全 文 ：抗氧化活性也进一发生了改变，活性增加。盐炙可能
是益智仁挥发油部位化学成分、药性及药效变化的主
要原因。实验为揭示益智盐炙机制提供了一定的
依据。
参考文献:
［1］ 国家药典委员会． 中国药典 2010 年版(一部)［S］． 北京:中国医
药科技出版社，2010:273．
［2］ 李文兵，胡昌江，李兴华，等． 益智仁盐炙前后指纹图谱对比研究
［J］．时珍国医国药，2010，21(2):305 － 306．
［3］ 王生，李永辉，徐鹏，等．益智挥发油温脾止泻作用及其机制的初
步研究［J］．海南医学院学报，2013，19(4):433 － 437．
［4］ 黄凌，朱毅，董志，等．益智仁挥发油急性毒性实验及对帕金森小
鼠行为学和纹状体多巴胺含量的影响［J］．中药材，2008，31(5):
722 － 726．
［5］ 黄凌，朱毅，常艳波，等．益智仁挥发油对帕金森病模型小鼠脑内
纹状体和黑质损伤的影响［J］． 中国药理学与毒理学杂志，2009，
23(3):176 － 182．
［6］ 黄凌，朱毅，邝少轶．益智仁挥发油抗帕金森模型小鼠黑质神经元
凋亡的作用研究［J］．中国药房，2011，22(47):4430 － 4433．
［7］ 崔开宇，王平，游秋云．益智仁挥发油对大鼠快动眼睡眠剥夺恢复
后脑组织氨基酸类神经递质含量及其受体表达的影响［J］． 中国
实验方剂学杂志，2013，19(4):223 － 227．
［8］ 罗琴，李星，谭睿，等．益智仁挥发油的水蒸气蒸馏法提取工艺优
化及其体外抑菌活性的研究［J］． 华西药学杂志，2011，26(2):
147 － 149．
［9］ 李兴华，胡昌江，李文兵，等． 益智药材中圆柚酮含量的高效液相
色谱法测定［J］．时珍国医国药，2010，21(1):49 － 50．
［10］ 郑云柯，翟红莉，王辉，等． 海南白沙产益智果实挥发油成分的
GC － MS分析［J］．热带农业科学，2013，33(8):66 － 70．
［11］ 刘红．益智的抗氧化作用及成分研究［D］．广州:华南理工大学，
2006．
［12］ 庞国兴，金传山，江黎，等． 益智炮制的初步研究［J］． 中成药，
1994，16(5):21 － 22．
［13］ 黄勤挽，胡昌江，李兴华，等．中药益智仁盐炙前后挥发油成分的
对比研究［J］．中国药业，2008，17(5):3 － 4．
［14］ 阳波，李湘斌．炮制前后益智果实中挥发油成分的对比研究［J］．
中南药学，2010，8(11):817 － 820．
［15］ 刘平怀，刘洋洋，时杰． DPPH·体外清除实验研究萝芙木水溶性
生物碱抗氧化活性［J］．时珍国医国药，2010，21(3):607 － 609．
［16］ 恽祥惠，邢丽娜，李云，等． 建立基于 96 孔板检测的 FＲAP 法和
DPPH法及其在橘核抗氧化活性研究中的应用［J］．时珍国医国
药，2014，25(5):
檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲
1275 － 1278．
质 量 工 艺
HPLC同时测定不同产地甘松中绿原酸
和甘松新酮的含量
李艳忙，刘国林，乔晶，刘爽，张瑜，秦振娴，刘勇*
(北京中医药大学，北京 100102)
摘 要:目的:建立同时测定甘松中绿原酸、甘松新酮含量的测定方法，测定不同产地甘松中绿原酸和甘
松新酮的含量，以控制其质量。方法:采用高效液相色谱法，色谱柱为 Agilent Zorbax Eclipse Plus C18
(250mm ×4． 6mm，5μm)，以乙腈 －水(含 0． 1%磷酸)为流动相，梯度洗脱，流速为 1． 0mL /min，柱温为
25℃，进样量为 10μL，检测波长为 274nm。结果:绿原酸、甘松新酮的浓度与峰面积呈良好的线性关系，
其线性范围分别是 0． 1278 ～ 3． 1954μg(r = 0． 9993，n = 6)、0． 3546 ～ 8． 8654μg(r = 1，n = 6)，平均回收率
分别为 99． 2%，101． 1%，ＲSD分别为 1． 73%，1． 10%。结论:本法方便、准确、重现性好，可用于甘松药
材中绿原酸和甘松新酮的含量测定。
关键词:高效液相色谱;甘松;绿原酸;甘松新酮
中图分类号:Ｒ28 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2406(2015)06 － 0027 － 04
基金项目:国家药品标准提高暨 2015 版药典科研项目
作者简介:李艳忙(1988 －)，女，北京中医药大学 2012 级中药化学专业硕士研究生，主要研究方向:中药物质基础研究。
通讯作者:刘勇* (1964 －)，男，教授，主要研究方向:中药新药质量研究与开发。
收稿日期:2015 － 01 － 12
修回日期:2015 － 02 － 10
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Simultaneous Determination of Chlorogenic Acid and Nardosinone in
Nardostachys Chinensis DC． from Different Producing Areas by HPLC
LI Yan － mang，LIU Guo － lin，QIAO Jing，LIU Shuang，ZHANG Yu，QIN Zhen － xian，LIU Yong*
(Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102，China)
Abstract:Objective:To establish an HPLC method for the simultaneous determination of chlorogenic acid，nar-
dosinone in Nardostachys chinensis DC． from different producing areas，so as to set up a sensitive and specific
method for controlling its quality． Methods:The analysis was performed on an Agilent Zorbax Eclipse Plus C18
column(250mm ×4． 6mm，5μm)with the gradient elution of acetonitrile － water (0． 1% phosphonic acid)at
the flowing rate of 1． 0mL /min． The column temperature was at 25℃ ． and the volume of sample injection was
10μL，and the detection wavelength was set as 274mm． Ｒesults:Good linearity was obtained for Chlorogenic
acid and nardosinone in the range of 0． 1278 ～ 3． 1954μg(r = 0． 9993，n = 6)0． 3546 ～ 8． 8654μg(r = 1，n =
6)respectivelies． The average recovery rates of Chlorogenic acid，nardosinone and cryptotashinone were
99. 2%，101． 1%，respectively． Conclusion:The developed HPLC method is simple，accurate and repeatable，
which is suitable for the determination of chlorogenic acid，nardosinone in Nardostachys chinensis DC．
Key words:HPLC;Nardostachys chinensis DC．;Chlorogenic acid;Nardosinone
甘松为败酱科植物甘松(Nardostachys chinensis
DC．)的干燥根及根茎，具有理气止痛，开郁醒脾等功
效，多用于治疗脾胃气滞、霍乱转筋、脘腹胀痛、牙痛、
痰眩、癔病癫痫、心悸怔忡、脚气等［1］。甘松被列为我
国二级保护藏药，用药历史悠久，主要分布于甘肃、青
海、四川、云南西北部、西藏等地［2］。甘松中倍半萜类
成分是甘松开郁醒脾的有效成分，其中，甘松新酮是甘
松中特有成分，生物活性研究表明，甘松新酮具有镇
静、抗抑郁及促进神经细胞生长等活性［3 － 9］;现代药理
研究表明，甘松可以治疗慢性胃炎、胃溃疡、脚气等症，
而甘松中绿原酸具有抗菌消炎的活性［10 － 11］，是甘松抗
菌消炎的物质基础。为了保证甘松的药材质量和更好
的应用于临床治疗，笔者在前期研究基础上采用
HPLC法建立同时测定甘松中绿原酸和甘松新酮含量
的方法，并对 25 个产地的甘松进行初步研究分析，以
期为药典中甘松药材增加甘松新酮的含量测方法、甘
松资源的开发利用和药材的质量控制提供科学和全面
的参考依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
甘松药材(25 个产地的样品，于 2013 年 7 ～ 8 月
份采自四川青海等地，经北京中医药大学中药学院石
晋丽教授鉴定为败酱科植物甘松);绿原酸对照品(中
国生物制品药品检定所，供含量测定用，批号
ＲA0426FA14);甘松新酮(自制，含量大于 98%);Wa-
ters 2695 高效液相色谱仪(配 DAD 检测器);Sartofi-
us—BSll0S型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统
有限公司);KQ －5200E超声波清洗器(昆山市超声仪
器有限公司);乙腈(色谱纯，Fisher公司)，其余试剂均
为分析纯。
1． 2 方法
1． 2． 1 色谱条件
色谱柱:Agilent Zorbax Eclipse Plus C18(250mm ×
4． 6mm，5μm，美国 Agilent 公司)，流动相 A 为乙腈，B
为 0． 1% 磷酸水溶液。线性梯度洗脱，0 ～ 5min，A
10%;5 ～ 15min，A 10 % ～ 15%;15 ～ 22min，A 15% ～
30%;22 ～ 32min，A 30% ～ 35%;32 ～ 40min，A35% ～
50%;40 ～ 50min，A 50% ～ 65%;50 ～ 60min，A 65%。
柱温为 25℃;检测波长为 274nm;流速为 1． 0mL /min。
1． 2． 2 对照品溶液的配制
精密称取干燥至恒重的绿原酸对照品 4． 26mg，甘
松新酮对照品 7． 24mg，用甲醇配制成浓度分别为
0. 1704mg /mL、0． 2896mg /mL 的对照品储备液。分别
精密移取绿原酸对照品储备液 9mL，甘松新酮对照品
储备液 15mL，混匀，配制成浓度分别为 62． 6μg /mL、
177. 3μg /mL的混合对照品溶液。
1． 2． 3 供试品溶液的配制
称取各产地的甘松药材粉末(过 20 目筛)约 2g，
精密称定，置于 100mL 具塞锥形瓶中，精密加入甲醇
100mL，密封后在室温下超声 1h，提取 2 次，过滤后合
并提取液，浓缩，最后用甲醇定容至 25mL 容量瓶内，
取续滤液经微孔滤膜(0． 45μm)过滤，即得供试品
溶液。
1． 2． 4 线性关系考察
高效液相色谱仪分别精密进样 2，5，10，20，30，
50μL混合对照品溶液，在“1． 2． 1”项色谱条件下测
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定，记录色谱图。以峰面积(Y)为纵坐标，进样量为横
坐标(X)，绘制标准曲线，并进行线性回归。
1． 2． 5 精密度考察
在“1． 2． 1”项色谱条件下连续进样对照品溶液 6
次，每次 10μL，记录色谱峰面积，计算仪器精密度。
1． 2． 6 重复性试验
选取四川阿坝县河支乡的甘松样品为供试品，精
密称取 6 份样品，按照“1． 2． 3”项下方法制备供试品
溶液，在“1． 2． 1”项色谱条件下进样测定，计算绿原
酸、甘松新酮的峰面积的 ＲSD 值，以评价方法的重
现性。
1． 2． 7 稳定性试验
取同一份甘松样品，在室温下放置，分别在 0，2，
4，8，12，24h进样 10μL测定分析，记录色谱峰面积，计
算绿原酸和甘松新酮的 ＲSD，以评价供试品溶液的稳
定性。
1． 2． 8 加样回收率试验
称取已知含量(绿原酸、甘松新酮)的四川阿坝县
河支乡的甘松样品 6 份，每份约 2g，精密称定，分别精
密加入混合对照品溶液，按“1． 2． 3”项下方法制备供
试品溶液，在“1． 2． 1”项色谱条件下测定，计算回收率
和 ＲSD值。
1． 2． 9 甘松样品含量的测定
取不同产地的甘松药材粉末，按“1． 2． 3”项下方
法配制样品溶液，在“1． 2． 1”项色谱条件下进样分析，
测定绿原酸和甘松新酮的峰面积，以外标法计算两种
成分在甘松样品中的含量。
2 结果
2． 1 对照品与供试品溶液的色谱分析结果
对照品及供试品溶液的色谱图见图 1。由图 1 可
知，理论塔板数按绿原酸、甘松新酮和隐丹参酮计算均
不低于 5000，且三者分离度均大于 1． 5，分离效果好。
2． 2 方法学考察
2． 2． 1 线性关系考察
绿原酸的线性回归方程为 Y = 755732X － 27119，
r = 0． 9993(n = 6);甘松新酮的线性回归方程为 Y =
368527X － 8160，r = 1(n = 6)。结果表明绿原酸在
0. 1278 ～ 3． 195μg，甘松新酮在 0． 3546 ～ 8． 865μg范围
内线性关系良好。
2． 2． 2 精密度试验
绿原酸峰面积的 ＲSD为 2． 61%，甘松新酮峰面积
的 ＲSD为 1． 04%。结果表明仪器精密度符合要求。
2． 2． 3 重复性试验
由实验结果可知，绿原酸、甘松新酮的 ＲSD 分别
图 1 对照品和供试品 HPLC图
注:1．绿原酸;2．甘松新酮。
为 1． 67%、1． 04%。结果表明本方法重复性良好。
2． 2． 4 稳定性试验
绿原酸峰面积的 ＲSD为 2． 02%，甘松新酮峰面积
的 ＲSD为 2． 18%。结果表明样品溶液在 24h内稳定。
2． 2． 5 加样回收率试验
绿原酸、甘松新酮的平均回收率分别为 99． 2%，
101． 1%，ＲSD分别为 1． 73%，1． 10%，结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果(n = 6)
成分
称样量
(g)
样品中量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均值
(%)
ＲSD
(%)
绿原酸 2． 004 1． 412 0． 313 1． 738 99． 25 99． 2 1． 73
2． 018 1． 725 2． 089 97． 56
2． 005 3． 144 0． 626 3． 783 99． 66
2． 01 5． 916 6． 425 101． 82
2． 008 3． 3 0． 939 4． 369 97． 02
2． 001 4． 242 5． 201 99． 62
甘松新酮 2． 004 8． 256 0． 887 8． 998 101． 61 101． 1 1． 10
2． 018 5． 474 6． 316 100． 71
2． 005 2． 557 1． 773 4． 32 100． 23
2． 01 2． 85 4． 509 102． 53
2． 008 2． 939 2． 66 5． 621 99． 61
2． 001 5． 13 7． 642 101． 94
2． 3 样品中绿原酸、甘松新酮的含量测定
按照“1． 2． 9”方法测定样品中绿原酸、甘松新酮
的含量，结果见表 2。由表 2 可知，绿原酸含量在
0. 026% ～ 0． 355%，甘松新酮的含量在 0． 109% ～
2. 013%。
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表 2 不同产地甘松药材中绿原酸、甘松新酮的含量(n = 2)
采集地 绿原酸(%) 甘松新酮(%)
四川若尔盖县达扎寺镇 0． 152 0． 430
四川若尔盖县姜冬村 0． 100 1． 763
四川理塘县禾尼乡 0． 164 0． 281
四川理塘县东城门 0． 026 0． 893
四川理塘县理塘寺后山 0． 078 0． 417
四川理塘县理塘寺后山 0． 081 0． 109
四川红原县月亮湾 0． 210 0． 312
四川红原县玛萨镇 0． 100 2． 013
四川松潘县山巴乡 0． 355 0． 762
四川松潘县水晶乡 0． 243 1． 574
四川炉霍县旦都乡 0． 094 0． 583
四川壤塘县 0． 183 1． 035
四川稻城县县城附近山上 0． 085 0． 367
四川阿坝县河支乡 0． 200 0． 672
四川阿坝县德格乡 0． 289 0． 638
四川阿坝县若可河牧场 0． 157 0． 158
四川甘孜县达通玛 0． 294 0． 117
四川甘孜县拖坝乡 0． 143 0． 261
四川甘孜县生康乡 0． 196 0． 194
甘肃碌曲县尕海镇 0． 314 2． 001
甘肃碌曲县郎木寺镇 0． 223 1． 283
甘肃玛曲县尼玛镇 0． 156 1． 046
青海久治县分水岭 0． 212 0． 202
青海久治县康赛寺 0． 095 0． 588
青海久治县智青松多镇 0． 174 0． 371
3 讨论
3． 1 提取方法的选择
本实验以绿原酸和甘松新酮为指标性成分，分别
以甲醇、75%甲醇、50%甲醇、乙醇、75%乙醇、50%乙
醇作为提取溶剂，采用超声提取法和加热回流提取方
法提取，并对提取时间(30min，1h)和提取次数进行考
察，结果表明，超声提取法甘松新酮的含量明显高于加
热回流法，两种方法提取的绿原酸含量并无明显差异。
超声法操作简单，快速，故提取方法确定为样品加入甲
醇 100mL超声提取 1h，提取 2 次。
3． 2 检测波长的选择
对绿原酸和甘松新酮两个对照品的甲醇溶液进行
全波长扫描，扫描波谱显示绿原酸最大吸收波长为
330nm，甘松新酮最大吸收波长为 254nm，为使两种成
分在同一波长下均有吸收，故本文选择 274nm 作为检
测波长。
3． 3 流动相的选择
本实验以甲醇 －水为流动相，存在拖尾现象，因此
在流动相加磷酸以改善拖尾现象，在此基础上比较了
甲醇 － 0． 1%磷酸水、乙腈 －水、乙腈 － 0． 1%磷酸水等
洗脱溶剂，并比较了流速分别为 0． 8mL /min 和
1. 0mL /min时两种化合物的分离度，最终确定了流速
为 1． 0mL /min时，两种成分与杂质峰分离度良好的乙
腈 － 0． 1%磷酸水作为流动相进行梯度洗脱。
3． 4 结果分析
本实验建立了甘松中绿原酸和甘松新酮的含量的
测定的分析方法，并采用此方法对 25 个产地的甘松药
材进行了含量测定。结果表明，绿原酸含量在
0. 026% ～ 0． 355%，甘松新酮的含量在 0． 109% ～
2. 013%。由此可见，不同产地的甘松药材含量差异较
大，四川红原县的甘松新酮的含量高达 2． 013%，四川
松潘县山巴乡的甘松中绿原酸含量高达 0． 355%，甘
肃 4 个产地的甘松药材中两种成分的含量均较高，四
川不同产区的甘松药材含量有较大差异，可能是受生
长的土壤、生长年限、采收季节和贮存时间等因素有
关。本实验采用高效液相法对不同产地的甘松药材中
绿原酸、甘松新酮的含量进行比较分析，为甘松药材的
质量控制规范化、标准化提供参考依据。
参考文献:
［1］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典［S］．北京:中国医药科技
出版社，2010:79 － 80．
［2］ 万新，石晋丽，刘勇，等．甘松属植物化学成分与药理作用［J］．国
外医药(植物药分册)，2007，22(1) :1 － 6．
［3］ Surendra Kumar Sharma，Ajay Pal Singh． In Vitro Antioxidant and
Free Ｒadical Scavenging activity of Nardostachys jatamansi DC［J］．
Journal of Acupuncture and Meridian Studies，2012，5(3) :112 － 118．
［4］ 李琴．甘松新酮抗抑郁作用以及作用机制初探［D］．北京:北京中
医药大学，2011．
［5］ 武姣姣，石晋丽，唐民科，等． 甘松对动物行为绝望模型的影响
［J］．中国实验方剂学杂志，2012，18(7):205 － 207．
［6］ Liu Jian － hui，Yin Fei，Zheng Xu － xu． Nardostachys chinensis Gly-
coside Induces Characteristics of Neuronal differentiation in Ｒat Pheo-
chromocytoma PC12 Cells［J］． Biol Pharm Bull，2005，28(4) :768 －
771．
［7］ Li Ping，Kimihiro Matsunaga． Nardosinone，the first enhancer of neu-
rite outgrowth － promoting activity of staurosporine and dibutyryl cyclic
AMP in PC12D cells［J］． Developmental Brain Ｒesearch，2003，1
(45) :177 － 183．
［8］ 李玮，石晋丽，李琴，等．甘松新酮对缺糖缺氧损伤原代培养神经
元的保护作用［J］．药学学报，2013，48(9):1422 － 1429．
［9］ 张盼，程光宇，程为平． 浅谈甘松的临床应用［J］． 中医药学报，
2015，43(2):99 － 100．
［10］ 刘颖，郭明晔． 绿原酸的研究进展［J］． 中药材，2012，35(7):
1180 － 1185．
［11］ 何跃，杨松涛，唐建军，等．甘松不同提取成分组合给药预防大鼠急
性胃炎的实验研究［J］．实用医院临床杂志，2011，8(1):27 －29．
·03·
中 医 药 信 息
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2015 年 11 月第 32 卷第 6 期
Vol. 32，No. 6，Nov． 2015
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