全 文 ：收稿日期: 2006 - 06 - 02
基金项目:国家自然科学基金课题 ( 30500671)
作者简介:杨敏 ( 1979 - ), 女,河南商丘人, 博士,从事糖尿病肾病中医
药临床和实验研究。
细胞毒性,保护神经细胞; 稳定细胞膜; 抗氧化以及抗
自由基损伤等 [13]。
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黄芪卫矛合剂对糖尿病肾病大鼠血清 LN和 Ô型胶原含量影响
杨 敏 1,张丽芬 1,赵进喜 1, 吕仁和 1,吴爱明 2
( 1. 北京中医药大学东直门医院肾病内分泌科, 北京 100700; 2.北京中医药大学东直门医院内科重点实验室,北京 100700)
摘 要: 目的:观察黄芪卫矛合剂对实验性糖尿病肾病大鼠血清Ô 型胶原和 LN含量的影响。方法: 将雄性 SD大鼠
随机分 4组, 假手术组、模型组、中药组和西药组,后 3组选用左肾摘除及尾静脉注射链脲佐菌素方法造成糖尿病肾病大
鼠模型。中药组应用黄芪卫矛合剂灌胃,西药组予氯沙坦灌胃, 假手术组和模型组予等量纯净水灌胃, 共进行 12周。实
验结束, 检测各组大鼠血清 LN和Ô 型胶原含量。结果: 黄芪卫矛合剂组可降低大鼠血清Ô 型胶原,且优于西药对照组,
两组均能降低 LN含量,无显著差异。结论: 黄芪卫矛合剂能减少肾小球合成和分泌 LN和Ô 型胶原是其防治 DN的作用
机制之一。
关键词: 黄芪卫矛合剂;血清 Ô 型胶原;血清 LN; 糖尿病肾病;大鼠; 实验研究
中图分类号: R285. 6 文献标识码: A 文章编号: 1000 -1719( 2007) 03 - 0373 -02
糖尿病肾病 ( diabetic neph ropathy, DN )是糖尿病
最为严重的微血管并发症之一, 其病理特点是肾小球
基底膜 ( GBM )增厚和以肾小球系膜区为主的细胞外
基质 ( ECM )积聚, 最终导致弥漫性或结节性肾小球硬
化。正常情况下, ECM的合成和降解处于一种动态平
衡中, 其主要基质成分Ô 型胶原和 LN降解减少,将影
响该过程失衡而导致肾小球组织结构的破坏 [1]。本研
究通过观察黄芪卫矛合剂对实验性糖尿病肾病大鼠血
清Ô 型胶原和 LN含量的影响,探讨其疗效和可能机
制,为其临床防治提供依据。
1 实验材料
1. 1 实验动物 选择健康 SD大鼠 55只 ( SSPF /VAF
清洁级 ) ,雄性,体重 180~ 220g, 购于北京维通利华实
验动物公司。
1. 2 实验药物 黄芪卫矛合剂 (北京中医药大学东
直门医院药理基地制备 )黄芪和卫矛各取等量, 黄芪
用 50%乙醇提取 2次,第 1次 8倍量、2h, 第 2次 6倍
量、2h,滤过。卫矛提取按最优水平组合以 12倍量水,
提取 3次,每次 1. 5h,滤过。合并二药提取液,水浴浓
缩成稠膏状,无菌装瓶密封备用。使用时以蒸馏水配
成含生药 2g /mL汁液。氯沙坦片 (商品名为科素亚 ),
默沙东制药有限公司 (批号: H20000371)。
1. 3 实验试剂 链脲佐菌素 ( S treptozotocin, STZ ),
S igma公司 (批号: B69776)。 LN和Ô 型胶原试剂盒皆
购自上海西贝生物制品有限公司 (批号: 20060322 )。
糖化血红蛋白试剂盒,德国 Baye r公司。
1. 4 主要仪器 S igma3K30低温高速离心机: Sigma
公司。VORTEX - 2蜗旋混匀器:江苏麒麟贝尔医用仪
器有限公司。电子恒温水浴箱: 北京长风仪器仪表公
司。721分光光度计:上海第三分析仪器厂。
2 实验方法
2. 1 模型复制 分组及治疗 大鼠经普通饲料适应性
饲养 1周后,先按体重随机分为假手术组 10只和手术
组 45只。假手术组 ( F组 )大鼠在腹腔麻醉状态下, 打
开腹腔,剥离左肾脂肪包膜,关闭腹腔,缝合切口,术后
1周尾静脉注射等体积的缓冲液,仅予纯净水灌胃; 手
术组大鼠行左肾摘除术, 术后 1周尾静脉注射 STZ
35mg /kg(用 0. 1mmol /L枸橼酸缓冲液, pH = 4. 2,
4e ,配制成 2% STZ溶液 ), 72h后, 测空腹血糖 ( FPG )
及尿糖,若达到下列标准者,即认为糖尿病肾病模型成
#373# 辽宁中医杂志 2007年第 34卷第 3期
DOI：10.13192/j.ljtcm.2007.03.121.yangm.079
立: FPG\ 16. 65mmol /L;尿糖强阳性;尿量大于假手术
组的 50%。造模成功大鼠入选实验,随机分为模型组
(M组 )、黄芪卫矛合剂组 ( H组 )和氯沙坦组 ( K组 )。
具体分组如下: M组 15只: 单肾摘除术 +链脲佐菌素
组 (仅予纯净水灌胃 )。H 组 15只: 单肾摘除术 + 链
脲佐菌素组 +黄芪卫矛合剂组 [黄芪卫矛合剂按 20g /
( kg# d)灌胃 ]; K组 15只: 单肾摘除术 +链脲佐菌素
+氯沙坦组 [氯沙坦 16mg ( kg# d)灌胃 ]。每组大鼠
分笼饲养,随意饮水, 食用标准动物饲料,实验共进行
12周。
2. 2 标本采集及检测 取材: 大鼠禁食不禁水 12h,
各组随机选 8只于早 8时经 5%戊巴比妥钠麻醉后股
动脉取血 2mL, 分离血清用于检测。全自动生化分析
仪测血糖,采用德国拜尔公司 DCA2000+糖尿病专用
分析仪及试剂盒测定。 LN和Ô 型胶原采用双抗体夹
心酶联免疫吸附 ( ELISA )法检测。
3 结 果
3. 1 一般状态观察 假手术组大鼠体重增加明显, 状
态良好。各病理组表现典型的 /三多一少0, 可见多
食、多饮、多尿、明显消瘦, 反应迟缓, 毛无光泽,竖毛蜷
卧。观察期间, 模型组死亡 3只, 中药治疗组死亡 2
只,西药对照组死亡 1只。
3. 2 黄芪卫矛合剂对大鼠肾组织空腹血糖的影响
与正常组比较各组糖尿病肾病大鼠血糖 12周末明显
升高 ( P < 0. 05 ), 与模型组比较中药治疗组能明显
降低空腹血糖 ( P < 0. 05),西药对照组虽能一定程度
降低空腹血糖,但下降不明显 (P > 0. 05) ,中药治疗组
与西药对照组比较有显著差异 ( P < 0. 05) , 表明黄
芪卫矛合剂有较好的降血糖作用且优于科素亚, 见表
1。
表 1 各组大鼠空腹血糖糖化血红蛋白含量的比较 ( €x ? s )
组 别 动物数
(只 ) 空腹血糖 (mm ol /L) 糖化血红蛋白 (% )
正 常 组 8 7. 24 ? 2. 03 0. 56 ? 0. 20
模 型 组 8 20. 07 ? 6. 45w 2. 09 ? 0. 25w
中药治疗组 8 13. 23 ? 3. 68Šv 1. 37 ? 0. 25Šv
西药对照组 8 19. 54 ? 4. 72 1. 97 ? 0. 24
注:与正常组比较, w P < 0. 05;与模型组比较, * P < 0. 05;与西
药对照组比较, v P < 0. 05。
3. 3 黄芪卫矛合剂对大鼠肾组织糖化血红蛋白的影
响 与正常组比较各组糖尿病肾病大鼠糖化血红蛋白
12周末明显升高 ( P < 0. 05), 与模型组比较中药治
疗组能明显降低糖化血红蛋白 ( P < 0. 05) , 西药对
照组糖化血红蛋白下降不明显 ( P > 0. 05), 中药治疗
组与西药对照组比较有显著差异 ( P < 0. 05) , 表明
黄芪卫矛合剂有较好的降低糖化血红蛋白作用, 并且
优于科素亚,见表 1。
3. 4 黄芪卫矛合剂对大鼠肾组织Ô 型胶原的影响
治疗第 12周末,模型组肾组织的Ô 型胶原含量较正常
组明显升高 ( P < 0. 05); 中药治疗组和西药对照组
能明显降低Ô 型胶原含量, 有显著差异 (与模型组相
比 P < 0. 05); 中药治疗组优于西药对照组, 2组间比
较有显著性差异 ( P < 0. 05) ,见表 2。
表 2 各组大鼠 Ô 胶原 LN含量的比较 ( €x ? s )
组 别 动物数
(只 ) Ô 胶原 ( ng /mL) LN ( ng /m L)
正 常 组 8 66. 69 ? 22. 31 117. 80 ? 38. 03
模 型 组 8 149. 88 ? 35. 66w 274. 20 ? 74. 23w
中药治疗组 8 94. 02 ? 24. 89Šv 178. 30 ? 57. 06Š
西药对照组 8 121. 36 ? 21. 08Š 189. 43 ? 56. 38Š
注:与正常组比较, w P < 0. 05;与模型组比较, * P < 0. 05;与西
药对照组比较, v P < 0. 05。
3. 5 黄芪卫矛合剂对大鼠肾组织 LN的影响 治疗
第 12周末, 模型组肾组织的 LN含量较正常组明显升
高 ( P < 0. 05),而中药治疗组和西药对照组皆能明显
降低造模后 LN含量的升高 (与模型组相比 P <
0. 05),但二组相比无显著差异 ( P > 0. 05) ,见表 2。
4 讨 论
DN是糖尿病全身微血管病变的肾脏表现, 病理
特点是肾小球基底膜增厚和以肾小球系膜区为主的细
胞外基质积聚。 LN和Ô 型胶原都是正常肾小球基底
膜和 ECM的重要组成成份, LN属结构性糖蛋白, Ô 型
胶原是机体胶原蛋白的非纤维状形式, 目前认为二者
合成增加和 (或 )降解减少是 DN发生和发展的重要因
素。有研究发现肾纤维化发生时由于肾小管细胞萎
缩、肾小管基底膜增厚,肾小管细胞向成纤维细胞转化
或者成纤维细胞大量增生和过度激活 [2 ],大量合成和
分泌胶原、LN等间质成份, 从而血清中的间质成份含
量明显高于正常人 [3 ]。有研究提示糖尿病时尿Ô 型胶
原在尿蛋白尚正常时就已升高, 血清 LN和Ô C与尿
微量白蛋白一样可作为诊断糖尿病肾病的早期指标之
一 [4 ]。关于 DM血清Ô C增高的机制目前尚不清楚,
可能由于高浓度的葡萄糖可刺激细胞外基质蛋白质
(包括Ô C )堆积,使其合成速度大于降解速度, 从而引
起肾小球系膜细胞的病理改变 [5]。
黄芪卫矛合剂针对糖尿病肾病 /虚、瘀、毒0的病
机特点,遵循 /益气扶正,消癥散积0之法而设立, 是国
家 /九五0和 /十五0科技攻关课题的核心用药。糖尿
病肾病属于中医学/消渴病0消瘅期的 /肾消病0,著名
专家吕仁和教授称之为消渴病肾病, 认为其实质上是
典型的络脉病变, /血气逆流0、/血脉不活0, 痰热郁瘀
互结,阻于络脉形成/微型癥瘕0。其病理特征类似于
肾脏细胞外基质增多, 胶原降解减少等。卫矛又称鬼
箭羽,功善化瘀消癥散积。黄芪力专于补气升阳、扶正
补虚。二药一气一血, 相使为用。现代药理研究表明
黄芪具有降低血糖和Ô 型胶原水平和改善糖尿病肾脏
的病理损害等多方面作用 [6]。卫矛能有效降糖、调血
脂、调免疫等 [7 ]。
本研究结果显示: 糖尿病肾病大鼠血清 LN和Ô
型胶原的合成和分泌明显增多, 揭示了 DN大鼠肾脏
受到一定程度损害。黄芪卫矛合剂组和科素亚能明显
降低空腹血糖和糖化血红蛋白, 黄芪卫矛合剂组更优
于科素亚; 在抑制肾小球合成和分泌 LN和Ô 型胶原
方面,两组之间差异不显著。表明黄芪卫矛合剂能减
少肾小球合成和分泌 LN和Ô 型胶原是其防治 DN的
作用机制之一。
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