全 文 ：中国临床药学杂志 年第 卷第 期
论 著
小叶黑柴胡多糖对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响
武 剑 、 蒋 龙、章蕴毅、 力 弘、 陈道峰 复旦大 学 药 学院 药 理 学教研 室 生 药 学教研 室 ， 上海
【摘要 】 目 的 研究小叶黑柴胡多糖 （ 对巨噬细胞免疫功能的影响 。 方法 收集 小 鼠腹腔巨噬细胞 用不同质量浓
度的 溶液 、 、 刺激 检测巨噬细胞吞噬 、趋化和分泌一氧化氮 的功能 。 结果 各个浓度
组均能显著促进巨噬细胞吞睡 和趋化作用 但对巨噬细胞分泌 无明显影响 肌 呷丄― 可明显
抑制胞多味诱导的巨味细胞分泌 。 结论 可增强巨噬细胞免疫功能 但能抑制脂多糖诱导的炎症介质分
泌》
【关键词 】 柴胡多糖 ； 巨噬细胞 ； 吞噬 ； 趋化 ； 一氧化氮
【文献标志码 】 【文章编号】
，
’
【 】
柴胡是我国传统和常用中药 ，其味辛苦凉 ，有疏
散退热 、疏肝解郁、升举阳气之功效 ，常用于治疗感
冒发热 、胸满胁痛 、 口 苦耳聋 、头晕 目 眩等症状 。
小叶黑柴胡 主要
分布在我 国西北地区 。 近代药理学研究 表明 ，
小叶黑柴胡粗皂苷是柴胡抗炎及免疫调节作用的活
性成分 ，但目前关于其多糖成分对机体免疫功能影
响的研究报道较少。 我们前期的动物整体实验结
果 表明 ，小叶黑柴胡多糖
， 具有一定的免疫调节功能及抗炎药效 ，可
用于治疗 自身免疫性疾病 如系统性红斑狼疮 及炎
症疾病 如急性肺损伤 。 而巨噬细胞是机体的非特
【基金项 目 】 国家自然科学基金 編号 科技部 “重大新药创侧 ”科技专项 编号 上
海市艘基硇研究妨項目 癩号
【作者蓠介 】 武 剑 丨男 ，在读磺士研究生。 研究方向 ： 免《琉理学
【通讯作者 】 幸龜毅 教授 碩士生导师 。
中国临床药学杂志 年第 卷第 期
异性免疫细胞 ，其免疫调节作用的发挥是通过抗原
呈递、趋化 、吞噬功能和分泌抗病原介质如一氧化氮
而实现的 ，是机体抵抗外来病原微
生物感染的第一道防线 ，在天然免疫系统中起重要
作用 ； 因此 ， 的抗炎免疫作用可能与巨噬细胞
有关 。 我们通过研究 对小鼠腹腔巨噬细胞主要
的免疫功能 即吞噬 、趋化和分泌功能的影响 ， 探讨
其免疫调节作用的可能机制 。
材料与方法
材料 含 小鼠 ，体质量 购 自上海
斯莱克实验动物有限公司 许可证号 沪 ）
，饲养于清洁环境 ，给予饲料和水喂养 。
批号 由本院生药学教研室陈道峰
教授提供 ，制备方法见文献 ；细胞 培
养液 （ 吉 诺生 物 医 药 技 术 有 限 公 司 ， 批 号
；胎牛血清
批号 荧光标记
批号 ；硫乙醇酸盐培养基
上海中科昆虫生物技术开发有限公 司 ， 批号
；细菌脂多糖 菌株系
： ， 公司 ，批号 ； 孔
培养板 （趋化小室上 、下室间隔 孔径聚碳酸酯
微孔滤膜 ， 批号 ， 牛血清 白蛋 白
，上海源聚生物科技有限
公司 批号 〉 。 萘乙二胺盐酸盐 、磺胺 （ 国药
集团化学试剂有限公司 。
溶液的配制
溶液 精密称取 ， 紫外照射
，加人 培养液 超声 溶
胀过夜 。 次 日再加人 培养液 ， 超声
，使其完全溶解 ，得到 储备液 。 用
前以 培养液稀释成质量浓度分别为 、
、 的溶液 实验时按 份 份
培养基加人培养体系 中 ，使 终质
量浓度分别为 、 、 。
荧光标记 ￡ 溶液 精密称取荧光标记
， 加入 培养
基 ，超声 使之溶解 ，即得 的 溶
液 （约含 个 颗粒 。 用前取 加
样 ，使 颗粒数 ：细胞数《 。
溶液 精密称取 紫外照射
加人 培养液后超声 ：
溶胀过夜 。 次 日再加人 培养液并
超声 至全溶 ， 得到 — 的 。 用前以
培养基稀释 倍至
、加样时按体积比 加人培养体系中 ， 使其终
质量浓度为 。
试剂 液 ：称取 萘乙二胺盐酸
盐 ， 以 三蒸水溶解 液 ： 称取 磺胺 ， 以
磷酸溶液 溶解 。 临用时 ， 液与 液根
据所需体积以 混合即得 试剂 。
小鼠腹腔巨噬细胞的收集 小鼠一次性腹腔
注射含 硫乙醇酸盐培养基的生理盐水 （每只
， 后颈椎脱臼处死 ， 浸人 乙醇中静置
，将 预冷的 培养液 缓慢注人小
鼠腹腔 ，轻揉腹部 次 ， 回抽腹腔灌洗液 ，
离心 弃上清 用 培
养基重悬后调整细胞浓度备用 。
巨噬细胞吞噬功能的检测 参照
等 的方法 ，调整细胞密度为 个 ，加人
到 孔细胞培养板中 ，每孔 培
养 培养液洗 遍洗去非贴壁细胞 ， 同
时加人不同浓度的 溶液和荧光标记的
溶液 ，细胞吞噬 。 弃上清 ，用 多聚甲醛室
温固定 溶液洗涤 次 。 荧光显微镜观
察并拍照 每孔随机选取 个视野 细胞内有绿色荧
光信号的巨噬细胞视为吞噬了 的细胞 。 每
个实验组随机选取 个细胞 ，计数吞噬 的
巨唾细胞数和巨噬细胞 内所吞噬的 数 。 吞
睡结果以吞睡百分率 和吞唾
指数 表示 。 个巨 唾
细胞中吞噬了 的细胞数
个 巨 噬细胞 中吞噬 了 的 ￡： 总数
本实验重复 次 。
巨噬细胞趋化功能的检测 参照
等 的方法 巨噬细胞收集后用含 的
培养液重悬细胞 ，调整细胞密度为 炉 个
。 向 趋化小室上室每孔加入
巨噬细胞悬液 ，下室加入不同浓度的 溶液。 将
趋化小室轻轻振荡使细胞分布均勻 置于 、
培养 后取出小室 ，吸弃上室内细胞悬液 ，用
棉花擦去上室膜上未迁移细胞 ， 洗涤 次后用
戊二醛室温固定 。 弋预热的 洗净
戊二醒后风干 ， 然后用 结晶紫 甲醇染色
。 预热的 清洗小室 次 ，除去多余染
料 ，待小室彻底干燥后 显微镜下计数迁移到小室下
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表面的巨噬细胞数 。 每个小室随机观察 个视野 。
趋化结果 以趋化指数 （ 表 。
给药组 个视野下观察到 的 巨噬细胞数 才
照组 个视野下观察到的巨噬细胞数 。 本
实验重复 次 。
巨噬细胞分泌功能的检测 因 在体内极易
氧化生成 ，在酸性条件下 与重氮盐磺胺发
生重氮反应 ，并生成重氮化合物 ，又进一步与萘乙二
胺发生偶合反应 该反应生成的产物 浓度与
浓度具有线性关系 。 因此 ， 通过 比色检测得到
的 浓 度 即可 明确 水平 。 参照
等 的方法 调整细胞密度为 乂 个 ‘虬 ， 孔
细胞培养板每孔 培养
培养液洗 遍洗去非贴壁细胞 。 不同浓度的
单独作用或与 联合作用于巨噬细胞 ，每孔分
别取细胞培养上清 斗 ，加人 试剂 ，混
勻后室温放置 使其充分反应 检测吸光
度 。 以 溶液建立标准曲线 ，确定各实验组培养
上清 水平 。 本实验重复 次 。
统计学处理 采用 统计分析软
件 （ 对数据进行分析处理 。 所有
数据以 ± 表示 ，组间数据以 进行统计分
析后 ，以 ’ 进行组间 比较 。 表
示差异有统计学意义 。
结果
对巨 噬细胞吞噬功能的影响 正常条件下
巨噬细胞吞噬能力不强 ； 与之相 比 ， 各个质量浓
度 、 、 — 组均可促进巨 噬细胞吞 噬
￡ 的 和 ，且呈剂量依赖性 ，说
明 可以提高巨噬细胞的吞噬功能 （图 。
图 对巨噬细胞吞噬功能的影响
： ： ：
中国临床药学杂志 年第 卷第 期
图 对巨噬细胞分泌 功能 的影响
：
讨论
中药多糖是一类存在于动植物和微生物中 的天
然高分子化合物 ，具有重要的生物功能和珍贵的药
用价值 。 我们之前的研究表明 具有 良好的
体外抗补体活性 ，可 以改善并治疗 自 身免疫性疾
病和炎症疾病 ；但关于离体实验中 对 巨噬细胞
免疫功 能 的影 响 尚未见报道 ， 因 此本实验研究 了
对小 鼠腹腔巨噬细胞功能的调节作用 。
巨噬细胞是免疫系统中一类具有防御和调节功
能的细胞 ，它可 以通过吞噬外来异物或抗原 、趋化和
分泌作用来进行免疫调节 。 炎症反应期 间的病原体
和细胞因子等会诱导结缔组织内静止的 巨噬细胞活
化 ，并最终分化成熟为活化的巨噬细胞 参与机体的
各种炎症 、免疫应答及代谢调节过程 。 当机体遭
受病原微生物侵袭时 ，巨噬细胞会吞噬 、加工并处理
抗原物质 ，将抗原呈递给淋 巴细胞 使其产生抗体或
淋巴 因子 ， 杀灭靶细胞 。 另外 ， 巨噬细胞的趋化
功能反映了其迁移能力 ， 是影响巨 噬细胞在生理和
病理状况下发挥功能的重要因素 。 巨噬细胞迁移到
图 对巨噬细胞趋化功能 的影响
：
对巨噬细胞趋化功能的影响 与正常对照
组相比 各个质量浓度 （ 、 、
均可显著提高巨噬细胞的 ，对巨噬细
胞趋化能力的提高百分率分别达 、 和
， 表明 可 以增 强巨 噬细胞的趋化功 能
图 。 尽管 组对巨噬细胞趋化能
力 的提高幅度小于 组 ，但两组间差异
无统计学意义 。
对巨噬细胞分泌功能的影响 与正常对照
组相比 ， 各个质量浓度 （ 、 、
对 巨噬细胞分泌 的水平未见明显影响 ，而
— 则显著促进 巨 噬细胞分泌
明显抑 制 诱导 的 产生
戶 。 表 明 可 以抑制 诱导的 巨 噬细
胞炎症介质的释放 图 。
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感染或受损部位是细胞炎症反应的一个重要部分。
本研究显示 均明显增强 了
巨噬细胞吞噬 的能力 ， 且呈剂量依赖性 （组
间分析 ， 。 另外 ，本实验所选用的 个
剂量组也显著提高了 巨噬细胞的趋化功能 但
和 间差异未见有统计学意义 这可能
是因为 在 内对细胞趋化的影响
较温和 ，而未表现出明显的量效关系 当 质量浓
度达到 时 ，其增强细胞趋化作用的药效
则显著提升 （组间分析 ， 。 可增强细
胞吞噬和趋化作用的实验结果证明 了 具有促进
巨噬细胞对外来异物产生反应和清除的功能。
另一方面 是革兰阴性菌细胞壁的主要成
分 是导致炎症反应的主要根源之一 。 巨噬细胞被
激活后可分泌多种细胞介质 ， 如 、细胞因子
和趋化因子 继而引起机体炎症反应 。 是 精
氨酸在诱导型一氧化氮合酶 （ 催化下产生的
一种极不稳定的生物 自 由基 。 分子小 结构简
单 ，但其作用广泛 ，在心脑血管 、神经系统 、免疫两节
等方面均有十分重要的生物学作用 。 活化的巨噬细
胞释放的 可以通过抑制靶细胞线粒体中三羧酸
循环 、电子传递和细胞 合成等途径 发挥杀伤
靶细胞的效应 ，参与炎症反应 。 本研究结果表明
对巨噬细胞分泌 无明显影
响 但 、 却能显著抑制 诱导
的 分泌 。 鉴于 是 诱导的 表达增高
而生成的 ， 抑制 分泌的分子机制很可能与其
能影响 诱导的 蛋白表达有关。 总之 ，本部
分实验体现了 还具有一定的抗炎作用 。
综上所述 ，本实验通过研究 对巨噬细胞吞
噬 、趋化和分泌功能的影响 ，证明了其既能促进巨噬
细胞清除外来异物又可抑制 诱导的炎症介质分
泌的免疫调节作用 。 就 目前关于植物多糖免疫功能
的研究而言 报道较多的主要是多糖提高或激活 巨
噬细胞免疫反应的作用 特别是提高细胞毒活性来
杀灭肿瘤细胞及病原微生物 ，促进吞噬 促进活性氧
簇 、 、细胞因子和趋化因子分泌的功能 。 然而
很少多糖还具有抑制炎症反应的作用 。 因此 ，本实
验所证实的 的免疫调节功能为其更为广泛的药
理学应用前景提供了有力 的理论依据和实用价值 。
【参考文獻 】
国家药典委员会 中华人民共和 国药典 北京 中国医药科技
出饭社 ，
赵玉珍 ， 陶上乘 ， 邢永春 等 小叶黑柴胡的药理作用研究
中药材 ，
赵玉珍 ， 陶上乘 ， 王英华 ，等 小叶黑柴胡药理作用的进一步研
究 中药材 ，
￡
；
：
王铮 ， 程小芹 ， 徐输 等 小叶黑柴胡总多糖对小鼠免疫功能的
影晌 中国临床药学杂志
’
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