全 文 ：表 5　样品的乌头类总生物碱含量测定结果
批号 平均含量 /mg· g-1 RSD(%)
01 0.105 5 0.97
02 0.132 6 0.11
03 0.117 8 2.11
　　n=3
3　结论
由以上实验结果可知 ,本文所用的改良异羟肟酸铁 -高氯酸
铁法及酸性染料比色法 , 精密度 、重复性和加样回收率等均较好 ,
符合定量要求。其中改良异羟肟酸铁 -高氯酸铁法作为测定酯
型生物碱含量的经典方法 , 收载于 《中国药典 》(2005版)Ⅰ
部中 [ 1] 。
根据以上测定结果 ,暂定每克复方川乌止痛贴中含酯型生物
碱以乌头碱计 , 平均含量为 0.091 6 mg;复方川乌止痛贴中含总
乌头碱以乌头碱计 ,平均含量为 0.118 7 mg。
参考文献:
[ 1 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:26.
[ 2 ] 　李云霞 ,孙　照 ,郭艳玲.酸性染料比色法测定川乌 、草乌中总乌头
生物碱的含量 [ J] .中成药 , 2000, 22(9):662.
收稿日期:2007-01-27;　修订日期:2007-05-29
作者简介:刘太平 (1983-),男(汉族),湖南南县人 ,现为中南大学化学化
工学院在读硕士研究生 ,学士学位 ,主要从事植物活性成分提取及分离纯
化研究工作.
＊通讯作者简介:李芬芳 (1964-),女(汉族),湖南邵阳人 ,现任中南大学
化学化工学院教授 ,博士生导师 ,博士学位 ,主要从事植物活性成分提取
及分离纯化研究工作.
聚酰胺树脂分离纯化芦荟蒽醌衍生物
刘太平 , 李芬芳＊ , 邢健敏 , 黄　莹
(中南大学化学化工学院 ,湖南 长沙　410083)
摘要:目的 研究纯化芦荟蒽醌衍生物的工艺条件。方法 对照乙醇梯度洗脱所得各组分的 HPLC谱图 , 考察聚酰胺树脂
富集 、纯化芦荟蒽醌的吸附性能和洗脱参数。结果 通过聚酰胺树脂富集与纯化 , 并采用 40%, 60%, 70%, 80%乙醇梯度
洗脱 , 可以使芦荟蒽醌衍生物得到较好的分离。结论 该法的精确度 、稳定性 、重复性和回收率都较好 ,且操作简便易行。
关键词:芦荟;　蒽醌类衍生物;　聚酰胺树脂;　紫外 -可见分光光度法;　高效液相色谱法
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)01-0160-02
StudyonthePurificationofAnthraquinoidCompoundswithPolyamideResin
LIUTai-ping, LIFen-fang＊ , XINGJian-min, HUANGYing
(ColegeofChemistryandChemicalEngineering, CentralSouthUniversity, Changsha410083, China)
Abstract:ObjectiveTostudythepurificationprocessofanthraquinoidcompounds.MethodsTheabsorptivecharacteristicsandelutionparametersoftheprocesswerestudiedbyHPLCmethod.ResultsWithpolyamideresintoabsorbandpurify, elutedwith
40%, 60%, 70%, 80% ethanol, goodresultswereobtained.ConclusionThemethodisprecise, stable, repeatableandeasyto
operate.
Keywords:Aloe;　Anthraquinoidcompounds;　Polyamideresin;　UV-VISspectrophotometry;　HPLC
　　芦荟为百合科芦荟属多年生长绿肉质草本植物 ,临床上常用
于治疗创伤 、哮喘 、胃溃疡 、便秘等症 , 其中芦荟蒽醌类及其衍生
物倍受人们关注。近年来的药理和临床实验表明 ,蒽醌类物质具
有抗病毒 、抗肿瘤 、抗衰老 、降血糖血脂 、调节免疫功能及调节血
压等药理作用 [ 1 ～4] 。含芦荟蒽醌类成分的产品已出现在医药 、保
健 、食品等市场。
过去大都采用大量的甲醇反复多次提取 ,减压浓缩后用溶剂
如苯 、乙醚 、正丁醇等依次提取蒽醌类物质 ,然后采用大孔吸附树
脂进行初分 , 得到初分产物 [ 5 , 6] 。这种方法虽然可以除去部分干
扰物质 , 但需要消耗大量有机溶剂 , 步骤繁琐 , 而且残留的甲醇 、
苯等有机溶剂 , 使得产品的使用范围受到一定的限制。采用聚酰
胺柱层析技术 , 具有选择性好 、机械强度高 、吸附速度快 、分离效
果好 , 有机溶剂无残留等优点 , 在天然产物的分离与纯化中已经
获得了广泛应用 [ 7, 8] , 但用于分离纯化芦荟蒽醌类物质尚未见报
道。本研究以聚酰胺树脂为固定相 , 选择适当的流动相 , 应用常
压柱色谱法对芦荟蒽醌类衍生物进行分离 ,旨在探索一种快速提
取 、分离与纯化芦荟有效成分的简单实用方法。
1　材料与方法
1.1　仪器和材料 日本产 LC-8A型高效液相色谱仪;北京普析
通用仪器有限责任公司产 70-1800SPC型紫外可见分光光度计;
上海申生科技有限公司产 R-201型旋转蒸发器;湘仪天平仪器
厂产 TG328A光学读数分析天平以及上海精密科学仪器有限公
司生产电子天平(JY4001)。原材料芦荟由海南中和集团提供。
1.2 　芦荟蒽醌类衍生物的提取 取 3.5 kg芦荟鲜叶 ,洗净 , 剥取
表皮及维管束部分 ,切成 3 cm的方块 , 打碎成浆状 , 放入密闭的
容器中 ,加入 50%的乙醇溶液 , 避光浸泡 24 h。滤取清液 , 滤渣
继续用 50%的乙醇溶液浸泡两次 ,合并清液 , 转入 1 000 ml的烧
瓶中减压蒸馏除去乙醇和水 ,得到红褐色的芦荟胶状提取物 。无
水乙醇浸泡芦荟胶状提取物 , 芦荟多糖和树脂类析出。 离心分
离 , 得到清液。将清液转入 1 000ml烧瓶中减压蒸馏除去溶剂乙
醇 , 得到浸膏。加入一定量 20%硫酸溶液和氯仿(1:5体积比)
混合液于芦荟浸膏中 , 在 70℃的水浴锅中回流 4h, 倾出氯仿液。
残渣再如法重复 3次 ,合并氯仿液。蒸馏除去氯仿 , 得到黄褐色
的胶状物 [ 9] , 即芦荟蒽醌类粗品。
1.3 　蒽醌衍生物的分离纯化 称取 5 g黄褐色的胶状物 , 乙醇溶
解 , 转入已经预处理好的聚酰胺树脂柱中。当蒽醌类衍生物被聚
酰胺树脂吸附后 ,用蒸馏水洗涤至滤出液没有蒽醌类物质。然后
以乙醇 -水(体积比分别为 20∶80;30∶70;40∶60;50∶50;60∶
40;70∶30;80∶ 20;90∶ 10)作为流动相进行洗脱 , 流速为 1.0
ml/min, 收集各个洗脱组分 , 用于下一步实验。具体操作过程见
图 1。
1.4 　芦荟蒽醌衍生物的定性分析 准确量取各洗脱组分各 10
ml, 减压蒸馏除去溶剂 ,置于 100 ml容量瓶中 , 加 0.8%醋酸镁 -
甲醇液至刻度线 , 摇匀。再以 0.8%醋酸镁 -甲醇液作空白液 ,
采用 70-1800SPC型紫外可见分光光度计 , 在 508 nm处测定吸
光度 [ 5] 。
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 1期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.1　
1.5　 HPLC法测定芦荟蒽醌类物质含量 色谱条件 [ 10] :色谱柱
为 Nova-PakC18柱(150 mm×4.6 mm, i.d.);流动相为 25% ～
30%甲醇溶液(5 min;线性递增), 30% ～ 35%甲醇溶液(10 min;
线性递增), 35% ～ 70%甲醇溶液(35 min;线性递增), 70%甲醇
溶液(10 min);流速:0.7 ml· min-1;检测波长 293 nm;柱温
25℃, 进样量为 20 μl。
2　结果与讨论
2.1 　HPLC法对聚酰胺树脂分离纯化芦荟蒽醌类衍生物效果的
评价 图 2 ～图 5分别为乙醇 -水(体积比分别为 40∶60;60∶
40;70∶ 30;80∶ 20)洗脱液梯度洗脱所得组分的高效液相色
谱图。
图 2中可以看出 , 40%乙醇水溶液洗脱组分 , 在保留时间为
28.463 min处 , 存在一个明显对称 、峰面积较大的峰 , 色谱峰面积
比为 47.836%。说明 40%乙醇洗脱组分中含有的主要有效成分
十分明显 , 但其后有几个连续的小峰 , 说明仍有其它组分存在。
图 1　芦荟蒽醌类提取分离实验流程图
图 2　40%乙醇洗脱组分HPLC图
图 3　60%乙醇洗脱组分HPLC图
图 4　70%乙醇洗脱组分HPLC图
图 5　 80%乙醇洗脱组分 HPLC图
图 3 ～ 5分别为 60%, 70%, 80%梯度洗脱液所洗脱组分的高
效液相色谱图。图中可以看出 , 3个图谱的色谱峰保留时间与前
面低浓度洗脱组分的色谱峰的保留时间差别很大。低浓度洗脱组
分色谱峰的保留时间分布的比较广 ,且相对靠后 , 而高浓度洗脱组
分色谱峰的保留时间都集中靠前 ,且峰面积较大 , 相对而言其后几
乎没有小的色谱峰出现 ,这一现象说明在高浓度条件下所获得的
产品比较纯。从峰面积比来看 , 60%洗脱组分中主要活性成分的
面积比为 33.12%, 70%洗脱组分中的主要活性成分的面积比为
32.626%, 这两个面积比加上相应的溶剂峰面积比 ,分别占各自样
品的 73.17%和 83.00%,表明这两个组分中的有效成分含量相对
比较高 ,纯度也较高 , 成分的定性鉴定以及其精细结构还有待进一
步研究。在对各洗脱组分的乙醇溶液进行紫外 -可见分光光度法
检测(169 ～ 600nm),可以发现各组分的最大特征吸收峰在 200 ～
450 nm,与蒽醌类物质的最大特征吸收峰相符。
2.2 　聚酰胺树脂的解吸与再生性能研究 实验采用动态吸附法
检测聚酰胺树脂的吸附 、解吸和再生性能。以每 100 g聚酰胺树
脂吸附 4.5 g蒽醌粗产物。待蒽醌粗产物完全吸附后 , 用蒸馏水
冲洗至洗脱液中无蒽醌类物质。 计算出聚酰胺树脂的吸附量。
经过 25次的吸附解吸再生过程后 , 聚酰胺树脂的穿透容量仍然
保持不变 , 聚酰胺树脂的吸附率为 87.8%, 解吸再生率为
92.6%。说明聚酰胺树脂具有良好的重复使用性能。
3　结论
利用聚酰胺吸附树脂柱 , 依次采用 40%, 60%, 70%, 80%乙
醇溶液作为洗脱剂 ,梯度洗脱得到了 4个组分 ,并对洗脱组分进
行了高效液相色谱分析 , 结果显示 4个组分分离效果好;聚酰胺
易再生且对分离效果不产生任何变化。最重要的是本法精密度 、
稳定性 、重复性 、和回收率都很好 ,且操作简便易行。
参考文献:
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