全 文 ：图 3 短梗五加果对大鼠自发活动的影响
A. 空白对照组 B. 地西泮组 C. 短梗五加果 810 mg /kg组 D. 短梗五加果 405 mg /kg组 E. 短梗五加果 202. 5 mg /kg组
4 讨论
许多睡眠障碍的患者会服用苯二氮卓类等镇静
催眠药物，长期服用此类药物会产生许多不良反应，
如焦虑、恐慌、妄想、幻觉甚至惊厥等〔6〕。中药治疗
失眠症与镇静催眠的化学药物不同，主要以安神，补
虚泻实，调理阴阳为原则，虚者补其不足，益气养血，
滋补肝肾;实者泻其有余。作用虽不及化学药品强，
但通常可以调整全身状态，并很少发生苯二氮卓类
等镇静催眠药的不良反应。
传统药材刺五加对中枢神经系统的兴奋和抑制
过程均有影响，既可缩短乙醚麻醉过程，又能减少自
主活动，延长睡眠时间，对抗惊厥发生。短梗五加是
我国东北三省道地珍贵中药材品种之一，属药食两
用植物。其根、茎、叶、果均可入药，是刺五加的替代
品〔7〕。在本实验剂量条件下，短梗五加果与巴比妥
类药物具有协同作用，不仅可以延长戊巴比妥钠的
睡眠时间，还可以使给予阈下催眠剂量戊巴比妥钠
的动物进入睡眠状态;可以减少动物的自主活动，降
低运动协调能力，提示其具有中枢抑制作用。本实
验结果提示，短梗五加果可能具有镇静催眠的作用，
但其镇静催眠的作用机制还需进一步研究。
参 考 文 献
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槟榔种子总酚类抗抑郁作用研究
何嘉泳，黄 保，辛志添，陈杰桃，陈晓盈，陈小洁，何细新* ，林 励
(广州中医药大学中药学院，广东 广州 510006)
摘要 目的:研究槟榔种子总酚类物质的抗抑郁作用并探讨其作用机制。方法:连续灌胃给药 15 d，采用小鼠
悬尾、强迫游泳等抑郁模型，以小鼠行为绝望的不动时间作为指标，从动物学行为上考察槟榔种子总酚类抗抑郁活
性;通过 HPLC-ECD法测定小鼠脑组织中单胺类递质肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、五羟色胺
(5-HT)含量。结果:与空白对照组比较，槟榔种子总酚类 320、160 mg /kg 均能显著减少小鼠悬尾和强迫游泳的不
动时间，80 mg /kg 无明显作用;槟榔种子总酚类 320 mg /kg 组与氟西汀组 NE 含量均显著增加，5-HT 含量有所增
加，DA以及 E含量有所减少，但差异无统计学意义。结论:槟榔种子总酚类具有一定的抗抑郁作用。
关键词 槟榔种子;总酚类;抗抑郁;HPLC-ECD;单胺类递质
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2013)08-1331-04
收稿日期:2012-09-12
基金项目:2011 广东省大学生创新实验项目(1057211031) ;国家教育部回国人员科研启动基金(教外司留［2008］890 号) ;广东省高等学
校高层次人才项目(2010［79］)
* 通讯作者:何细新，Tel:020-39358073，E-mail:gogohe@ gmail. com。
·1331·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 8 期 2013 年 8 月
槟榔为棕榈科植物槟榔 Areca catechu L. 的干
燥成熟种子，味苦、辛，性温。归胃、大肠经。有杀
虫、消积等功效，主治绦虫病、蛔虫病、虫积腹痛、积
滞泻痢等病症〔1〕。现代药理研究表明，槟榔提取物
能够抑制单胺类神经递质的活性在小鼠悬尾和强迫
游泳中能明显缩短其不动时间，有明显的抗抑郁作
用〔2〕，而槟榔生物碱无此活性〔3〕。槟榔化学成分复
杂，主要有槟榔碱、槟榔次碱，还含有一些酚类化合
物〔4〕。研究表明，一些酚类化合物能改变脑内单胺
类神经递质的浓度水平而显示一定的抗抑郁活
性〔5〕。为更深入阐述槟榔抗抑郁作用，本研究采用
溶剂法〔6〕、碱提酸沉法提取槟榔种子中的总酚类，
选用小鼠悬尾和强迫游泳试验，从行为学角度观察
槟榔种子总酚类的抗抑郁作用，通过 HPLC-ECD 检
测给药前后小鼠脑组织中单胺类神经递质含量变化
以观察其可能的抗抑郁作用机制。
1 材料与仪器
1. 1 实验动物 SPF级昆明小鼠，雌雄各半，体质
量 18 ～ 22 g，购自广州中医药大学实验动物中心，许
可证号:SCXK(粤)2008-0020。
1. 2 药物与试剂 成熟槟榔果于 2011 年 8 月购
自海南岛，由广州中医药大学中药学院中药鉴定教
研室鉴定为 Areca catechu L 的果实，取其入药部位
种子为实验材料;盐酸氟西汀胶囊(百忧解) (礼来
苏州制药有限公司产品，批号 1981A，规格:20 mg /
片) ;重酒石酸去甲肾上腺素(NE，批号 100169-
199402) ;肾上腺素(E，批号 100154-200503) ;盐酸
多巴胺(DA，批号 100070-200405) ;5-羟色胺盐酸盐
(5-HT，批号 111656-200401) ;以上 5 种对照品均购
自中国药品生物制品检定所(供含量测定用) ;乙腈
(色谱纯，澳洲移民局科技有限公司，批号 57993) ;
辛烷磺酸钠(B8，分析纯，天津市大茂化学试剂厂，
批号 20081229) ;高氯酸(分析纯，广州化学试剂厂，
批号 20070901-1) ;磷酸二氢钠(分析纯，广州化学
试剂厂，批号 20080801-1)。
1. 3 主要仪器 悬尾实验装置自制，木棒上用纸
板隔离成 2 个区，用胶布固定鼠尾;游泳实验装置为
矩形玻璃缸(19. 4 cm × 20. 4 cm) ;钻石牌机械秒表
3 个，上海垒固仪器有限公司;库仑阵列电化学高效
液相色谱仪(美国 ESA 公司:Model 5600A -16 通道
检测器，Model 582 solvent Delivery System，Model 542
自动进样器，Coularray Win 工作站) ;Dionex-Tcc-100
型柱温箱(美国戴安公司) ;Thermo D-37520 型高速
冷冻离心机(德国 Heraeus 公司) ;Phs-25 型 pH 计
(上海精密科学仪器有限公司) ;GenPure 超纯水系
统(德国 TKA公司) ;KQ-500 型超声波清洗器(昆山
市超声仪器有限公司) ;3K 超滤管(PALL 公司) ;
BP211D 电子天平(德国 Sartorious) ;佳美 SK-1 快速
混匀器(江苏金坛市佳美仪器厂)。
2 方法
2. 1 槟榔种子总酚类 将新鲜槟榔种子置于红外
干燥箱中烘干，温度 ＜ 50 ℃。粉碎后(230 g)用
95%乙醇，热回流提取 3 次，时间分别为 2、2、1 h，合
并乙醇提取液旋蒸至干，所得浸膏以无水乙醇溶解，
滴加 20%氢氧化钠溶液，调节 pH 至 14，待析出沉
淀，抽滤;取滤渣，加入适量乙酸乙酯搅拌 10 min 除
去油脂、糖等黏性成分，再次抽滤;滤渣用适量蒸馏
水溶解，抽滤后收集滤液，往其中滴加浓盐酸，调节
pH至 1，冰浴，过滤，滤渣用水洗涤至中性，干燥，即
得总酚类，共 5. 9 g。将成品进行提取物的 LD50的测
定，在有效剂量的范围内，以水溶液将总酚类配制成
高(320 mg /kg)、中(160 mg /kg)、低(80 mg /kg)剂
量，放入冰箱，备用。
2. 2 小鼠悬尾实验(TST)〔7〕 取小鼠 50 只，随机
分成 5 组，每组 10 只。分别为空白对照组(生理盐
水)、阳性对照组(盐酸氟西汀 4 mg /mL)及槟榔种
子总酚类高(320 mg /kg)、中(160 mg /kg)、低(80
mg /kg)剂量组，自由饮水进食灌胃 1 次 /d，0. 2 mL /
只，连续灌胃 15 d，第 1、3、5、7 天给药 1 h 后，将小
鼠尾部距末端约 2 cm处用胶布黏住固定，使其头部
向下悬挂呈倒悬状，离箱底约 5 cm。中间以挡板隔
离小鼠视线。总观察 6 min，前 2 min 为适应时间，
观察后 4 min 内小鼠的不动(小鼠在空中停止挣扎，
或仅有细小的肢体运动)时间。
2. 3 小鼠强迫游泳实验(FST)〔8，9〕 实验前 24 h
进行游泳训练 15 min，禁食不禁水，实验前 12 h 禁
食。第 15 天给药 1 h 后进行游泳实验。将小鼠单
只放入水深 10 cm，水温(27 ± 3)℃ 的矩形容器内，
总观察 6 min，适应 2 min后开始计算后 4 min 内累
计不动(漂浮不动状态，仅露出鼻孔保持呼吸，四肢
偶尔划动以保持身体不至于沉下去)时间。
2. 4 HPLC分析 上述各组小鼠脑组织中 NE、E、
DA及 5-HT 等单胺类神经递质的浓度由本学院实
验中心建立的 HPLC-ECD方法测定〔10〕。
2. 4. 1 色谱条件:色谱柱:Thermo Scientific Syn-
cronics C18(150 × 4. 6 mm，5 μm) ，Phenomenex C18预
柱(KJO-4282，4. 0 × 2. 0 mm) ;流动相 A-B(87 ∶
13) ，A为磷酸二氢钠水溶液(每 1 L 超纯水中含磷
·2331· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 8 期 2013 年 8 月
酸二氢钠 31. 2 g，辛烷磺酸钠 1 g，pH 值 4. 0) ，B 为
已腈，V = 1. 0 mL /min;柱温:35 ℃;自动进样器温
度:4 ℃;检测电压:350 mV，700 mV;进样量 10 μL。
2. 4. 2 蛋白沉淀液的制备:取 4. 29 mL 高氯酸加
水定容至 500 mL 量瓶，得到 0. 1 mol /L 高氯酸溶
液，用 0. 22 μm滤膜过滤后，置 4 ℃冰箱中存放，作
为蛋白沉淀剂的工作液。
2. 4. 3 混合对照品溶液的制备:称取 NE、E、DA、5
-HT 对照品各约 1 mg，精密称定，分别用 0. 1 mol /L
高氯酸定容至 2 mL 的容量瓶中，得质量浓度约为
500 μg /mL 的对照储备液。取以上 4 种储备液各
200 μL 置同一 2 mL 容量瓶中，用 0. 1 mol /L高氯酸
溶液定容至刻度，混匀，即得。
2. 4. 4 样品溶液的制备:各组小鼠灌胃给药，第
15 天给药 1 h 后全部脱颈椎处死，剪开头皮，除去硬
脑膜和头盖骨，小心分离出完整的脑组织，用冰冷的
生理盐水冲洗，以除去附着的血液。用滤纸吸干水
分后称重，放入预冷的玻璃匀浆器中，加入一定量预
冷的 0. 1 mol /L高氯酸溶液做蛋白沉淀剂，转动杆
的空槽里装入预冷的冰水，上下转动充分研磨使组
织匀浆化。将研磨好的组织浆液转入离心管中，涡
旋混匀后置高速冷冻离心机中 4 ℃离心 10 min(10
000 r /min) ，离心后的上清液先过 0. 22 μm 微孔滤
膜，然后用 3K超滤管再次离心，收集滤液于高效液
相进样瓶中，备分析用。
2. 5 统计学处理 对小鼠在 TST 与 FST 中的不动
时间及脑组织中单胺类神经递质的含量统计，采用
SPSS 17. 0 统计软件进行单因素方差分析。其中，
TST 和 FST 不动时间拟用单样本 Kolmogorov-
Smirnov 非参检验检查各组数据是否符合正态分布，
符合后进行组间单因素方差分析;单胺类神经递质
含量拟用多个独立样本非参检验 Kruskal-Wallis 检
验验证存在差异性后，再使用两个独立样本 Mann-
Whitney 检验。结果均以 珋x ± s 表示，P ＜ 0. 05 为差
异有统计学意义。
3 结果
3. 1 槟榔种子总酚类对小鼠悬尾不动时间的影响
结果如表 1 所示。小鼠在悬尾模型中出现的不动
状态反映了其绝望行为，灌胃给予总酚类溶液，抗抑
郁活性从第 3 天开始体现，与空白对照组比较，槟榔
种子总酚类高、中剂量均能显著减少小鼠悬尾不动
时间(P ＜ 0. 01 或 P ＜ 0. 05) ，低剂量无明显作用;与
盐酸氟西汀比较，槟榔种子总酚类高、中剂量对缩短
小鼠悬尾不动时间无显著差异，其作用随给药时间
的增加而表现增强趋势。
表 1 槟榔种子总酚类提取成分对悬尾小鼠不动时间的影响(s，珔x ± s，n =8)
组别 剂量
/
(mg /kg) 第 1 天 第 3 天 第 5 天 第 7 天
空白对照组 － 62. 42 ± 31. 36 71. 00 ± 30. 07 78. 87 ± 11. 36 99. 25 ± 18. 42
盐酸氟西汀组 40 47. 57 ± 20. 93 29. 62 ± 13. 96＊＊ 47. 75 ± 28. 38＊＊ 50. 37 ± 16. 16＊＊
槟榔种子总酚类组 320 55. 14 ± 10. 25* 32. 75 ± 21. 10＊＊ 51. 50 ± 17. 02＊＊ 53. 62 ± 28. 37＊＊
160 35. 00 ± 10. 90 43. 87 ± 25. 65* 47. 25 ± 20. 90＊＊ 69. 00 ± 26. 02＊＊
80 64. 42 ± 14. 08 76. 37 ± 21. 05 67. 62 ± 9. 84 62. 37 ± 22. 30＊＊
注:与空白对照组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
3. 2 槟榔种子总酚类对小鼠强迫游泳不动时间
的影响 结果如表 2 所示。与空白对照组比较，
氟西汀组及槟榔种子总酚类高、中、低剂量组小鼠
游泳的不动时间均显著缩短(P ＜ 0. 01 或 P ＜
0. 05)。其中槟榔种子总酚类高、中剂量组效果与
氟西汀相当。
3. 3 槟榔种子总酚类对小鼠脑组织中单胺类神经
递质含量的影响 结果如表 3 所示，与空白对照组
比较，槟榔种子总酚类高剂量组与氟西汀组的 NE
含量均显著增加，槟榔种子总酚各组 E、DA 及 5-HT
含量有所减少，但均无显著性差异。
表 2 槟榔种子总酚类对小鼠强迫游泳
不动时间的影响(珔x ± s，n =10)
组别 剂量 /(mg /kg) 不动时间 / s
空白对照组 － 123. 90 ± 44. 33
盐酸氟西汀组 40 65. 70 ± 22. 95＊＊
槟榔种子总酚类组 320 58. 43 ± 26. 20＊＊
160 59. 56 ± 28. 70＊＊
80 92. 33 ± 34. 55*
注:与空白对照组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
·3331·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 8 期 2013 年 8 月
表 3 槟榔种子总酚类提取物对小鼠脑组织单胺类神经递质含量的影响(μg /g，珔x ± s，n =10)
组别 剂量
/
(mg /kg) NE E DA 5-HT
空白对照组 － 0. 0093 ± 0. 0047 1. 2541 ± 0. 2667 2. 4455 ± 0. 6391 0. 3531 ± 0. 1551
盐酸氟西汀组 40 0. 0173 ± 0. 0058＊＊ 1. 0927 ± 0. 2784 1. 8374 ± 0. 5297* 0. 2951 ± 0. 0795
槟榔种子总酚类组 320 0. 0160 ± 0. 0061＊＊ 0. 9621 ± 0. 3227 2. 0537 ± 0. 5691 0. 3024 ± 0. 1067
160 0. 0077 ± 0. 0028 1. 2519 ± 0. 1598 2. 2837 ± 0. 4796 0. 2939 ± 0. 0906
80 0. 0086 ± 0. 0039 1. 3549 ± 0. 2466 2. 2474 ± 0. 7468 0. 2763 ± 0. 1444
注:与空白对照组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
4 讨论
在悬尾实验中，与空白对照组比较，槟榔总酚类
提取物 320、160 mg /kg均能显著地缩短小鼠不动时
间，效果与阳性对照组(盐酸氟西汀组)相当。通过
采用连续多次给药，发现从第 3 天开始，槟榔种子总
酚类已表现出抗抑郁活性，连续给药能更加显著地
缩短小鼠不动时间，表现出更强的抗抑郁作用。在
强迫游泳试验中，与空白对照组比较，320、160 mg /
kg剂量均能显著地缩短小鼠不动时间，同样表现出
明显抗抑郁作用;同时，80 mg /kg 组在 TST 和 FST
中未表现出明显的抗抑郁作用，可能与其浓度过低，
无法达到有效血药浓度有关，即药效与浓度呈正相
关。
单胺类神经递质与抑郁症的关系十分密切，许
多抗抑郁药通过影响单胺类递质的重摄取或代谢过
程来发挥抗抑郁作用〔11〕。但脑内多种单胺类神经
递质之间可以相互转化，此类神经递质一般不稳定，
因此，对样品的处理和储存应在低温下进行。实验
结果显示，连续灌胃给药槟榔种子酚水溶液后，高、
中、低 3 个剂量组的小鼠脑组织中 NE、5-HT含量有
所升高，E、DA的含量有所降低;其中 E、5-HT 量效
关系一致，但 NE、DA 的含量变化和剂量不呈一致
关系，出现 NE 的低浓度组的含量高于中浓度组，
DA的低浓度组的含量低于中浓度组。这种量效不
一致现象的出现可能与各组小鼠的个体差异导致对
药物的 ADME 不同有关。前期试验已显示槟榔酚
类成分具有一定的抗抑郁作用，本研究中高浓度组
可以显著提高小鼠脑组织中 NE 浓度，此机制可能
与抗抑郁作用相关。实验结果基本证明了槟榔种子
总酚类提取物可能通过影响脑组织中单胺类神经递
质的浓度而具有明显抗抑郁作用，剂量 80 ～ 320
mg /kg间，呈现一定的量效关系，为槟榔的开发利用
提供了理论依据。
参 考 文 献
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