近 ,说明该工艺基本稳定 、可行 。
3　讨论
被认为是天山花楸有效成分之一的氰苷类物质
含量较低 ,且不稳定易分解 ,所以在提取分离的过程
中要注意溶剂 、温度 、采摘季节等影响因素 。本实验
采用正交设计法选取总氰苷的提取率为考察指标 ,
对提取方法 、乙醇浓度 、提取时间及料液比 4个因素
选用 L9(34)正交进行考察。实验结果表明 ,天山花
楸总氰苷提取的最佳工艺条件是:用 50%的乙醇为
提取剂 ,以物料比 1∶10回流提取 1 h 。该提取工艺
简单 ,条件易控制 ,提取率高 ,提取溶剂无毒性 ,可用
于大规模生产 ,可为氰苷类化合物的深入研究及进
一步明确天山花楸的化学成分提供科学依据。
参考文献:
[ 1] 　李迪民.天山花楸水提液药理学研究[ J] .中草药 , 1995 , 26(6):
302-304.
[ 2] 　Ryzhova GL , Matasova SA , Bashruov SG.Received dry ex-
t ract f rom fruit s of Siberian mountain ash and study i t s chemi-
cal composit ion[ J] .Chem Plant Raw Mater , 1997 , 2:37-41.
[ 3] 　陈　坚 ,王　岩 ,开丽曼,等.天山花楸原植物 、化学成分及药理
作用实报[ J] .中国中医基础医学杂志 , 2001 , 7(1):45-47.
[ 4] 　开丽曼 ,哈及尼沙·吾甫尔.天山花楸中苦杏仁苷的分离与鉴
定[ J] .新疆医科大学学报 , 2003 , 26(6):604.
[ 5] 　马建红 ,聂继红 ,邢建国.关黄柏提取工艺的优化[ J] .新疆医
科大学学报 , 2006 , 29(4):289-291.
[ 6] 　艾买提江.阿依甫别克 ,开丽曼 ,陈坚 荧光猝灭法测定天山花
楸中总氰苷的含量[ J] .中国民族医药杂志 , 2006 ,(4):5.
[ 收稿日期:2009-02-16]
390 新疆医科大学学报　JOURNAL OF XINJIANG MEDICAL UNIVERSITY　2009 Apr., 32(4)