全 文 ：收稿日期:2014-01-21
基金项目:四川省教育厅创新团队项目(11TD004) ;高等学校博士学科点专项科研基金(新教师类) (20135132120011)
作者简介:周礼仕(1990-) ，男，在读硕士研究生，专业方向:中药及民族药药效物质基础及质量标准研究;Tel:13880024378，E-mail:max-
wellzls@ 163. com。
* 通讯作者:王毓杰，Tel:028-61800160，E-mail:superwangyj@ 126. com。
藏药康定乌头质量标准研究
周礼仕，王毓杰* ，杜蕾蕾，谭 尔，泽翁拥忠，降拥四郎，张 艺
(成都中医药大学民族医药学院，四川 成都 611137)
摘要 目的:建立康定乌头的质量标准。方法:以滇乌头碱、塔拉萨敏为对照品进行康定乌头的薄层鉴别;采
用 HPLC法测定康定乌头中滇乌头碱的含量。对康定乌头水分、总灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物及显微特征
进行检测。结果:康定乌头的显微特征性强;薄层色谱分离度好，斑点清晰;水分为 10. 89% ～ 12. 07%(平均值
11. 48%) ，总灰分为 4. 81% ～ 5. 00%(平均值 4. 83%) ，酸不溶性灰分为 1. 08% ～ 3. 27%(平均值 1. 81%) ;浸出物
为 18. 03% ～ 28. 27%(平均值 20. 46%) ;滇乌头碱的含量为 0. 18% ～ 0. 35%(平均值 0. 23%)。结论:所建方法操
作简单，准确可靠，可用于评价康定乌头的质量。
关键词 康定乌头;质量标准;薄层鉴别;含量测定;滇乌头碱;塔拉萨敏
中图分类号:Ｒ282. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2014)06-0977-04
Stud on Quality Standard for Aconiti Tatsienensis Ｒadix
ZHOU Li-shi，WANG Yu-jie，DU Lei-lei，TAN Er，ZEWENG Yong-zhong，JIANGYONG Si-lang，ZHANG Yi
(College of Ethnomedicine，Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 611137，China)
Abstract Objective:To establish the quality standard for Aconiti Tatsienensis Ｒadix. Methods:TLC was used to detect yunaconi-
tine and talasamine in Aconiti Tatsiensis Ｒadix. HPLC was adopted to determine the content of yunaconitine. Moisture，ash，acid insolu-
ble ash and ethanol soluble extractive were determined according the procedures recorded in the Appendix of Chinese Pharmacopoeia
(2010 edition). The microscopic identification was also carried out. Ｒesults:Aconiti Tatsienensis Ｒadix had obvious microscopic char-
acteristics，and its TLC identification had a good resolution with clear spots. An average content of moisture was 11. 48%，ash was
4. 83%，acid insoluble was 1. 81%，ethanol soluble extractive was 20. 46% and yunaconitine was 0. 23% . Conclusion:The established
standard is acceptable for quality evaluation of Aconiti Tatsienensis Ｒadix.
Key words Aconiti Tatsienensis Ｒadix;Quality Standard;TLC Identification;Assay;Yunaconitine;Talasamine
康定乌头为毛茛科植物康定乌头 Aconitum
tatsienense Finet et Gagnep. 的干燥块根。产于四川
省西部(康定至道孚一带) ，生长于海拔 2 740 ～
3 700 m间山地草坡或山谷灌丛边〔1〕。具有驱寒止
痛、祛风定惊的功效，用于治疗风湿性关节疼痛、跌
打损伤等病症〔2〕。吕光华、陈立书等〔2，3〕研究发现
康定乌头根中主要含有滇乌头碱、塔拉萨敏、乌头
碱、北乌碱、中乌头碱等二萜生物碱类成分。赵启鹏
等〔4〕研究证明康定乌头生品与炮制品均有一定的
抗炎镇痛活性，且药理活性和毒性呈正相关。作为
四川省藏区藏医临床的常用品种，康定乌头祛风止
痛的作用明显，但目前笔者尚未见其质量标准研究
的相关文献报道。为控制该药材质量，确保其临床
用药的安全有效，本实验对康定乌头药材的性状、显
微特征、薄层鉴别、检查(水分、总灰分、酸不溶性灰
分、浸出物)及生物碱含量测定进行研究，旨在为系
统评价康定乌头质量提供科学依据。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 美国 Agilent 1200 型高效液相色谱仪;
CX41 型系统生物显微镜(OLYMPUS) ;ULUP-I-10T
优普超纯水机(成都超纯科技有限公司) ;CQ-250 型
超声波清洗器(上海必能信公司) ;BP211D 1 /10 万
电子天平(德国 Sartorius 公司) ;硅胶 G 薄层板(青
岛海浪化工厂)。
1. 2 试药 滇乌头碱对照品 (批号:MUST-
13031406，质量分数≥98%，供含量测定用)购自成
都曼斯特生物科技有限公司，塔拉萨敏对照品(批
号:120228，质量分数≥98%，供含量测定用)购自北
京世纪奥科生物技术有限公司，使用前置干燥器中
干燥至恒重。乙腈、四氢呋喃为色谱纯(Fisher 公
司) ，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
8 批康定乌头药材于 2013 年 8 月采自四川省
甘孜藏族自治州，经成都中医药大学贾敏如教授鉴
定为康定乌头 Aconitum tatsienense Finet et Gagnep.
·779·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 6 期 2014 年 6 月
的干燥块根，凭证标本保存于成都中医药大学民族
医药学院标本室。药材来源见表 1。
表 1 康定乌头药材样品采集地
样品编号 采集地 海拔 /m
1 康定县雅拉乡三道桥村 2783. 3
2 康定县雅拉乡龙布沟村 3616. 1
3 泸定县下草坪管护站 3460. 9
4 康定县榆林乡雅家梗虫草基地 3820. 2
5 康定县折多塘村毛线沟 3264. 0
6 康定县榆林乡老榆林村 3476. 7
7 康定县榆林乡新榆林村 3034. 7
8 康定县榆林乡小沟口 3469. 3
2 方法与结果
2. 1 性状鉴别 子根粗壮，圆柱形，长 3 ～ 8 cm，直
径 0. 8 ～ 2 cm，表面棕褐色或棕黄色，质硬，断面类
白色或浅灰黄色，6 个椭圆形孔洞维管束辐射状排
列，粉性;母根皱缩，略短，表面棕黑色或黑褐色，有
纵皱纹、点状须根痕和数个瘤状侧根，顶端常有茎残
基及子根痕。气微，味麻。本品剧毒，不宜口尝。
2. 2 显微鉴别
2. 2. 1 块根横切面:呈类圆形，后生皮层 2 ～ 5 列，
细胞较大，排列紧密，无细胞间隙，其间靠近内皮层
处有石细胞散在或 2 ～ 3 个相连;皮层细胞呈多边形
或类圆形，排列疏松，有细胞间隙;韧皮部中筛管群
明显，径向排列;木质部中导管多呈“V”字形排列，
少数为堆状或点状，有时可辨认出其为螺纹导管。
同一块根的横切显微图存在较大差异，大致有 3 种
情况，见图 1、2。
2. 2. 2 粉末:灰白色。淀粉粒甚多，单粒呈长圆形
或卵圆形，复粒少数，由 2 ～ 4 分粒组成，脐点星状或
短缝状，直径 5 ～ 20 μm。导管多为螺纹导管或具缘
纹孔导管，多数破碎。石细胞类长方形，无色或淡黄
色，内表面较平整，少皱褶;长 20 ～ 80 μm。表皮细
胞类长方形，壁薄，排列整齐。见图 3。
图 1 康定乌头块根横切面详图(×100)
1. 后生皮层 2. 石细胞 3. 内皮层 4. 筛管群 5. 韧皮
部 6. 形成层 7. 木质部
图 2 康定乌头块根横切面简图(×40)
1. 后生皮层 2. 石细胞 3. 内皮层 4. 形成层 5. 筛管
群 6. 髓 7. 韧皮部 8. 木质部
图 3 康定乌头粉末图(×400)
1. 导管 2. 石细胞 3. 表皮细胞 4. 淀粉粒
2. 3 TLC鉴别
2. 3. 1 供试品溶液和对照品溶液的制备:取康定
乌头药材粉末(过六号筛)2 g，置具塞锥形瓶中，同
时加乙醚 50 mL 和氨试液 2 mL，冷浸 1 h，时时振
摇，滤过，挥干，残渣加甲醇 1 mL 溶解，作为供试品
溶液。另取滇乌头碱、塔拉萨敏对照品分别加甲醇
制成每 1 mL含 1 mg的溶液，作为对照品溶液。
2. 3. 2 TLC 试验:照薄层色谱法(2010 年版中国药
典一部附录Ⅵ B)试验，吸取对照品溶液与供试品溶
液各 5 μL，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以石油
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醚-丙酮-二乙胺(2∶ 1∶ 0. 1)为展开剂，展开，取出，晾
干，碘蒸气显色，日光下检视。供试品色谱中，在与
对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。本
方法分离效果好，斑点清晰，重复性好。见图 4。
2. 4 检查与浸出物 水分、总灰分、酸不溶性灰分
和浸出物的测定分别参考 2010 年版中国药典一部
附录Ⅸ H水分测定法第一法、Ⅸ K 灰分测定法、Ⅹ
A醇溶性浸出物测定法(50%乙醇，热浸法)进行。
结果见表 2。
2. 5 含量测定
图 4 康定乌头药材样品 TLC图
S1. 滇乌头碱 S2. 塔拉萨敏 1 ～ 8. 1 ～ 8 号样品
表 2 康定乌头水分、灰分、浸出物及滇乌头碱含量测定结果(%)
样品编号 水分 总灰分 酸不溶性灰分 浸出物 滇乌头碱含量
1 11. 81 5. 00 1. 21 28. 27 0. 29
2 12. 07 4. 81 2. 14 19. 72 0. 35
3 11. 86 5. 94 3. 27 16. 96 0. 26
4 11. 28 4. 10 1. 43 17. 17 0. 17
5 11. 60 4. 86 2. 33 26. 63 0. 18
6 11. 17 4. 07 1. 17 18. 72 0. 20
7 10. 89 5. 00 1. 08 18. 03 0. 18
8 11. 19 4. 87 1. 81 18. 16 0. 24
平均值 11. 48 4. 83 1. 81 20. 46 0. 23
2. 5. 1 色谱条件:Wondasil C18-WＲ 色谱柱(4. 6
mm × 250 mm，5 μm) ;以乙腈-四氢呋喃-0. 2%碳酸
氢铵溶液(浓氨水调 pH至 9. 5) (25∶ 15∶ 60)为流动
相〔5〕;流速:1. 0 mL /min;检测波长:260 nm;进样
量:10 μL;柱温:30 ℃。理论板数按滇乌头碱色谱
峰计算不得低于 3 000，结果见图 5。
图 5 滇乌头碱对照品(A)、康定乌头药材样品
(B)和阴性对照(C)溶液 HPLC图
1. 滇乌头碱
2. 5. 2 对照品溶液的制备及线性关系考察:精密
称取滇乌头碱对照品适量，加甲醇制成每 1 mL含滇
乌头碱 0. 504 mg的溶液，作为对照品储备液。将滇
乌头碱储备液依次稀释，得到 5 个不同浓度的滇乌
头碱对照品溶液(0. 2016、0. 1008、0. 0504、0. 0484、
0. 0252 mg /mL) ，HPLC 法测定，进样量 10 μL，以对
照品浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制
标准曲线，得线性回归方程 Y = 1. 307 × 104X －
50. 021，r = 0. 9999。结果表明，滇乌头碱进样浓度
在 0. 0252 ～ 0. 2016 mg /mL之间与峰面积线性关系
良好。
2. 5. 3 供试品溶液的制备:取康定乌头药材样品
粉末(过六号筛)约 1. 0 g，精密称定，置具塞锥形瓶
中，同时加乙醚 50 mL 和氨试液 2 mL，冷浸 1 h，时
时振摇，滤过，挥干，残渣加甲醇适量溶解，转入 25
mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤
液，即得。
2. 5. 4 精密度试验:精密吸取同一浓度对照品溶
液，进样量 10 μL，连续重复进样 6 次，测定峰面积，
ＲSD为 0. 73%。结果表明仪器精密度良好。
2. 5. 5 重复性试验:取同一编号康定乌头药材样
品粉末约 1. 0 g，精密称定，共 6 份，按“2. 5. 3”项下
方法制备供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与
各供试品溶液 10 μL，注入高效液相色谱仪，测得滇
乌头碱含量为 0. 17%，ＲSD 为 1. 9%。结果表明方
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法重复性良好。
2. 5. 6 加样回收率试验:取同一编号康定乌头样
品粉末 9 份(滇乌头碱含量为 0. 17%) ，约 0. 5 g，精
密称定，分别按已知含量的 80%、100%、120% 3 个
水平加入滇乌头碱对照品，再按“2. 5. 3”项下方法
制备供试品溶液，依次测定，计算含量，并计算回收
率，滇乌头碱平均回收率为 103. 1%，ＲSD为 1. 9%，
结果表明该方法回收率良好，符合 HPLC 含量测定
要求。
2. 5. 7 稳定性试验:精密吸取同一份供试品溶液，
分别在 0、1、2、4、8、12、24 h 测定其峰面积，计算得
ＲSD为 1. 1%。结果表明供试品溶液在 24 h内稳定
性良好。
2. 5. 8 含量测定:取各康定乌头药材样品粉末 1. 0
g，按“2. 5. 3”项下方法制备供试品溶液，按“2. 5. 1”
项下色谱条件测定，外标一点法计算百分含量，康定
乌头中滇乌头碱含量测定结果见表 2，平均含量(按
干燥品计算)为 0. 23%。
3 讨论
薄层鉴别以滇乌头碱和塔拉萨敏为对照品，考
察了 2 个展开系统:① 石油醚-丙酮-二乙胺
(2∶ 1∶ 0. 1) ;②环己烷-乙酸乙酯-丁酮-二乙胺(10∶ 2
∶ 3∶ 0. 1)。结果表明，系统①分离效果较好，斑点整
齐、清晰，故采用展开系统①。本研究还对 TLC 方
法进行耐用性试验，包括不同硅胶 G 板(青岛海浪
化工厂预制板、实验室自制板)、不同展开温度(25、
4 ℃)、不同展开湿度(18%、32%、58%、72%)条件
下对薄层色谱的影响，结果表明，上述各种条件下的
展开效果均较好，表明本法对上述因素耐用性良好。
参考 2010 年版中国药典白附子浸出物测定方
法〔6〕，本研究采用热浸法考察了不同浓度的乙醇
(35%、50%、75%、95%)对康定乌头药材浸出物提
取效果的影响，结果发现采用 50%乙醇效果最好。
康定乌头含滇乌头碱、塔拉萨敏等二萜类生物
碱，该类成分为乌头属植物抗炎、镇痛的主要成
分〔7-9〕。与滇乌头碱相比较，塔拉萨敏在 C-14 位缺
少对甲氧基苯甲酰取代基，没有紫外吸收。因此，本
文在含量测定时选择滇乌头碱作为指标成分。
8 批药材水分平均值为 11. 48%，总灰分平均值
为 4. 83%，酸不溶性灰分平均值为 1. 81%;浸出物
平均值为 20. 46%;滇乌头碱平均值为 0. 23%。根
据测定结果，建议规定康定乌头药材水分不得超过
13. 0%，总灰分不得超过 6. 0%，酸不溶性灰分不得
超过 4. 0%，浸出物不得低于 15. 0%，滇乌头碱不得
低于 0. 15%。
参 考 文 献
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2008.
《中药材》杂志为国家首批公布的可登处方药广告的专业媒体。
·089· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 6 期 2014 年 6 月