全 文 ：·生物技术· 北方园艺２０１２（１６）：９０～９２
作者简介：钟波（１９７３－），男，广西兴业人，本科，农艺师，现主要从
事品种审定及品种推广工作。
收稿日期：２０１２－０５－０８
洋桔梗组培苗生产关键技术研究
钟 波
（广西壮族自治区种子管理总站，广西 南宁５３００２２）
摘 要：以开粉色花的洋桔梗包衣种子为试材，通过叶片诱导、单芽增殖和生根等培养基的
筛选，研究了洋桔梗组培苗生产关键技术。结果表明：叶片诱导的适合培养基为 ＭＳ＋６－ＢＡ ０．４
ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ，每叶盘分化的正常芽为５个左右；单芽诱导的适合培养基为 ＭＳ＋６－ＢＡ
０．２ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．０５ｍｇ／Ｌ，每母株分化的正常芽为５个左右，并有５５％的芽达生根标准；生根的
适合培养基为１／２ＭＳ＋ＩＢＡ １．０ｍｇ／Ｌ，生根率达９５％。
关键词：洋桔梗；组培苗；关键技术
中图分类号：Ｓ ６８１．９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１２）１６－００９０－０３
洋桔梗（Ｅｎｓｔｏｍａ ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｎ）为龙胆科龙胆属观
赏植物，又名草原龙胆，原产于美国、墨西哥。洋桔梗花
姿高雅秀丽，妩媚动人且插花效果好，花朵寿命可达２～
３周，是国际上流行的切花品种，现已成为世界十大切花
之一。洋桔梗的种子细小且价格昂贵，国内种植大多依
赖进口。因此，以离体培养获得种植材料是有效降低生
产成本的措施之一。近年来，对洋桔梗离体培养的研究
也较多，但大多停留在洋桔梗离体培养的某一阶段［１－４］，
没有上升为洋桔梗组培苗规模化生产流程的程度。现
以开粉色花的洋桔梗品种为材料，从获得无菌苗开始，
利用第２代分化苗的叶片和小苗再次增殖，到生根移栽
的全过程进行研究，以期为洋桔梗组培苗规模化生产提
供直接参考依据。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
以开粉色花的洋桔梗包衣种子为材料进行播种获
得无菌苗。
１．２ 试验方法
１．２．１ 无菌苗的获得 用无菌水浸泡种子约３０ｍｉｎ，待
包衣溶解后，把种子移到离心管中，加１０％ ＮａＣｌＯ（次氯
酸钠）并在摇床上摇２０ｍｉｎ。在超净台内用无菌水冲洗
５～６次，每次冲洗时间约１ｍｉｎ，冲洗时反复轻摇离心
管，倾倒时轻敲管壁以使种子沉淀，然后倾出洗液待播。
１．２．２ 叶盘诱导 取诱导第２代苗再转 ＭＳ ２０ｄ的叶
片（已消除激素影响），均切成０．４～０．５ｃｍ２大小的叶盘
背面朝下接表１分化培养基中诱导，３０ｄ后统计结果。
１．２．３ 单芽诱导 取诱导第２代苗并接 ＭＳ壮苗消除
激素影响后的小苗，均为２～３对叶不去顶接表１分化培
养基中诱导，１５ｄ后统计结果。
１．２．４ 生根培养 以高约２ｃｍ的正常分化苗为材料，
诱导生根的培养基为Ｂ１：１／２ＭＳ＋ＩＢＡ ０．５ｍｇ／Ｌ；Ｂ２：
１／２ＭＳ＋ＩＢＡ ０．８ｍｇ／Ｌ；Ｂ３：１／２ＭＳ＋ＩＢＡ １．０ｍｇ／Ｌ，
２０ｄ后统计结果。１／２ＭＳ为大量元素减半，蔗糖
２０ｇ／Ｌ，其它与ＭＳ相同。
１．２．５ 培养条件 培养条件为温度（２６±２）℃，光照强
度２ ０００ｌｘ，光照时间８ｈ／ｄ。
表１ 培养基配方
Ｔａｂｌｅ １ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｄｉｕｍ
培养基
Ｍｅｄｉｕｍ
ＭＳ
ＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
ＩＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
ＮＡＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
蔗糖
Ｓｕｃｒｏｓｅ／％
琼脂
Ａｇａｒ／％
ｐＨ
Ａ１ ＭＳ ０．２ ０．０５ － ３ １ ６
Ａ２ ＭＳ ０．２ ０．１０ － ３ １ ６
Ａ３ ＭＳ ０．４ ０．０５ － ３ １ ６
Ａ４ ＭＳ ０．４ ０．１０ － ３ １ ６
Ａ５ ＭＳ ０．５ － ０．０１ ３ １ ６
Ａ６ ＭＳ ０．３ － － ３ １ ６
２ 结果与分析
２．１ 叶片诱导
叶盘在Ａ１～Ａ６中诱导，１５～２０ｄ时在切口出现愈
伤，并可见有芽点，２５ｄ后芽点长成具有２片叶的不定
芽，３０ｄ时进行统计。由表２可知，叶盘在Ａ４中诱导的效
果最好，平均每叶盘分化的正常芽数为４．７个，正常芽比
率达９８％，且芽点粗壮，叶色浓绿。Ａ５ 为ＢＡ ０．５ｍｇ／Ｌ，
在此培养基中诱导的不定芽多玻璃化，正常芽的比率为
７２％，平均每叶盘正常不定芽数仅为２．６个，表明ＢＡ浓
度高于０．５ｍｇ／Ｌ即出现玻璃化现象。由此可见，Ａ４为
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北方园艺２０１２（１６）：９０～９２ ·生物技术·
较理想的叶盘诱导培养基，并且此叶片来源广泛而稳
定，重复性和可操作性强，是实现稳定、高效洋桔梗组培
苗规模化生产的理想外植体材料。
表２ 培养基Ａ１～Ａ６对洋桔梗叶片诱导的效果
Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ Ａ１～Ａ６ｍｅｄｉｕｍ ｏｎ
ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ Ｅｎｓｔｏｍａ ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｎ
培养基
Ｍｅｄｉｕｍ
叶盘数
Ｔｏｔａｌ ｌｅａｖｅｓ
／个
分化总芽数
Ｔｏｔａｌ ｂｕｂｓ
／个
正常芽数
Ｎｏｒｍａｌ
ｂｕｂｓ／个
平均每叶盘正常芽分化数
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ｂｕｂｓ
ｐｅｒ ｌｅａｖｅｓ／个
正常芽比率
Ｎｏｒｍａｌ ｂｕｂｓ
ｒａｔｅ／％
Ａ１ １０ １４ １４ １．４ １００
Ａ２ １０ １６ １２ １．２ ７５
Ａ３ １０ ２８ ２３ ２．３ ８２
Ａ４ １０ ４８ ４７ ４．７ ９８
Ａ５ １０ ３６ ２６ ２．６ ７２
Ａ６ ７ ０ ０ ０ ０
２．２ 单芽诱导
单芽在Ａ１～Ａ６中诱导，４～６ｄ左右从顶芽算起最
后１对侧芽始萌发，１５ｄ时观察到有些小苗已有２对叶
以上，高１．５～２．０ｃｍ，达到生根标准，１５ｄ时进行统计。
由表３可知，单芽在Ａ１～Ａ６中均能诱导，几乎没有出现
玻璃化现象，能适应的激素范围较广泛，在以上培养基
中平均每株正常苗分化数从３．０６～５．２５倍不等，表现出
较好的组培特性，尤以Ａ１诱导效果最佳，每株的增殖倍
数为５．２５倍，能直接生根的比率达５５％。由于增殖的
母株是没有去顶端优势的植株，不能直接生根的芽应及
时切下接ＭＳ中壮苗。
表３ 培养基Ａ１～Ａ６对洋桔梗单芽诱导的效果
Ｔａｂｌｅ ３ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ Ａ１～Ａ６ｍｅｄｉｕｍ ｏｎ
ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ ｂｕｂ ｏｆ Ｅｎｓｔｏｍａ ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｎ
培养基
Ｍｅｄｉｕｍ
单芽数
Ｓｉｎｇｌｅ
ｂｕｂｓ／个
分化总芽数
Ｔｏｔａｌ ｂｕｂｓ
／个
正常芽数
Ｎｏｒｍａｌ
ｂｕｂｓ／个
正常芽比率
Ｎｏｒｍａｌ ｂｕｂｓ
ｒａｔｅ／％
直接生根芽数
Ｄｉｒｅｃｔ ｒｏｏｔｉｎｇ
ｂｕｂｓ／个
直接生根芽比率
Ｄｉｒｅｃｔ ｒｏｏｔｉｎｇ
ｒａｔｅ／％
Ａ１ １６ ８４ ８４ １００ ４６ ５５
Ａ２ １６ ６９ ６９ １００ ２５ ３６
Ａ３ １６ ６３ ６１ ９６ １２ １９
Ａ４ １６ ６９ ６９ １００ ２７ ３９
Ａ５ １６ ７２ ７２ １００ ３２ ４４
Ａ６ １６ ４７ ４７ １００ １７ ３５
２．３ 生根培养
由表４可知，Ｂ２与Ｂ３生根率均达９０％左右，均可作
为洋桔梗适宜的生根培养基，但从降低成本考虑，Ｂ２就
可以了。
２．４ 移栽
练苗１周后，取出生根苗，洗净基部培养基栽入消
表４ 培养基Ｂ１～Ｂ３对洋桔梗生根的影响
Ｔａｂｌｅ ４ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ Ｂ１～Ｂ３ｍｅｄｉｕｍ ｏｎ ｒｏｏｔｉｎｇ ｏｆ Ｅｎｓｔｏｍａ ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｎ
培养基
Ｍｅｄｉｕｍ
总苗数
Ｔｏｔａｌ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ／株
已生根苗数
Ｒｏｏｔｅｄ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ／株
生根率
Ｒｏｏｔｉｎｇ ｒａｔｅ／％
Ｂ１ ３７ ２９ ７８
Ｂ２ ３７ ３３ ８９
Ｂ３ ３７ ３５ ９５
毒过的蛭石中，盖膜保温１周，掀开膜后每隔５～７ｄ喷１
次营养液，此方法可使生根苗成活率达９５％左右。２５～
３０ｄ后，待根系发育成侧根发达的根团时，淘汰弱小株
后即可移栽定植。
３ 结论与讨论
在ＭＳ＋６－ＢＡ ０．４ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ培养基
中，每叶盘诱导的正常苗数为５株左右。每片叶可切为
６～８个叶盘，以每片叶切为６个叶盘计，１个月后每片叶
的增殖倍数达３０倍左右。并且此叶片来源广泛而稳
定，重复性及可操作性强，可作为实现稳定、高效的洋桔
梗组培苗工厂化生产的理想外植体。虽用叶片作外植
体增殖的倍数大，但在切割外植体时，由于操作时间长
也易造成污染。
单芽在ＭＳ＋６－ＢＡ ０．２ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．０５ｍｇ／Ｌ中
诱导，１５ｄ时统计增殖倍数达５．２５倍，且有５５％的分化
苗可直接生根。把不能直接生根的芽及时切下壮苗，再
把母株接回原诱导培养基中，过１５ｄ后统计仍有３～４
倍的增殖倍数。这样仅有２～３对叶的小苗，１个月后的
增殖倍数达８倍左右。利用单芽诱导增殖，操作相对简
单一些，对降低污染有一定的作用。
在实际操作中发现，生根苗有２条正常根以上，就
能移栽成活，因此，从降低成本考虑，生根培养基为
１／２ＭＳ＋ＩＢＡ ０．８ｍｇ／Ｌ。把生根苗直接移到消毒的蛭
石中，成活率达９５％左右。
以上研究结果所用的材料为第１代继代苗，对外植
体的继代增殖应控制在多少代内，才能避免遗传变异性
机率和种性退化，还需进一步研究。
参考文献
［１］ 张淑娟，刘与明．洋桔梗Ｆ１无菌播种和试管苗的快速繁殖［Ｊ］．亚热
带植物通迅，１９９６，２５（２）：１３－１６．
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［Ｊ］．山东农业大学学报（自然科学版），２００３，３４（４）：４９４－４９８．
［４］ 傅玉兰，杨海燕，姚萍．植物激素在洋桔梗组培快繁中的应用研究
［Ｊ］．安徽农业科学，２００５，３３（１０）：１８４７－１８４８．
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｋｅｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｏｆ Ｅｎｓｔｏｍａ ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｎ
ＺＨＯＮＧ Ｂｏ
（Ｓｅｅｄ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ Ｓｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｕａｎｇｘｉ Ｚｈｕａｎｇ Ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ Ｒｅｇｉｏｎ，Ｎａｎｎｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｘｉ ５３００２２）
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·生物技术· 北方园艺２０１２（１６）：９２～９４
第一作者简介：沙伟（１９６３－），女，博士，教授，博士生导师，现从事植
物学和植物遗传学的教学与科研工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｈｗ１１２９＠１６３．ｎｅｔ．
基金项目：国家自然科学基金资助项目（３１０７０１８０）。
收稿日期：２０１２－０５－２３
毛尖紫萼藓配子体再生体系的建立
沙 伟，崔 巍，张 梅 娟
（齐齐哈尔大学 生命科学与农林学院，黑龙江 齐齐哈尔１６１００６）
摘 要：以消毒试验后所得的毛尖紫萼藓原丝体为材料，通过培养，成功的建立了毛尖紫萼
藓配子体再生体系。结果表明：ＭＳ培养基、低ｐＨ能促进毛尖紫萼藓原丝体褐化；葡萄糖能诱导
出弱小的配子体；激素对毛尖紫萼藓配子体诱导效果不理想；ＮＨ４ＮＯ３浓度为２．５ｇ／Ｌ的Ｐｒａｔ培
养基，适合于毛尖紫萼藓原丝体分化成配子体；将褐化到一定程度的原丝体接种到Ｐｒａｔ培养基
后，２０ｄ可以生长出较理想的配子体。
关键词：毛尖紫萼藓；组织培养；配子体
中图分类号：Ｓ ６０３．６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１２）１６－００９２－０３
毛尖紫萼藓（Ｇｒｉｍｍｉａ ｐｉｌｉｆｅｒａ Ｐ．Ｂｅａｕｖ．Ｐｒｏｄｒ．）为
紫萼藓科（Ｇｒｉｍｍｉａｃｅａｅ）紫萼藓属（Ｇｒｉｍｍｉａ）藓类植物，
植物体粗壮，稀疏成片丛生，高３～４ｃｍ。茎倾立，挺硬，
衡疏叉状分枝，中轴细胞不分化的小型旱生藓类。在我
国南北各省区均有分布，呈现出东亚与北美的间断分
布［１］。毛尖紫萼藓有着特殊的抗旱机制［２］，但对于其抗
旱机制相关的研究并不深入。得到新生的配子体是组
织培养的重要步骤，也是最终目的。通过组织培养可以
去除野外采集材料的杂质，得到纯种的、均一的材料，为
毛尖紫萼藓生理、分子生物学等更深入的研究打下基
础，从而确定植物体中的特殊成分，分析其效用，进一步
开发毛尖紫萼藓的实际应用价值，开发出造福人类的商
业成品。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
毛尖紫萼藓采自黑龙江省五大连池市石龙地区。
１．２ 试验方法
１．２．１ 试材的消毒 将植物体清洗干净，充分复水，预
培养１５ｄ，解剖镜下取茎尖部约５ｍｍ。流水冲洗５ｈ，在
浓度为０．０２５％的升汞溶液旋流振荡消毒１０５ｓ，无菌水
振荡冲洗５～８次。接种在Ｂｅｎｅｃｋ培养基中，得到毛尖
紫萼藓原丝体。
１．２．２ 原丝体培养条件 以改良后的Ｐｒａｔ培养基
（ＮＨ４ＮＯ３浓度从原来的２．５ｇ／Ｌ改为０．５ｇ／Ｌ）为基础
培养基，不添加糖类，琼脂为９ｇ／Ｌ，ｐＨ ５．５，培养温度
２３℃，光照强度３ ０００ｌｘ，光照周期１２ｈ／１２ｈ。
１．２．３ ＭＳ培养基对配子体诱导进行培养 将毛尖紫萼
藓原丝体继代到ＭＳ培养基中，ｐＨ ６．０，培养３０～５０ｄ后，
继代到ｐＨ ５．５的改良的Ｐｒａｔ培养基中，３０ｄ后观察试验
结果。
１．２．４ ｐＨ为４．５～５．０的改良的Ｐｒａｔ培养基对配子体
诱导进行培养 将毛尖紫萼藓原丝体继代到ｐＨ为
４．５～５．０的Ｐｒａｔ培养基中，培养２０ｄ左右，继代到ｐＨ
为５．５的改良的Ｐｒａｔ培养基中，３０ｄ后观察试验结果。
１．２．５ ｐＨ为６．０的ＭＳ＋葡萄糖培养基对配子体诱导
进行培养 将毛尖紫萼藓原丝体继代到ｐＨ为６．０的
ＭＳ＋葡萄糖（３０ｇ／Ｌ）培养基中，３０ｄ后观察试验结果。
１．２．６ 不同激素配比对毛尖紫萼藓配子体诱导 将毛
尖紫萼藓原丝体继代到不同激素配比的Ｐｒａｔ培养基上，
３０ｄ后观察试验结果，不同激素配比及培养基见表１
。
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ ｔｈｅ ｃａｐｓｕｌｅｄ ｏｆ Ｅｎｓｔｏｍａ ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｎ ｗｉｔｈ ｐｉｎｋ ｆｌｏｗｅｒ ａｓ ｔｈｅ ｍａｔｅｒｉａｌ，ｔｈｅ ｋｅｙ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｏｆ
ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｏｆ Ｅｎｓｔｏｍａ ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｎ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ ｍｅｄｉｕｍｓ ｏｆ ｌｅａｖｅｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ，ｓｉｎｇｌｅ ｂｕｂｓ
ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｒｏｏｔｉｎｇ ｗｅｒｅ ｅｌｅｃｔｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｓｕｍｍａｒｉｚｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ
ｔｈａｔ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｍｅｄｉｕｍ ｏｆ ｌｅａｖｅｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｗａｓ ＭＳ＋６－ＢＡ ０．４ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ ａｎｄ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｂｕｂｓ ｅｖｅｒｙ ｌｅａｆ ｗａｓ
５ｉｎ ｉｔ．Ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｍｅｄｉｕｍ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ ｂｕｂｓ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｗａｓ ＭＳ＋６－ＢＡ ０．２ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．０５ｍｇ／Ｌ ａｎｄ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｂｕｂｓ
ｅｖｅｒｙ ｓｉｎｇｌｅ ｂｕｂｓ ｗａｓ ５ｉｎ ｉｔ．Ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｍｅｄｉｕｍ ｏｆ ｒｏｏｔｉｎｇ ｗａｓ １／２ＭＳ＋ＩＢＡ １．０ｍｇ／Ｌ ａｎｄ ｒｏｏｔｉｎｇ ｒａｔｅ ｗａｓ ９５％ｉｎ ｉｔ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｅｎｓｔｏｍａ ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｎ；ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｅｅｄｌｉｎｇ；ｋｅｙ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
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