全 文 ：2014 年 07 月第 37 卷第 4 期 陕 西 中 医 学 院 学 报
July． 2014 Vol． 37 No． 4 Journal of Shaanxi College of Traditional Chinese Medicine ·79·
黄芪卫矛合剂调节糖尿病
肾病大鼠 HGF和 TGF － β1 平衡研究*
张丽芬1＊＊ 吕仁和2 黄文政3 李 伟1
刘文毅1 郭 力1 王 蕊1 姚 燕1 刘兰英1 王 腾1 李娇燕1
( 1．北京中医药大学第三附属医院肾内科，北京 100029;
2．北京中医药大学附属东直门医院肾病科，北京 100700; 3．天津中医药大学第三附属医院肾病科，天津 300193)
摘 要:目的 探讨黄芪卫矛合剂对糖尿病肾病大鼠的干预作用。方法 用单侧肾切除并链脲佐菌素尾静脉
注射建立大鼠糖尿病肾病模型，随机分为假手术组、糖尿病肾病组、糖尿病肾病 +黄芪卫矛合剂组和糖尿病肾病
+氯沙坦钾组。共持续 12 周，蛋白印迹法检测各组大鼠肾组织中肝细胞生长因子( HGF) 和转化生长因子 － β1
( TGF － β1) 蛋白表达。结果 糖尿病肾病模型组 HGF表达减少，TGF － β1 蛋白表达增多，与假手术组比较均有非
常显著性差异( P ＜ 0． 01) ，两治疗组可增加 HGF蛋白表达，降低 TGF － β1 蛋白表达，与模型组比较有显著性或
非常显著性差异( P ＜ 0． 01 或 P ＜ 0． 05) 。结论 黄芪卫矛合剂能够通过增加糖尿病肾病大鼠肾组织中 HGF蛋白
表达，抑制 TGF － β1 蛋白表达，起到防治糖尿病肾病的作用。
关键词:糖尿病肾病; 黄芪卫矛合剂;肝细胞生长因子;转化生长因子 － β1
中图分类号:Ｒ 587． 2 文献标识码:A 文章编号:1002 － 168X(2014)04 － 0079 － 03
The Balance of Diabetic Nephropathy Ｒat HGF and
TGF － β Ｒegulating by Huangqi Weimao Mixture
Zhang Lifen1 Lv Ｒenhe2 Huang Wenzheng1 Li Wen1 Liu wenyi1
Guo Li1 Wang Ｒui1 Yao Yan1 Liu Lanying1 Wang Teng1 Li Jiaoyan1
(1． Department of Nephrology，Affiliated Hospital of Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029;
2． Department of nephropathy，Dong Zhi Men Hospital Affiliated to Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100700;
3． Department of nephropathy，Affiliated Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193)
Abstract:Objective to explore the intervention effect of HQWM mixture on diabetic nephropathy rats． Methods use
unilateral nephrectomy and streptozotocin injected into the tail vein to establish rat model of diabetic nephropathy，random-
ly divided into sham operation group，diabetic nephropathy group，diabetic nephropathy + HQWM mixture group and dia-
betic nephropathy + losartan potassium group． Total for 12 weeks，hepatocyte growth factor in renal tissue of rats in each
group of Western blotting detection (HGF)and transforming growth factor beta 1 (TGF － β 1)protein expression． Ｒe-
sults diabetic nephropathy model group reduced expression of HGF，TGF － β 1 expression increased，compared with the
sham operation groups were very significant difference (P ＜ 0． 01)，two treatment group can increase the expression of
HGF protein，decreased the TGF － β 1 expression，compared with model group，there were significant or very significant
difference (P ＜ 0． 01 or P ＜ 0． 05)． Conclusion HQWM mixture can increase the expression of HGF in renal tissue of
diabetic nephropathy rats，inhibit the expression of TGF － β 1 expression，contributes to the prevention and treatment of
diabetic nephropathy．
Keywords:diabetic nephropathy;HQWM mixture;hepatocyte growth factor;transforming growth factor － β1
在糖尿病肾病发病机制中细胞因子的作用是
很重要的一方面。HGF和 TGF － β1 是细胞增殖和
细胞外基质增多的主要调节因子，而且作用相
反［1］。HGF可促进肾小球肾炎动物毛细血管和毛
＊
＊＊
基金项目:国家自然科学基金青年基金项目(30500671)
通迅作者:张丽芬，E － mail:ZLF13601056119@ 163． com
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细血管内皮细胞再生而加速受损组织修复［2］，HGF
在高糖状况或正常血糖状况下都能抑制 TGF － β1
产生和系膜细胞增殖［3 － 4］，促使胰腺 beta 细胞增
殖，从而维持胰岛素产生和血清胰岛素含量而降低
血糖［5］。本研究主要观察黄芪卫矛合剂对糖尿病
肾病 HGF和 TGF － β表达的调节作用。
1 材料与方法
1． 1 实验动物 选用健康 SD 大鼠 60 只，SSPF /
VAF清洁级，雄性，体重 180 ～ 220 g，动物合格证
号:SCXK(京)2002 － 0003，由北京维通利华实验动
物公司提供。
1． 2 药物制备 黄芪(Astragalus membranaceus
(Fisch．)Bunge)按中国 2000 年版药典鉴定，卫矛
(Euonymus alatus (Thunb．)Sieb)按北京市药品标
准鉴定，购自北京同仁堂饮片有限责任公司。黄芪
和卫矛各取等量，黄芪用 50%乙醇提取 2 次，第 1
次 8 倍量，持续 2 h;第 2 次 6 倍量，持续 2 h，滤过。
卫矛提取按最优水平组合以 12 倍量水，提取 3 次，
每次 1． 5 h，滤过。合并二药提取液，水浴浓缩成稠
膏状，无菌装瓶密封备用。使用时以蒸馏水配成含
生药 2 g /mL汁液。
氯沙坦钾片，默沙东制药有限公司，批号
H20000371。使用时以生理盐水配成 0． 2 %的溶液。
1． 3 实验试剂和仪器 链脲佐菌素(Streptozoto-
cin，STZ，Sigma 公司，批号:B69776)。HGF 抗体
(SANTA CＲUZ产品，编号 SC － 1358);TGF － β 抗
体(CST 产品，编号:CST － 3711);β － actin 抗体
(SANTA CＲUZ产品，编号 SC － 47778)。PVDF 膜
(Dupont，美国);电泳仪(DYY －Ⅲ8，北京六一仪器
厂)，半干式电转移仪(Pharmacia Biotech，瑞典)。
1． 4 模型复制、分组及治疗 大鼠经普通饲料适
应性饲养 1 W后，随机抽取 10 只作为假手术组，大
鼠在腹腔麻醉状态下，打开腹腔，剥离左肾脂肪包
膜，关闭腹腔，缝合切口。余 55 只大鼠行左肾摘除
术，术后 1 周尾静脉注射 STZ 35 mg /kg －1 (用
0． 1 mmoL /L －1枸橼酸缓冲液，pH = 4． 2，4℃，配制
成 2 % STZ溶液 )，72 h后，测空腹血糖(FPG)及尿
糖，以 FPG≥16． 65 mmoL·L －1、尿糖强阳性、尿量
大于假手术组 50 %者为模型制备成功。按 Mogens
分期法，符合糖尿病肾病模型Ⅲ期［4］。选取造模成
功大鼠 45 只入选实验，随机分为模型组 15 只，给
予蒸馏水每日 10 mL·kg －1灌胃;黄芪卫矛合剂组
15 只，黄芪卫矛合剂每日 20 mL·kg －1灌胃(按成
人临床剂量的 20 倍计算);氯沙坦组 15 只，氯沙
坦 16 mg·kg －1灌胃(按成人临床剂量的 20 倍计
算)。假手术组术后 1 周尾静脉注射等体积的缓冲
液，给予蒸馏水每日 10 mL·kg －1灌胃。均给药 12
周，给药期间每组大鼠分笼饲养，随意饮水，食用
标准动物饲料。
1． 5 标本采集及检测 在戊巴比妥钠麻醉大鼠
后，迅速剖腹取出右肾，剥离肾包膜，肾组织自肾门
切成两片，剪成 2 － 3 块放入进口冷冻管内，并放入
液氮中迅速冷冻。用 Western blot 方法测定 HGF
和 TGF － β1 表达量。以 β － actin 为参照，取 HGF
和 TGF － β1 蛋白条带的积分光密度值(IOD值)与
β － actin 的蛋白条带的 IOD 值比值，测定 HGF 和
TGF － β1 蛋白的相对表达量。
1． 6 统计学分析方法 实验数据以平均数 ±标准
差(x ± s)表示，用 One － Way ANOVA(单因素方
差分析)，用 Bonferroni 检验分析，检验显著性水平
设定为 P ＜ 0． 05。
2 结果
2． 1 Western blot方法检测 HGF和 TGF － β1 结果
HGF蛋白在糖尿病肾病大鼠肾组织中表达明显
降低，与假手术组比较有非常显著性差异
(P ＜ 0． 01)，而 TGF － β1 在糖尿病肾病肾组织中
蛋白表达明显升高，与糖尿病肾病模型组比较有非
常显著性差异(P ＜ 0． 01)，而黄芪卫矛合剂和氯
沙坦钾治疗后，HGF 在肾组织中的蛋白表达均有
明显增多，TGF － β1 蛋白表达减少，与模型组比较
有非常显著性或显著性差异 (P ＜ 0． 01 或
P ＜ 0． 05)。见图 1、图 2、表 1。
图 1 肾组织 HGF蛋白印迹及含量示意图
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图 2 TGFβ1 蛋白印迹及含量示意图
表 1 实验各组肾组织 HGF和 TGF － β1 蛋白表达 ( x ± s )
n HGF TGF － β1
正常组 8 3． 478 ± 0． 574 0． 896 ± 0． 185
糖尿病肾病组 8 1． 641 ± 0． 613＊＊ 2． 302 ± 0． 327＊＊
糖尿病肾病 +黄芪卫矛合剂组 8 2． 583 ± 0． 295＊△△ 1． 757 ± 0． 221＊△△
糖尿病肾病 +氯沙坦钾组 8 2． 104 ± 0． 234＊△ 1． 478 ± 0． 285△△
与假手术组比较: ＊＊P ＜ 0． 01;与非治疗组比较 △△ P ＜ 0． 01，* P ＜ 0． 05
图 1 和图 2 蛋白印迹法测糖尿病肾病大鼠
HGF和 TGFβ1 表达总蛋白上样量 50μg，应用抗
HGF抗体、抗 TGF － β1 抗体测定相应蛋白水平，
Actin检测确定每组总蛋白上样量均等。
3 讨论
HGF是糖尿病肾病的肾组织一种良性因子，
可刺激基质的降解，减轻肾小球硬化和间质纤维
化，改善肾功能。且 HGF能诱导和刺激血管新生，
可能是一种抗凋亡因子。HGF 参与了糖尿病肾病
肾组织的修复和再生过程［6］，检测 HGF 对评估糖
尿病肾病的病理变化有重要的临床意义［7］。而
TGF － β1 是公认的致纤维化因子，也是早期参与
介导糖尿病肾病发生的重要细胞因子。TGF － β1
可促进肾小球细胞增殖、肥大，促进细胞外基质的
合成和积聚，损伤内皮细胞、肾小球基底膜和脏层
上皮细胞，参与糖尿病肾病肾小球硬化的发
生［8 － 9］。武幸福等［6］研究发现，糖尿病患者血清
TGF － β1 水平非常显著地高于正常人组。因此，
如何促进 HGF 生成以抑制 TGF － β1 的表达已成
为糖尿病肾病的防治新思路［10］。Western blot 检
测结果表明糖尿病肾病时肝细胞生长因子表达减
少而转化生长因子 － β表达增多，同样说明了糖尿
病肾病时肾组织的再生受到抑制而促进细胞基质
增多的因子表达增多。黄芪卫矛合剂可促进 HGF
表达而抑制转化生长因子 － β表达，从而从另一方
面起到保护肾脏和促进肾组织恢复的作用，这可能
是黄芪卫矛合剂防治糖尿病肾病的另一个重要作
用机制。糖尿病肾病与瘀血密切相关［11］，而基层
的增多也与瘀血密切相关，鬼箭羽功专血分，能破
陈瘀败血，散血中癥结;黄芪属药中上品，甘微温，
功能补气升阳，益卫固表，利水消肿，托毒生肌［1］;
研究表明是改善糖尿病肾病尿蛋白和血肌酐的有
效中药［12］，本研究表明了黄芪与卫矛配伍科学性
和有效性。黄芪卫矛合剂正如我们所推论的那样
有很好治疗糖尿病肾病的作用。
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( 收稿日期: 2013 － 10 － 15 编辑:文颖娟)