全 文 ：峨培与, 种 ·
乌天麻和红天麻及其杂种的同工酶分析
华中农业大学园艺系 (武汉 43 仪刀 0 ) 姜 玲 万蜀渊
湖北宜昌市林业学校 (宜昌科 3 10 ) 王绍柏 余昌俊
摘要 利用过氧化物酶同工酶分析红天麻 、 乌天麻及其杂种 ,结果表明 :天麻的根状茎茎尖分生组织可用于过
载化物酶同工酶分析和杂种鉴定 ,带谱清晰 ,稳定性好 。 以红天麻为母本 ,乌天麻为父本所得的杂种 ,其谱带表现
出明显的亲本互补关系 。 本试验说明 ,过氧化物酶可用于天麻杂种的鉴定 。
关健词 天麻 杂种 过氧化物酶
天麻 G贴饥以必 e衍如 BI . 是主产于我 国的珍贵中
药材 ,对多种疾病具有明显的疗效 〔’ 泪 。 在长期种
植过程中 , 由于品种退化 、劣变等问题 , 给天麻育种
工作者提出了新的课题 。 随着高产高效人工栽培技
术的推广 ,对天麻品种提 出了更高的要求 。 为 了满
足广大种植者的需要 , 湖北省宜昌林业学校与昆明
植物研究所合作 ,进行了天麻种内各变型 间的杂交
实验 ,其中用红天麻 及哪m己讯 e阮。 f . 。阮 。` 与乌天
麻勃 t比d记 e阮协 f . 沙乙配m 杂交 ,获得的杂种后代产
量比宜昌红天麻高 30 % 左右 , 有效药用成分天麻素
含量也显著提高阁 。 为 了深人 了解红天麻 、乌天麻
及其杂种的遗传关系 ,更好地开发利用这一地道药
材杂种优势 ,本试验采用同工酶的测定技术对亲本
和后代的关系进行了鉴别 。
材料和方法
供试材料 4 月下旬至 5 月上 、 中旬 , 采集红
天麻( w ) 、 乌天麻 ( h )及其杂种 F , ( h x w )的花器官 、
根状茎的茎尖分生组织 (抽蔓长度不超过 3 c m )以
及幼嫩的根状茎 ,保存于 一 20 ℃ 的冰柜中 ,待用 。
1
.
2 方法
1
.
2
.
1 酶液提取 :称取 0 . 3 9 材料 , 加 3 而 冷却提
取缓冲液 ( 0 . 1 M irT s 一 H CI , 含 0 . 5 M 蔗糖 , 0 .仪场 M
v 。 , 0
.既 M 半胧氨酸 , 0 . 加 Z M E DT A ,声 8 . 0) , 冰浴
中匀浆 ,在 0℃ , l中以刃 耳川 1 下离心 巧 而 n , 上清液保
存于 一 20 ℃低温冰箱中 , 待分析用 。
1
.
2
.
2 电泳 : 采用夹心式聚丙烯酞胺凝胶垂直板
电泳 , 分离胶 与 浓缩 胶 的 浓度分 别为 6 . 8% 和
2
.
5%
,点样量为 20 川 , 凝胶缓冲液和电极缓冲液根
据文献4[J 配制。 整个电泳过程在 4 ℃冰箱中进行 。
开始在电压 50 V 、 电流强度 10 n 1A. 条件下电泳 , 当澳
酚蓝前沿刚到达分离胶时 ,将电流强度调至 25 m A ,
在稳流条件下继续电泳 ,直到前沿迁移至距离橡胶
框下缘 I cm ,将电流调 回到 0 。 然后用不 同的染色
方法分别对凝胶进行染色 , 使各种同工酶谱表现出
中药材第 解 卷第 8期 2以 ) 1年 8 月
来 。
1
.
2
.
3 染色 : ( l) 过氧化物酶 ( Po X ) .0 02 M NacA
10 以 ,愈创木酚液 如 d (母液为 1 . 2 而 愈创木酚
溶于 10 % 醋酸溶液 250 而 中 ) , 5 1刊M M n以人 10 d ,
0
.
12 % 玩仇 25 耐 , 联苯胺液 25 血 (母液为 0 . 58 间
联苯胺溶于 10 %醋酸溶液 25 0 血 中 ) 。 室温下染色
约 3 0 n l i l l , 直至酶带呈 紫红色 。 ( 2 )醋酶 ( ES F ) A
液 : 0 . 2 M N大川X为印 而 , 0 . 2 M N aH ZR )4 14() hI 。 B
液 : 0 . 2 M N匆 H R人 30 而 , O , 2 M N州2 1叹石 1 50 m l , 坚
牢兰 R 盐 0
.
3 9
,蒸馏水 120 d 。 凝胶在 A 液 中保
温 (37 ℃ )30 而 n 后 , 再置于添加 。一 ,日一醋酸蔡醋的 B
液中保温 ( 37 ℃ ) l h 。 凝胶 染色后 , 在翻拍架 上照
相 ,并记录迁移率 ( fR 值 ) 。
2 结果
2
.
1 同一 时期 、 不 同部位的试材 同工酶谱分析
试验表明 , 在同一时间所取的样品中 ,不同部位的试
材在过氧化物酶 ( R )X )同工酶谱中表现出差异 。 花
器官酶谱表现严重拖尾现象 , 难以区分亲本与杂种
的差异 。 用白麻期幼嫩的根状茎谱带作试材时 , 虽
然可以看 出亲本与杂种的差异 ,但酶带的清晰度不
高 。 而根状茎的茎尖分生组织产生的谱带较清晰 ,
且不同批次的分析结果稳定性好 。
2
.
2 醋酶 ( E S I , )的同工酶分析 醋酶 ( ES I , )的同工
酶分析中 , 快区 、 中区和慢区均 可获得较清晰的谱
带 ,但均不能将乌天麻 、 红天麻及其杂种后代 区 分
开 。
2
.
3 乌天麻 、红天麻及其杂种过氧化物酶 ( POX )酶
谱分析 以根状茎的幼嫩茎尖分生组织为材料进行
过氧化物酶 ( P OX )酶谱分析 , 结果表明 : 亲本与杂种
的差异主要表现在中区 ,杂种 F , 谱带的 fR 值分别
为 0 .伪 、 0 . 3 6 、 0 . 41 、 0 , 43 、 0 . 46 , 乌天麻的 fR 值为
0
.的 、 0 . 3 6 、 0 . 40 、 0 , 43 、 0 . 46 , 乌天麻在 fR 0 . 40 和
0
.
43 处为两条较弱的带 ,红天麻谱带的 fR 值分别为
0
.
08
、
0
.
43
。 以红天麻为母本 , 乌天麻为父本所得的
,
54 7
·
DOI : 10. 13863 /j . i ssn1001 -4454. 2001. 08. 001
杂种 ,其谱带表现 出明显的亲本互补关系 。 试验中
经过分离胶与浓缩胶的浓度的调整 , 以及 电流的调
整 ,得到了较清晰的谱带 ,能将红天麻和乌天麻及其
杂种后代区分开来 。
3 讨论
同工酶是分子水平的指标 , 可以比较直接地判
断基因的存在与表达的规律 。 大部分同工酶的遗传
是共显性的 ,在 F I 代就能进行有效 的遗传分析 , 且
同工酶检测方便 ,酶谱不易受环境条件影 响 。 因此
同工酶是植物遗传育种研究的适当指标 。 也正因为
同工酶具有上述优点 , 自二十世纪五 十年代发现 同
工酶以后 ,其研究和应用几乎遍及植物生物学 的各
个领域 ,特别是杂种鉴定阁 。
到 目前为止 , 还未见到利用 同工酶的方法成功
地鉴定天麻杂种的报道同 。 本试验研究结果表明 :
利用花器官作材料 ,其酶谱拖尾严重 ,可能是由于酚
类化合物干扰所致 ;利用细嫩的根状茎作试材 , 虽然
可以看出亲本与杂种的区别 ,但分辨率和稳定性均
不高 , 可能是次生代谢物质已在根状茎 中积累所至 ;
利用分生能力强的根状茎的茎尖作同工酶鉴定天麻
杂种是较理想的试材 。
参 考 文 献
1 罗献瑞 . 实用中草药彩色图集 . 广州 :广东科技出版社 ,
1卯7 : 188
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( 2田 l 一 0 1 一 15 收稿 )
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K e y 明. 找如 〔初忿八对众乙 e如如 ; Hy b石d ; P e n 〕 x idase
白花蛇舌草种子萌发特性
南京农业大学中药材研究所 (南京 21 仪刃 5) 郭巧生 吴传 万 刘 俊 杜 小凤
` 摘要 白花蛇舌草种子萌发特性初步研究结果表明 :种子具光敏特性 ,变温和 以 处理可显著提高白花蛇舌草
种子发芽率 。
关键词 白花蛇舌草 种子 萌发 光敏性 温度
白花蛇舌草 从诵阳忿众 d刃泌 “ iWdl . 为茜草科一
年生草本 , 全草入药 ,又名蛇舌草 、蛇总管 、蛇利草 、
二叶律等 ,主产于云南 、广西 、广东 、福建 、 江西 、 江苏
等省区。 原为民间草药 ,主要用于治疗恶性肿瘤 、 肠
痈 、 咽喉肿痛 、毒蛇咬伤等症 〔’ 浏 。 据现代研究表 明
白花蛇舌草全草含齐墩果酸 、 熊果酸 、 对 一 香豆酸 、
豆街醇 、 环烯醚菇贰类 、 乙烯基苯酚 、 乙烯愈创木酚
.
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.
及免疫多糖等化学成分 〔` 一 “〕 , 又从甲醇提取物 中分
得一系列葱醒类成分 0[] , 且富含具抗癌作用的微量
元素 iT 等 〔’ 。〕 ,现 已广泛用于治疗癌症和肝炎 , 中国
药典 ( 2仪刃 版 )已作为成药原料药收载〔” 〕 , 致使每年
需求量剧增 ,仅靠野生收购已不能满足供应 。 近年 ,
江苏和江西等地 已开展 了白花蛇舌草野生转家种工
作 ,但有关种子方面的研究工作未 见报道 。 本文就
中药材第 24 卷第 8 期 2《X) 1年 8 月