全 文 ：食品工业科技 分析检测
ScienceandTechnologyofFoodIndustry
284　 　2008年第 04期
紫苏不同部位中乌索酸和
齐墩果酸的含量比较
邹盛勤1 ,刘　坤2 ,陈　武 1
(1.宜春学院生物工程研究所 ,江西省天然药物活性成分研究重点实验室 ,江西宜春 336000;
2.宜春学院物理科学与工程技术学院 ,江西宜春 336000)
摘　要:采用超声技术提取紫苏不同部位中乌索酸和齐墩果酸 ,建立 RP-HPLC法测定其含量 。色谱柱为 KromasilC18柱
(250mm×4.6mm, 5μm),流动相为甲醇-水(87∶13),光电二极管阵列检测器 ,检测波长 210nm,流速 0.8mL/min,柱温 28℃。乌
索酸进样量在 0.359～5.744μg,齐墩果酸进样量在 0.174～2.784μg时呈现良好的线形关系 ,平均加样回收率分别为 98.53%和
98.36%, RSD分别为 1.3%和 1.5%。方法灵敏 、准确 ,重现性好 ,可用于紫苏中乌索酸与齐墩果酸含量的测定 。
关键词:紫苏 ,高效液相色谱 ,乌索酸 ,齐墩果酸 ,光电二极管阵列检测器
Contentcompareofursolicacidandoleanolic
acidindifferentspotofPerilalinn
ZOUSheng-qin1 , LIUKun2 , CHENWu1
(1.BioengineeringResearchInstituteofYichunUniversity, KeyLaboratoryofJiangxiProvince
forResearchonActiveIngredientsinNaturalMedicines, Yichun336000, China;
2.SchoolofPhysicsScienceandTechnology, YichunUniversity, Yichun336000 , China)
Abstract:UrsolicacidandoleanolicacidfromPerilalinnwereextractedbysupersonictechnology, andRP-HPLC
methodforthedeterminationofursolicacidandoleanolicacidwasdeveloped.Ursolicacidandoleanolicacid
wasseparatedandanalyzedonKromasilC18 column(250mm×4.6mm, 5μm)usingmethanol-water(87∶13)as
mobilephaseatflowrateof0.8mL/min.UVdetectionwasat210nmandthecolumntemperaturewas28℃.An
averagerecoveryof98.53%wasobtainedwithaRSDof1.3% intherangeof0.359～5.744μgforursolicacid, and
anaveragerecoveryof98.36% wasobtainedwithaRSDof1.5% intherangeof0.174～2.784μgforoleanolicacid.
HPLCmethodwasprovedtobesensitive, fastandaccurateItcanbeusedforthedeterminationofursolicacid
andoleanolicacidinPerilalinn.
Keywords:Perilalinn;HPLC;ursolicacid;oleanolicacid;photodiodearraydetector
中图分类号:TS201.2　　　　文献标识码:A　　　　文 章 编 号:1002-0306(2008)04-0284-03
收稿日期:2007-09-13
作者简介:邹盛勤(1970-),男 ,副教授 ,在读硕士 ,主要从事天然药物
成分提取与分析研究。
基金项目:国家“863”计划重点资助项目(2002AA2Z3217)。
　　紫苏为药食同源植物 ,植物基源为唇形科紫苏
属(Perilalinn)植物紫苏 [ P.frutescens(L.)Brit.
var.arguta(Benth.)Hand-Mazz] ,其性温 、味辛 ,以
叶 、梗 、果实三部分分别入药。紫苏叶具有解表散
寒 ,行气和胃功效;紫苏梗具有理气宽中 ,止痛 ,安胎
功效;紫苏籽具有降气消痰 ,平喘 ,润肠功效 [ 1, 2 ] 。国
内外学者对紫苏属植物的化学成分进行了大量研
究 ,从中分离鉴定了百余种化合物 ,这些化合物可以
归属于挥发油类 、甾醇类 、酚酸和桂皮酸类 、苷类 、黄
酮类 、色素类 、脂肪酸类和三萜类等 [ 3 , 4 ] 。乌索酸与
齐墩果酸属于三萜酸类化合物 ,为紫苏的活性成分 ,
紫苏中乌索酸和齐墩果酸的含量测定方法鲜见文献
报道 。本文采用超声技术提取紫苏不同部位中乌索
酸和齐墩果酸 ,并建立了测定其含量的方法 ,方法操
作简便 ,灵敏准确 ,数据可靠 。
1　材料与仪器
乌索酸 、齐墩果酸对照品　中国药品生物制品
检定所 ,批号:110742-200314, 110709-200304,供含量
测定用;甲醇　色谱纯 ,上海陆忠试剂厂;95%乙醇　
分析纯 ,江西洪都生物化学有限公司;水　高纯水;紫
苏　市售 ,经鉴定为唇形科紫苏属植物紫苏 [ P.
frutescens(L.)Brit.var.arguta(Benth.)Hand-Maz] 。
Waters高效液相色谱仪　515泵 , 2996光电二级
管矩阵检测器(PAD),柱温箱 , Empower中文色谱工作
站 ,美国;SK2510HP超声提取器　上海科导超声仪器
DOI :10.13386/j.issn1002-0306.2008.04.089
分析检测 食品工业科技
Vol.29, No.04, 2008
2008年第 04期　 285　
公司;CP225D分析天平　德国 Sartorius公司;UPW-I
-10T高纯水机　杭州永洁达膜分离设备厂。
2　方法与结果
2.1　乌索酸与齐墩果酸检测波长的确定
采用 PAD检测器在 190～ 600nm波长范围内扫
描 ,对照品和紫苏样品中乌索酸 、齐墩果酸在流动相
中的最大吸收波长均为 202.2nm(图 1),但由于在低
波长处有较强的末端吸收 ,为减少干扰 ,提高信噪
比 ,提取不同波长的色谱进行比较 ,并积分计算了对
应的峰面积响应值 ,选择 210nm为检测波长 ,其信噪
比高 ,噪音低 ,峰型对称 ,可在消除背景干扰时保证
基线平稳和检测的灵敏度 。
图 1　对照品(A)和紫苏样品(B)中乌索酸 、
齐墩果酸的紫外光谱图
2.2　色谱条件
色谱柱为 KromasilC18柱(250mm×4.6mm, 5μm,
带保护柱);流动相为甲醇-水(87∶13);检测波长为
210nm;流速为 0.8mL/min;柱温为 28℃;外标法定量分
析。乌索酸与齐墩果酸峰分离度为 1.84,对称因子均
为 1.02,理论板数分别为 14241和 13876。乌索酸 、齐
墩果酸对照品和紫苏样品的 HPLC色谱见图 2。
1-齐墩果酸 , 2-乌索酸
图 2　对照品(A)和紫苏样品(B)的 HPLC色谱图
2.3　标准对照品溶液制备
精密称取干燥至恒重的乌索酸对照品 3.59mg,
齐墩果酸 1.74mg置 10mL容量瓶中 ,加入适量甲醇
超声溶解 ,定容 ,得含乌索酸 0.359mg/mL和齐墩果
酸 0.174mg/mL的对照品混合溶液 。
2.4　紫苏样品溶液的制备
样品干燥后粉碎 ,过 20目筛 。精密称取约 4g,
置于具塞三角烧瓶中 ,加入 10倍量 95%乙醇 40mL,
超声提取 90min,过滤 ,滤渣用乙醇洗涤 2次 ,合并滤
液至 50mL棕色容量瓶中 ,乙醇定容。滤液用微孔滤
膜(0.45μm)过滤 ,取续滤液作为样品溶液 。
2.5　线性关系的考察
分别精密吸取乌索酸和齐墩果酸对照品混合液
1、4、8、12、16mL依次进行 ,平行 3次 ,测定乌索酸和
齐墩果酸峰面积。以进样量(μg)对峰面积(μV· s)
平均值进行线性拟合 ,得乌索酸线性回归方程为 Y=
6.44×105X-5.83×104 , R=0.999;齐墩果酸线性回
归方程为 Y=7.54 ×105X-3.70×104 , R=0.999;表
明当乌索酸进样量在 0.359～5.744 μg,齐墩果酸进样
量在 0.174～ 2.784μg之间时 ,进样量与峰面积呈良好
的线性关系。
2.6　峰纯度的考察
对照品和紫苏样品中乌索酸和齐墩果酸组分在
色谱柱中的保留时间一致 ,应用 Empower色谱软件
适应性模块对色谱峰纯度分析表明 ,对照品溶液中
乌索酸和齐墩果酸峰的纯度角值均小于阈值 ,纯度
角线位于自动阈值线下方(图 3),表明乌索酸和齐墩
果酸色谱峰均为单一组分吸收峰 ,无其它成分的干
扰 ,与色谱峰顶点 、起始点和终止点光谱归一化叠加
后结果相吻合 。
图 3　对照品中齐墩果酸(A)和
乌索酸(B)峰纯度分析(210nm)
2.7　精密度实验
精密吸取乌索酸和齐墩果酸的对照品混合溶液
10μL进样分析 ,重复 5次 ,测得乌索酸峰面积相对标
准偏差(RSD)为 0.3%(n=5),齐墩果酸的峰面积的
RSD为 0.6%。表明进样方法和仪器精密度良好。
2.8　重现性实验
精密称取同一批样品 5份 ,制备样品溶液 ,精密
吸取 10μL进样分析 ,外标法计算含量 ,乌索酸含量
的 RSD为 1.1%(n=5),齐墩果酸含量的 RSD为
1.0%(n=5),方法重现性良好。
2.9　加样回收率实验
准确称取已知乌索酸和齐墩果酸含量的紫苏叶
样品 6份 ,分高﹑中﹑低 3组分别加入乌索酸和齐墩
果酸对照品混合溶液适量 ,配制加标样品溶液。进
样测定乌索酸和齐墩果酸的含量 ,计算回收率。乌
索酸和齐墩果酸的平均加样回收率分别为 98.53%
(RSD=1.3%)和 98.36%(RSD=1.5%)。
2.10　样品含量的测定
准确吸取样品溶液 10μL注入高效液相色谱仪 ,
测定乌索酸与齐墩果酸峰面积 ,平行 3次 ,按外标法计
算样品中乌索酸与齐墩果酸的平均含量 ,结果见表 1。
表 1紫苏不同部位中乌索酸和齐墩果酸的含量
样品
编号 部位
乌索酸的
含量(%)
RSD
(%)
齐墩果酸的
含量(%)
RSD
(%)
1 叶 0.348 1.2 0.121 0.9
2 茎 0.083 1.6 0.029 1.6
3 地上部分 0.238 0.6 0.079 1.1
食品工业科技 分析检测
ScienceandTechnologyofFoodIndustry
286　 　2008年第 04期
3　讨论
3.1　紫苏叶中乌索酸和齐墩果酸的含量均高于紫苏
茎 , 2组分主要存在于紫苏叶中。紫苏不同部位中的
乌索酸与齐墩果酸的含量存在较大差异 ,但乌索酸
的含量均明显高于齐墩果酸的含量。
3.2　HPLC法定量分析 ,一般采用紫外检测器 ,以保
留时间定性 ,峰面积定量 。但由于色谱方法的定量
能力强而定性能力弱 ,对于成分复杂的中药样品来
说 ,往往有不同的组分在同一时间或极相近的时间
出峰 ,甚至两组分完全叠加 ,因而只用保留时间定性
可能会造成分析结果产生意外误差 。二极管阵列检
测器可以同时在设定波长区域内的各波长下进行立
体数据采集 ,既可以察看各波长下的色谱图 ,又可以
察看各时间下的光谱图 ,在比对保留时间的基础之
上 ,加以光谱确认 ,因而可以克服仅以保留时间一项
指标定性的缺点 ,增强了定性的确定性 。此外 ,二极
管阵列检测器与 Empower色谱工作站系统适应性软
件联用 ,可分析组分色谱峰峰纯度 ,进一步增强色谱
方法的定性能力 [ 5, 6] 。
3.3　采用RP-HPLC-PAD法和 KromasilC18柱 ,流动
相为甲醇∶水 (87∶13),柱温 28℃时可以较好地将同
分异构体乌索酸和齐墩果酸分离 ,分离度为 1.84,符
合色谱定量分析要求。方法样品处理简单 ,分离效
果好 ,无其它杂质的干扰 ,数据准确可靠。
参考文献:
[ 1] 国家 药典 委 员会 .中 国药 典 2005 版 (一 部)
[ M] .2005.203.
[ 2] 江苏新医学院 .实用中药辞典(下卷)[ M] .北京:人民
卫生出版社 , 2002.1357.
[ 3] 王静珍 ,陶上乘 ,邢永春 , 等 .紫苏与白苏药理作用的研
究 [ J] .中国中药杂志 , 1997, 22(1):48～ 51.
[ 4] ItoH.StudiesontheFoliumPerillae.IV.Constituentof
essentialoilsandevaluationofgenusPerila[ J] .Yakugaku
Zasshi, 1970, 90(7):883～ 892.
[ 5] 高志杰 ,李静涛 , 饶小思 .高效液相色谱-二极管阵列检
测器法检测饮料中 Vc的研究 [ J] .中国卫生检验杂志 , 2006,
16(4):446.
[ 6] 邹盛勤 ,陈武 , 伍晓春 .高效液相色谱-光电二极管阵列
检测器法测定苦丁茶中乌索酸的含量 [ J] .时珍国医国药 ,
2007, 18(4):784～ 785.
(上接第 283页)
数据的来源 ,使样品更具代表性 。此外 ,还应对模型
不断地维护和优化。本实验结果初步证明了利用近
红外光谱无损检测南果梨的糖度是可行的 ,因此 ,近
红外无损检测分析技术应用于采后南果梨内在品质
的自动化在线分级 ,具有广阔的研究开发前景 。
参考文献:
[ 1] CarlomagnoG, CapozzoL, AtolicoG, DistanteA.Non-
destructivegradingofpeachesbynear-infraredspectrometry[ J] .
InfraredPhysics＆Technology, 2004, 46:23～ 29.
[ 2] KaysSJ.Non-destructivequalityevaluationofintacthigh
moistureproducts[ J] .NIRNews, 1999, 10:12～ 15.
[ 3] LammertynJ, PeirsA, DeBaerdemaekerJ, NicolaiB.
LightpenetrationpropertiesofNIRradiationinfruitwithrespect
tonon-destructivequalityassessment[ J] .PostharvestBiology
Technology, 2000, 18:121～ 132.
[ 4] XingJuan, SandraLammertynLandahlJeroen, VrindtsEls,
DeBaerdemaekerJosse.Effectsofbruisetypeondiscrimination
ofbruisedandnon-bruised`GoldenDelicious applesbyVIS/
NIRspectroscopy[ J] .PostharvestBiologyTechnology, 2003,
30:249～ 258.
[ 5] KawanoS.Presentconditionofnon-destructivequality
evaluationoffruitsandvegetablesinJapan[ J] .JpnAgricRes
Q, 1994, 28:212～ 216.
[ 6 ] KawanoS, AbeH, IwamotoM. Developmentofa
calibration equation with temperature compensation for
determiningtheBrixvalueinintactpeaches[ J] .NearInfrared
Spectroscopy, 1995(3):211～ 218.
[ 7] PeirisKHS, DullGG, LeflerRG, KaysSJ.Spatial
variabilityofsolublesolidsordry-mattercontentwithin
　　　　　　
individualfruits, bulbs, ortubers: implications for the
developmentanduseofNIR spectrometrictechniques[ J] .
HortScience, 1999, 34:114～ 118.
[ 8] SchmilovitchZ, MizrachA, HoffmanA, EgoziH, FuchsY.
Determinationofmangophysiologicalindicesbynear-infrared
spectrometry[ J] .PostharvestBiologyTechnology, 2000, 19:
245～ 252.
[ 9] Anon.SacmiF5 unitaidsWealmoorexoticdeal[ J] .
EurofruitMagazine, 2002, August, 39.
[ 10] ArmstrongR. `Sweetnessguaranteed fruitarrivesin
Europe[ J] .EurofruitMagazine, 2000, August, 44.
[ 11] MartensH, NaesT.MultivariateCalibration[ M] .New
York:JohnWiley＆Sons, 1989.
[ 12]夏柏杨 , 任芊 .近红外光谱分析技术的一些数据处理方
法的讨论 [ J] .光谱实验室 , 2005, 22(3):629～ 634.
[ 13] LinMengshi, AnnaGC, HuangYiqun, RascoBA.
Predicting sodium chloride content in commercial king
(Oncorhynchustshawytscha)andchum(Oketa)hotsmoked
salmonfilletportionsbyshort-wavelengthnear-infrared(SW-
NIR)spectroscopy[ J] .FoodResearchInternational, 2003, 36:
761～ 766.
[ 14] PeirsAnn, LammertynJeroen, OomsKristien, NicolaBM.
Predictionoftheoptimalpickingdateofdifferentapplecultivars
bymeansofVIS/NIRspectroscopy[ J] .PostharvestBiologyand
Technology, 2000, 21:189～ 199.
[ 15] ClarkCJ, McGloneAV, JordanRB.Detectionof
Brownheartin ` Braeburn apple by transmission NIR
spectroscopy[ J] .PostharvestBiologyandTechnology, 2003,
28:87～ 96.
[ 16]李勇 , 魏益民 , 王锋 .影响近红外光谱分析结果准确性
的因素 [ J] .核农学报 , 2005, 19(3):236～ 240.