免费文献传递   相关文献

金娃娃萱草组培苗耐盐性研究



全 文 :櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄
系诱导率最高,平均生根 22. 7 条;在 0. 00 ~ 0. 10 mg /L NAA
范围内,随浓度增加根系诱导率升高,根长且粗壮。
3 结论与讨论
本研究利用索邦百合的鳞茎为外植体诱导愈伤,确定了索
邦百合鳞茎诱导愈伤培养基为 1 /2MS + 0. 1 mg /L 2,4 - D,诱
导率为 66. 67%;最佳消毒方法为 75%乙醇 30 s + 0. 1%HgCl2
15 min,污染率仅为 30. 00%;最佳再生培养基为 1 /2MS +
2. 0 mg /L 2,4 - D,平均再生苗数为 10. 3 株且分化时间短;再
生苗最佳生根培养基为 B5 + 0. 10 mg /L NAA,平均生根数为
22. 7 条,颜色翠绿,根长均匀,大于 2 cm。
东方百合“索邦”是百合科百合属多年生球根类花卉,花
大而美,粉色艳丽,叶片长椭圆形,墨绿互生。索邦百合是目前
市场畅销品种,深受消费者欢迎,繁殖主要靠鳞茎分株进行[2],
繁殖量小且易造成种性退化。目前索邦百合的快繁研究一直
侧重于外植体诱导丛生芽建立再生体系,而对诱导愈伤组织分
化再生植株的研究未见报道。本研究成果为建立索邦百合和
其他优质观赏百合品种快繁技术体系提供技术支持和参考。
参考文献:
[1]梁 云,冯慧颖,徐雷锋,等. “百合”植物名称及原植物考证
[J]. 北京林业大学学报:社会科学版,2013,12(2) :69 - 72.
[2]李卫锋,王 丹,黄海涛. 荷兰百合新品种索尔邦的快繁技术研
究[J]. 北方园艺,2007(9) :191 - 192.
丁 宁,胡 琳,周荣山. 金娃娃萱草组培苗耐盐性研究[J]. 江苏农业科学,2015,43(8) :51 - 52.
doi:10. 15889 / j. issn. 1002 - 1302. 2015. 08. 016
金娃娃萱草组培苗耐盐性研究
丁 宁1,胡 琳1,周荣山2
(1.南通农业职业技术学院,江苏南通 226000;2.如皋金阳现代农业生态园,江苏如皋 226000)
摘要:以金娃娃萱草茎段诱导出的愈伤组织和丛生苗为外植体,在不同 NaCl浓度的培养基上进行增殖和生根培
养,观察盐胁迫对其影响。结果表明:不同盐浓度对外植体根系生长发育的影响大于对地上部分的影响;外植体在盐
胁迫下多代转接后,耐盐性均得到提高,这说明盐胁迫下的多代转接是一条获得优良耐盐突变体的有效途径。
关键词:金娃娃萱草;组培苗;耐盐性
中图分类号:S682. 1 + 90. 4 + 3 文献标志码:A 文章编号:1002 - 1302(2015)08 - 0051 - 02
收稿日期 2014 - 08 - 14
基金项目:江苏省挂县强农富民工程(编号:HL2013035) ;南通沿海
地域盐土绿化问题研究。
作者简介:丁 宁(1981—) ,女,江苏如皋人,硕士,讲师,主要从事园
林设计、观赏植物引种及组培方面的研究。E - mail:weichen822@
vip. sina. com。
金娃娃萱草(Hemerocallis fulva‘Golden Doll’)系百合科萱
草属多年生草本宿生花卉,是萱草人工栽培的园艺品种,其花
期长、花径大、适应性强,在城市绿化中应用广泛[1]。而城市绿
化特别是在沿海城市,土壤盐渍化是绿化中遇到的严重问题,
耐盐植物是解决这一问题的关键,而金娃娃萱草作为适应性强
的地被植物,其耐盐性研究具有重大的意义,是解决盐渍化土
壤绿化的有效途径之一。采用常规育种方法培育耐盐植物,在
短期内不易获得成效。近年来植物组织快繁技术的发展为培
育耐盐植物提供了一个新的途径[2 -3],特别是把愈伤组织转在
加有高浓度盐分的培养基上培养,有可能筛选出耐盐的细胞
系[4 -5]。因此,研究金娃娃萱草对环境胁迫的响应通过组培快
繁技术则更为精细、更具可控性。本研究以金娃娃萱草为试验
材料,研究了盐胁迫对其组培快繁效果的影响。
1 材料与方法
1. 1 外植体来源
本试验采用金娃娃萱草的茎段为外植体诱导愈伤组织,
再分化出丛生苗,进而诱导生根,驯化移栽。盐胁迫主要以愈
伤组织和分化出的丛生苗为试验材料,研究盐胁迫对金娃娃
萱草的分化增殖和生根阶段的影响。
1. 2 试验方法
1. 2. 1 不同盐浓度对金娃娃萱草增殖培养的影响 将愈伤
组织接种到分化增殖培养基,增殖扩繁培养 30 d(初代培养)
后,转接至同样培养基上,增殖扩繁 3 代(继代培养)后分别
统计成活率和增殖系数,测量苗高。
1. 2. 2 不同盐浓度对金娃娃萱草生根培养的影响 将
30 mmol /L NaCl胁迫下金娃娃萱草愈伤组织分化出的丛生苗
接种至生根培养基,生根培养 30 d 后,统计成活率、生根率、
生根数量,测量苗高等生长量指标。成活率、生根率、增殖系
数分别按下面的公式计算:
成活率 =成活外植体个数 /接种外植体个数 × 100%;
生根率 =生根外植体个数 /接种外植体个数 × 100%;
增殖系数 =新增丛生苗(高度 > 0. 5 cm)数 /所接种外植
体个数 × 100%。
经过多次试验对比,金娃娃萱草的组织培养已得出各阶
段最佳培养基配方,分别为分化增殖培养基:MS + 1. 5 mg /L
6 - BA +0. 2 mg /L IBA;生根培养基:1 /2MS + 0. 5 mg /L IBA,
2. 5%蔗糖,6 g /L 琼脂,pH 值为 5. 8[6]。在培养基中加入
NaCl,浓度设 3 种处理:30、60、90 mmol /L,并设 1 组对照
—15—江苏农业科学 2015 年第 43 卷第 8 期
(NaCl浓度为 0 mmol /L)。共计 4 种盐处理(包括对照)、2
个阶段,每瓶接种 5 个外植体,每组 10 瓶,3 次重复。组培室
培养条件:温度 (25 ± 2)℃,光照时间 12 ~ 14 h /d,相对湿
度(80 ± 2)%。
2 结果与分析
2. 1 不同盐浓度对金娃娃萱草愈伤组织初代培养效果的影响
培养 30 d后,4 个处理的愈伤组织均有不同程度的增殖
和分化,但差距较大。试验结果(表 1)显示,30 mmol /L NaCl
胁迫下,金娃娃萱草愈伤组织初代培养中成活率、增殖系数、
苗高都呈下降趋势,与对照相比分别降低了 8. 0 百分点、0. 9
百分点、0. 4 cm,但与对照差异不显著;60、90 mmol /L NaCl 胁
迫下,与对照相比,成活率分别下降 20 百分点、34 百分点,增
殖系数分别下降 2. 1 百分点、3. 7 百分点,苗高分别下降 1. 0、
2. 0 cm,并与对照都差异显著。总体来看,随着 NaCl 浓度升
高,金娃娃萱草的愈伤组织有变小的趋势。
表 1 不同盐浓度对金娃娃萱草愈伤组织初代培养效果的影响
NaCl浓度
(mmol /L)
成活率
(%)
增殖系数
(%)
苗高度
(cm)
0(对照) 67. 3 ± 8. 1a 5. 4 ± 0. 4a 3. 1 ± 0. 2a
30 59. 3 ± 3. 1a 4. 5 ± 0. 5a 2. 7 ± 0. 3a
60 47. 3 ± 7. 0b 3. 3 ± 0. 6b 2. 1 ± 0. 2b
90 33. 3 ± 5. 1b 1. 7 ± 0. 2c 1. 1 ± 0. 3c
注:表中数据为同一处理 3 次重复的平均值 ±标准差;同列数据
后标有不同小写字母表示差异显著(P < 0. 05)。下表同。
2. 2 不同盐浓度对金娃娃萱草愈伤组织继代培养效果的影响
从表 2 数据得知,愈伤组织的成活率在不同浓度 NaCl 条
件下的差异与初代培养阶段相似,总体呈下降趋势,但只在
90 mmol /L NaCl 胁迫下与对照差异显著。增殖系数在 30、
60 mmol /L NaCl胁迫下均与对照差异不显著。苗高在不同浓
度 NaCl 条件下与初代培养时相比有所减小,30、60 mmol /L
NaCl胁迫下与对照无显著差异。结果表明,经多代转接后材
料的耐盐性可以提高。
表 2 不同盐浓度对金娃娃萱草愈伤组织继代培养效果的影响
NaCl浓度
(mmol /L)
成活率
(%)
增殖系数
(%)
苗高度
(cm)
0(对照) 75. 3 ± 5. 0a 6. 2 ± 0. 3a 4. 1 ± 0. 3a
30 71. 3 ± 6. 4a 5. 1 ± 0. 4a 4. 0 ± 0. 2a
60 63. 3 ± 7. 0a 4. 5 ± 0. 4ab 3. 6 ± 0. 2a
90 50. 1 ± 4. 2b 3. 3 ± 0. 3b 2. 4 ± 0. 5b
2. 3 不同盐浓度对金娃娃萱草生根培养效果的影响
由表 3 数据得知,在不同浓度 NaCl 的处理下,金娃娃萱
草的成活率都较高,分别为 86. 7%、82. 3%、77. 0%、71. 3%,处
理之间均差异不显著。经多代转接后材料的耐盐性可以提高,
这一观点得到了再次验证。生根率、生根数量在 60. 90 mmol /L
NaCl胁迫下与对照差异显著,苗高则在 90 mmol /L NaCl胁迫
下与对照差异显著。从金娃娃萱草生根培养中诸指标的影响
特点可以看出,不同盐浓度对根系生长发育的影响大于对地
上部分的影响。
表3 不同盐浓度对金娃娃萱草生根培养效果的影响(丛生苗经盐胁迫)
NaCl浓度
(mmol /L)
成活率
(%)
生根率
(%)
生根数量
(条 /株)
苗高度
(cm)
0(对照) 86. 7 ± 7. 0a 78. 7 ± 6. 5a 4. 4 ± 0. 3a 5. 4 ± 0. 5a
30 82. 3 ± 5. 1a 74. 0 ± 4. 0a 3. 9 ± 0. 4a 5. 1 ± 0. 3a
60 77. 0 ± 2. 6a 68. 0 ± 4. 4b 3. 2 ± 0. 4b 4. 6 ± 0. 1a
90 71. 3 ± 5. 0a 60. 3 ± 5. 1c 2. 2 ± 0. 4c 3. 6 ± 0. 3b
2. 4 不同盐浓度下金娃娃萱草组培中经多代转接后苗木耐
盐性的变化
在金娃娃萱草的增殖培养阶段,从初代培养到继代培养,
愈伤组织的成活率、增殖系数、苗高,在 30 mmol /L NaCl 胁迫
下分别提高 12. 0 百分点、0. 6 百分点、1. 3 cm;在 60 mmol /L
NaCl胁迫下分别提高 16. 0 百分点、1. 2 百分点、1. 5 cm;在
90 mmol /L NaCl胁迫下分别提高 16. 8 百分点、1. 6 百分点、
1. 3 cm。数据表明,不同浓度 NaCl 条件下,各材料继代培养
的成活率、增殖系数和苗高均高于初代培养,并且随着 NaCl
浓度升高,提高的幅度更大。
在金娃娃萱草的生根培养阶段,外植体经盐胁迫后再进
行生根培养,在成活率上比增殖分化阶段得到显著提升,苗高
也只是在 90 mmol /L NaCl 胁迫下与对照差异显著,并且苗高
在不同盐浓度下的差距也比增殖阶段有了一定的缩小,再次
看出盐胁迫对根系生长发育的影响大于对地上部分的影响。
3 结论
金娃娃萱草在盐浓度为 30 mmol /L 时,无论是增殖分化
还是生根阶段,均与对照差异不显著,证明金娃娃萱草是具有
一定耐盐性的。
金娃娃萱草在生根阶段,地上部分的评价指标如成活率
和苗高与对照均无显著差异,除了苗高在盐浓度为90 mmol /L
时与对照差异显著;而根系生长发育的评价指标生根率和生
根数量在盐浓度为 60 mmol /L时与对照差异显著。说明不同
盐浓度对根系生长发育的影响大于对地上部分的影响。
从金娃娃萱草组培不同阶段的数据可知,外植体在盐胁
迫下多代转接后,耐盐性均得到提高。研究表明,组织培养过
程中盐胁迫下的多代转接是一条获得优良耐盐突变体的有效
途径。本试验中金娃娃萱草通过多代转接,耐盐性得到了显
著提高,因此可以通过盐胁迫下的组织培养法为盐渍化土壤
绿化提供耐盐品种。
参考文献:
[1]王汉海,程贯召,杜延飞.大花萱草新品种“金娃娃”的组织培养
和快速繁殖[J]. 植物生理学通讯,2002,38(5) :458.
[2]谭文澄,戴策刚.观赏植物组织培养技术[M]. 北京:中国林业出
版社,1991.
[3]熊 丽,吴丽芳.观赏花卉的组织培养与大规模生产[M]. 北京:
化学工业出版社,2003.
[4]岳 玮,夏光敏,陈惠民,等. 獐毛愈伤组织耐盐性研究及耐盐变异体
的筛选[J]. 山东大学学报:自然科学版,2000,35(3):338 -343.
[5]王海英,孙建设,王旭静,等. 果树耐盐性研究进展[J]. 河北农
业大学学报,2000,23(2) :54 - 58,61.
[6]赵玉芬,储博彦,尹新彦,等. 大花萱草工厂化快繁技术研究[J].
北方园艺,2011(2) :152 - 155.
—25— 江苏农业科学 2015 年第 43 卷第 8 期